豇豆中10 种农药残留快速检测技术研究与应用

赵 颖, 虞 淼, 张啸涛, 寿林飞*,

(1.浙江省植保检疫与农药管理总站，杭州 310009；2.杭州佰盛汇星生物科技有限公司，杭州 311112)

豇豆Vigna unguiculata(Linn.) Walp 在世界范围内、特别是热带和亚热带地区被广泛种植，全世界豇豆种植面积达1250 万hm2[1]，同时作为我国重要的“菜篮子”产品[2]，与农业生产和人民群众日常生活息息相关。由于豇豆上病虫害多发、用药频繁，花果同期、采摘间隔短，加之以小农户分散生产为主，豇豆农药残留问题突出[3]，连续多年监测合格率始终偏低，南方省份农药残留问题尤为突出[4]。2023 年农业农村部办公厅发布的《豇豆农药残留突出问题攻坚治理方案》文件[5]中指出，豇豆中存在的突出重点问题包括禁用农药检出和常规农药超标。2022 年，农业农村部鼓励食用农产品批发市场开办者对“三棵菜”(豇豆、韭菜、芹菜)中克百威、三唑磷等禁限用农药，腐霉利、灭蝇胺等易超标的常规农药残留开展针对性速测。同年，浙江省农业农村厅公开征集豇豆上克百威等7 种农药的快速检测产品[5]。综合以上文件数据，本研究选取了豇豆中克百威等10 种农药为检测对象，旨在为我国豇豆农产品安全提供快速筛查方案。

GB 2763—2021 《食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量》[6]和GB 2763.1—2022《食品安全国家标准 食品中2, 4-滴丁酸钠盐等112 种农药最大残留限量》[7]规定，豇豆上的农药最大残留限量(MRL)分别为克百威0.02 mg/kg、三唑磷0.05 mg/kg、毒死蜱0.02 mg/kg、啶虫脒0.4 mg/kg、异菌脲2 mg/kg(参考菜豆)、吡唑醚菌酯2 mg/kg(参考叶用莴苣)、多菌灵0.5 mg/kg(参考菜豆)、腐霉利5 mg/kg(参考茎用莴苣)、灭蝇胺0.5 mg/kg 和甲氰菊酯1 mg/kg(参考青花菜)。豇豆中农药残留检测分析方法主要有液相色谱法[8]、气相色谱法[9]、气相色谱-质谱联用法[10-12]、液相色谱-质谱联用法[13-16]、液相-飞行时间质谱联用法、气相-飞行时间质谱联用法[17]和增强拉曼光谱法[18-20]等。基于生物反应或特殊介质的快速检测技术的相关报道主要集中于金纳米探针法[21-22]、免疫荧光法[23-24]、分子印迹法[25-26]和电化学传感器[27]，研究的主要农药类别为有机磷[23,28-29]、氨基甲酸酯[30]、拟除虫菊酯[31]和新烟碱类农药[32-33]。免疫快速检测在现场快速检测领域具有明显优势，开发免疫快速检测方法，应用于现场快速筛查豇豆中多种农药残留超标情况，有助于科学评估豇豆残留水平与膳食风险，为我国农产品安全保驾护航。

目前，关于豇豆中农药多残留的免疫快速检测方法报道较少，本研究采用免疫快速检测技术，开发了豇豆中常用10 种农药的免疫层析试纸，优化了各项参数指标，评估了10 种农药快速检测方法的灵敏度和正确度，并应用于豇豆实际样品的抽样检测，综合评价快速检测方法的实用性与准确性，旨在为豇豆中农药残留的快速筛查提供技术支持。

1 材料与方法

1.1 供试材料

Fresco21 低温高速离心机(美国赛默飞世尔科技公司)；Nano-300 超微量核酸蛋白测定仪 (杭州奥盛仪器有限公司)；BSA323S 千分之一天平、BSA224S 万分之一天平 (德国赛多利斯公司)；超声波清洗器(苏州昆山超声仪器有限公司)；Milli-Q超纯水仪 (美国密理博公司)；恒温磁力搅拌器(美国沃特世公司)；Vortex-5 旋涡混合器 (海门市其林贝尔仪器制造有限公司)；喷金划膜仪(杭州峰杭科技有限公司)；自动切条机(杭州韩感科技有限公司)；Waters TQ-S 高效液相色谱-串联质谱仪(美国沃特世公司)；手持便携式读数仪(苏州和迈精密仪器有限公司)。

克百威、3-羟基克百威、丁硫克百威、异丙威、涕灭威、甲萘威、灭多威、三唑磷、二嗪磷、毒死蜱、甲基毒死蜱、对硫磷、丙溴磷、辛硫磷、啶虫脒、吡虫啉、氯噻啉、噻虫嗪、噻虫胺、呋虫胺、烯啶虫胺、异菌脲、乙烯菌核利、腐霉利、吡唑醚菌酯、醚菌酯、嘧菌酯、肟菌酯、多菌灵、甲基硫菌灵、灭蝇胺、敌菌灵、甲氰菊酯、氯氰菊酯、高效氯氰菊酯、氟氯氰菊酯、高效氟氯氰菊酯、氯氟氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、氰戊菊酯、氟氰戊菊酯和溴氰菊酯标准品(德国Dr.E)；克百威、三唑磷、毒死蜱、啶虫脒、异菌脲、吡唑醚菌酯、多菌灵、腐霉利、灭蝇胺和甲氰菊酯的包被抗原和相应的抗体(杭州佰盛实验室)；羊抗鼠二抗(北京博奥龙)；甲醇、乙腈(色谱纯，德国Merck)；盐酸(国药集团化学试剂有限公司)；金标优化剂SDS-L(深圳逗点)；聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、碳酸钾、乙酸铵和二氯甲烷(上海国药)；磷酸缓冲液(PBS)(实验室自制)；氨基净化柱(美国 Waters)；CN140 醋酸纤维膜和8964 玻璃纤维膜(美国Sartorius)；AN3 吸水垫和PVC 衬板(南京微测)；牛血清蛋白(BSA，MW67000)、兔抗鼠IgG、三水合氯金酸和柠檬酸三钠(美国Sigma)；豇豆样品(浙江省各地区田间)。

1.2 试验方法

1.2.1 金标抗体与抗原优化组合 根据经典的竞争型抗原抗体免疫反应原理建立金标免疫层析试纸方法，采用柠檬酸三钠还原氯金酸法制备30 nm粒径的胶体金溶液[34]，以此胶体金纳米粒子静电吸附10 种农药抗体，形成10 种胶体金标记抗体作为免疫识别探针。

金标免疫识别探针的制备：准确量取100 mL质量分数为0.01%的三水合氯金酸水溶液在恒温磁力搅拌器上搅拌加热至沸腾，快速加入1.5 mL质量分数为1%柠檬酸三钠水溶液，在100 ℃条件下继续搅拌，加热反应3 min，得到酒红色胶体金溶液，冷却后备用。分别取1 mL 胶体金溶液至6 个1.5 mL 低吸附尖底聚乙烯离心管中，分别用0.2 mol/L 的碳酸钾调节pH 值至6.0、6.5、7.0、8.0、8.5 和9.0，分别逐滴加入0.1 mL 50 μg/mL的农药抗体，涡旋混合均匀后，静置1 h；加入0.1 mL 含质量分数10% BSA 和1% PEG 的0.01 mol/L PBS 溶液，涡旋混合均匀，静置0.5 h；于4 ℃、10000 r/min 条件下离心20 min，弃上清液；用0.25 mL 含5% 蔗糖、1% BSA 和0.1% PEG 的0.01 mol/L PBS 溶液涡旋混匀，得到金标免疫识别探针，用于免疫层析试纸测试。通过空白和农药标准溶液添加样品的测试线显色情况筛选出最适pH 值(显色判断规则：阳性样品的测试线显色最深，同时阴性样品的测试线显色最浅)。

筛选得到最适pH 值后，以同样的方法筛选最适抗体稳定量，将胶体金溶液用0.2 mol/L 的碳酸钾调节至最适pH 值 (如pH 6.5)，分别取1 mL pH 6.5 的胶体金溶液至6 个1.5 mL 低吸附尖底聚乙烯离心管中，分别逐滴加入0.1 mL 质量浓度为10、20、40、80、120 和160 μg/mL 的农药抗体，其他步骤同上述金标免疫识别探针制备过程，最后筛选得到最适抗体稳定量。

用筛选得到的最适pH 值和最适抗体稳定量，制备10 种金标免疫探针，用于检测线(T 线)和质控线(C 线)测试。

T 线和C 线优化：用划线稀释液配制农药包被抗原和羊抗鼠二抗溶液，农药包被抗原用于T 线划膜，羊抗鼠二抗用于C 线划膜。设置T 线质量浓度为0.1、0.25、0.5、0.75 和1.0 mg/mL，C 线质量浓度为0.1 mg/mL。喷金划膜仪完成试纸大板NC 膜上的T 线和C 线划膜后，将膜材料置于抽真空恒温干燥箱中37 ℃干燥2 h，完全干燥后将试纸大板切成3 mm 小条，用于筛选测试。测试时每个试纸条的金标免疫探针用量为5～10 μL，以显色为筛选标准，空白对照显色为B3的T 线浓度为最适浓度(将红色显色分为8 档，B1～B8，参见表1，B1 表示红色显色最深，B8 表示显色最浅（即不显色），此判断标准由实验室内部制定)，同时结合农药标准溶液测试显色，T 线显色为B3，筛选得到最适T 线抗原浓度。确定T 线浓度后，根据相应的C 线显色情况，适当调整C 线浓度，使C 线显色达到B3 即与T 线一致。最终优化得到10 种金标免疫层析试纸的T 线和C 线组合。

表1 T 线和C 线显色比色表Table 1 Color comparison table for T and C lines

1.2.2 金标试纸的组装和制备

金标试纸封闭体系：选择合适的封闭配方和封闭方式，有利于控制层析速度和防止非特异吸附。本研究采用间接封闭模式，将含0.5%金标优化剂、0.25% BSA、0.25% PVP 及 2%蔗糖(质量分数)的0.01 mol/L的PBST (指含0.05% 吐温-20体积分数的PBS) 溶液均匀吸附于样品垫中，于37 ℃条件下真空干燥，制成具备间接封闭性能的样品垫。

金垫和金杯制备方法：金标试纸分为两种反应模式，第1 种为金垫法，将金标探针均匀吸附于玻璃纤维膜上，于37 ℃条件下真空干燥2 h，制成金垫。第2 种为金杯法，将金标探针加入96 孔板微孔中，于37 ℃条件下真空干燥2 h，干燥后加密封盖，制成金杯。

金标试纸的主要组成部件为衬板、样品垫、金垫、NC 膜、T 线、C 线和吸水垫，其组装过程如图1 所示：T 线(5)和C 线(6)分别包被于NC膜(2) 上，并根据先后顺序，将NC 膜、吸水垫(7)、金垫(4-1)(若使用金杯法则不需要金标垫，采用金杯(4-2)、样品垫(3) 依次粘于衬板(1)上。将组装好的试纸切成3 mm 宽的试纸条，于室温干燥柜中保存并控制相对湿度为30%以下。

图1 金标试纸组装示意图Fig.1 Schematic diagram of the composition of the gold immunostrips

1.2.3 免疫层析试纸性能测试 根据比色判断金标试纸条对标准溶液的检出限测试结果，通过手持便携式读数仪识别试纸检测区域显色，从而判定农药残留情况。

准确量取100 μL 标准溶液滴加于金标试纸样品孔(S)，反应10 min 时判断T 线显色情况。T 线显色等于、深于或略浅于C 线表示样品中相应农药的浓度低于检出限(阴性)；T 线不显色表示样本中相应农药的浓度等于或高于检出限(阳性)。显色判断图示见图2。

图2 金标试纸显色判断图示Fig.2 Color rendering diagram for gold immunostrips judgment

1.2.4 快速检测前处理方法 本研究在仪器参比方法的前处理方法基础上，简化了前处理试剂与提取方法。由于层析试纸的NC 膜对有机溶剂不耐受，通用的乙腈、甲醇和乙酸乙酯等溶剂不能直接用于金标试纸条测试，因而选择了20%甲醇-0.01 mol/L PBS 为提取试剂，可有效保证金标试纸的测试效果。

准确称取1.0 g 匀浆豇豆样品至15 mL 离心管中，加入5 mL 20%甲醇-0.01 mol/L PBS，涡旋振荡30 s，于4000 r/min 下离心3 min；取上清液，根据不同农药的检测要求，用20%甲醇-0.01 mol/L PBS 进行不同比例的稀释，稀释后取100 μL 用于金标试纸快速检测。检测流程示意图见图3。

图3 豇豆快速检测流程示意图Fig.3 Diagram of cowpea rapid detection process

1.2.5 仪器比对验证方法 参考GB/T 20769—2008《水果和蔬菜中450 种农药及相关化学品残留量的测定液相色谱-串联质谱法》[35]建立豇豆上10 种农药的高效液相色谱-串联质谱(HPLCMS/MS)分析方法，并在此基础上优化方法。

样品制备、提取与净化：准确称取 20 g 豇豆匀浆样品(精确至0.01 g)于250 mL 烧杯中，加入40 mL 乙腈，用高速匀浆机在15 000 r/min 匀浆提取1 min，用布氏漏斗抽滤液倒入装有5 g 氯化钠的100 mL 具塞量筒中，盖上塞子，剧烈振荡1 min 后于室温下静置30 min；吸取10 mL 有机相，放入50 mL 烧杯中，置于80 ℃水浴锅中，并向杯内缓缓通入氮气，将乙腈蒸发至近干；加入2.0 mLV(甲醇) :V(二氯甲烷) = 1 : 9溶液溶解，盖上铝箔，待净化。将氨基净化柱用4.0 mLV(甲醇) :V(二氯甲烷)=1 : 9 溶液淋洗，当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即加入上述待净化溶液，收集洗脱液，用4.0 mLV(甲醇) :V(二氯甲烷)=1 : 9溶液淋洗烧杯后过柱，合并洗脱液；将洗脱液氮吹至近干，用甲醇定容至2.0 mL，超声溶解后加入超纯水定容至5.0 mL，混匀，过0.2 μm 滤膜，待液相色谱-串联质谱测定。

液相色谱-串联质谱测定条件：Waters C18不锈钢色谱柱(2.1 mm × 100 mm，2.6 µm)；流动相A 为5 mmol/L 乙酸铵水溶液，B 为甲醇；流速0.3 mL/min。流动相梯度洗脱条件：0～2min，80%～20% A；＞ 2～4min，20～5% A；＞ 4～6 min，5% A；＞ 6～6.1 min，5%～80% A； ＞ 6.1～8min；80%。柱温40 ℃；进样量1 μL。电喷雾(ESI)离子源；正离子和负离子同时扫描方式；ESI 正离子电压5000 V，ESI 负离子电压 -4500 V；离子源温度500 ℃；辅助加热气379 kPa；气帘气压力241 kPa；监测离子对、去簇电压和碰撞能见表2。

表2 10 种农药的监测离子对和电压参数Table 2 Monitoring ion pairs and voltage parameters of 10 pesticides

1.3 方法评价

1.3.1 标准溶液检出限评价 采用20% 甲醇-0.01mol/L PBS 配制10 种农药的0.001～1 mg/L 梯度标准溶液，采用相应的农药金标免疫层析试纸检测标准溶液。用1.2.3 节方法判断检测结果，以阳性样本的最小标准溶液质量浓度作为检出限。

1.3.2 豇豆中10 种农药检出限评价 向空白豇豆样品中独立添加10 种农药的梯度标准溶液，配制成基质匹配标准溶液，样品充分混匀并静置2 h后，按照1.2.4 节方法进行提取，提取液用于相应农药金标试纸检测。

1.3.3 交叉反应率评价 基于抗原抗体的免疫识别特性，特定农药抗体对结构类似物可能存在一定的交叉反应。10 种农药的结构类似物(以目标农药—结构类似农药表述)：克百威—3-羟基克百威、丁硫克百威、异丙威、涕灭威、甲萘威、灭多威；三唑磷—二嗪磷、毒死蜱、甲基毒死蜱、对硫磷、丙溴磷、辛硫磷；毒死蜱—甲基毒死蜱、三唑磷、二嗪磷、对硫磷、丙溴磷、辛硫磷；啶虫脒—吡虫啉、氯噻啉、噻虫嗪、噻虫胺、呋虫胺、烯啶虫胺；异菌脲—乙烯菌核利、腐霉利；吡唑醚菌酯—醚菌酯、嘧菌酯、肟菌酯；多菌灵—甲基硫菌灵；腐霉利—乙烯菌核利、异菌脲；灭蝇胺—敌菌灵；甲氰菊酯—氯氰菊酯、高效氯氰菊酯、氟氯氰菊酯、高效氟氯氰菊酯、氯氟氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、氰戊菊酯、氟氰戊菊酯、溴氰菊酯。用20% 甲醇-0.01 mol/L PBS 溶液配制结构类似农药的0.01～10 μg/mL 梯度标准溶液，用相应金标试纸检测结构类似农药的标准溶液，测出相应检出限，最后根据目标农药检出限与交叉反应农药检出限按公式(1)计算交叉反应率(CRR)。

1.3.4 准确性评价 按照1.2.4 节的方法提取豇豆样品，得到豇豆基质溶液，进行HPLC-MS/MS 分析，外标法定量，确认豇豆中未检出10 种农药，即空白豇豆样品。用该空白基质溶液将标准工作溶液稀释成0.01、0.1、0.2、0.5 和1 mg/L 的系列基质匹配标准溶液。以农药的质谱响应峰面积为纵坐标(y)，质量浓度为横坐标(x)，绘制基质匹配标准曲线。

向豇豆空白样品中分别添加0、0.1、0.5、1、2 和10 倍检出限(mg/kg) 6 个水平的10 种农药标准溶液，每个水平重复5 次，按照1.2.3 节和1.2.4节的方法进行样品检测分析，每个样品检测3 次。检测结果用阳性和阴性表示，结果用于假阳性率、假阴性率和准确率的评价，统计方法参考文献[36]。

1.3.5 不同检测方法对实际样品的比对测试 选取浙江省36 个县级市或区的田间豇豆样品各1 份，用HPLC-MS/MS 分析方法(1.2.5 节)定量检测10 种农药的残留量，每份样品3 个重复；同时36 份样品用快速检测前处理和金标免疫层析试纸测试方法(1.2.3 节和1.2.4 节) 进行样品检测分析，每份样品3 个重复。统计仪器定量结果与快速检测结果，并对快速检测方法与仪器参比方法进行一致性评价[36]。

2 结果与分析

2.1 金标免疫层析试纸关键性参数

结果见表3。在最适pH 值和最适抗体稳定量下制备得到的金标抗体具有最优探针显色效果，并可有效识别相应农药；划膜10 种农药免疫层析试纸，优化得到最适T 线和C 线所用试纸的浓度组合；在最适金标免疫探针和T/C 线组合条件下，测试得到标准溶液检出限，参照豇豆中农药MRL 值要求[6-7]，选择金垫或金杯反应模式。若金垫法检出限低于我国MRL 值，则采用金垫法；若金垫法检出限高于我国MRL 值，则采用金杯法，通过金标抗体与样品预反应，从而提高检测灵敏度。

表3 10 种农药的金标免疫层析试纸关键参数优化值Table 3 Optimization values of key parameters in gold labeled immunochromatographic test strips for 10 pesticides

2.2 快速前处理方法优化

由于豇豆样品中农药的检出限与MRL 值存在一定差异，因而需要对前处理方法进行优化。按1.2.4 节的前处理方法，结合我国规定的在豇豆中相应农药的MRL 值，对豇豆中农药添加样品的快速提取液进行HPLC-MS/MS 定量检测，每个添加样品重复3 次，同时对提取液进行不同比例稀释，之后进行快速检测。结果 (表4) 表明：克百威、三唑磷、毒死蜱和多菌灵提取后无需稀释，吡唑醚菌酯、灭蝇胺和甲氰菊酯提取后需稀释2 倍，异菌脲提取后稀释4 倍，啶虫脒提取后稀释16 倍，腐霉利提取后稀释50 倍，可用于金标试纸检测，而毒死蜱的检测灵敏度尚不能达到MRL 值要求。

表4 采用HPLC-MS/MS 验证前处理方法回收率与试纸检测灵敏度Table 4 Using HPLC-MS/MS to verify recoveries of the sample preparation method and the sensitivity of the test-strip detection method

2.3 快速检测方法性能评价

2.3.1 豇豆样品检出限 检出限测定结果(表5)表明，10 种农药在豇豆中的检出限除毒死蜱(0.25 mg/kg) 与MRL 值存在一定差距外，其他9 种农药的检出限均可达到MRL 值要求[6-7]。典型的试纸条检测实物图见图4。

图4 豇豆中10 种农药的试纸条检测实物图Fig.4 Illustration of the detection results of the 10 pesticides in cowpeas using the test-strip method

表5 豇豆样品中10 种农药的检出限和MRL 值Table 5 Detection limit and MRL values of 10 pesticides in cowpea samples

2.3.2 特异性 交叉反应试验结果表明，除克百威金标试纸对丁硫克百威和异丙威交叉反应为10%外，其余农药金标试纸对结构类似农药的交叉反应率均 ＜ 1%。表明当豇豆样品中丁硫克百威或异丙威的残留量≥ 0.2 mg/kg 时，可以被克百威金标试纸检出，而其余9 种农药的金标试纸具备高特异性，与结构类似的农药无交叉性反应。另外，由于菊酯类农药在水中溶解度极低，存在提取不充分的因素，需在后续研究中继续改进。

2.3.3 准确性 在0.01～1 mg/L 浓度范围内，豇豆基质中10 种农药线性关系良好，决定系数R2均大于 0.992，表明仪器方法准确性良好，可用于定量分析。

对空白豇豆样品中10 种农药的0、0.1、0.5、1、2 和10 倍检出限添加样品的快速检测结果显示：1、2 和10 倍检出限的添加样品均为阳性，0 和0.1 倍检出限的添加样品均为阴性，0.5 倍检出限的添加样品存在≤ 11.1%比例的假阳性，方法准确率≥ 94.4%。以甲氰菊酯为例，典型的试纸条检测实物图见图5。10 种农药快速检测方法假阳性率、假阴性率和准确率统计结果见图6。

图5 豇豆中甲氰菊酯添加样品的试纸条检测实物图Fig.5 Illustrations of the detection results on the test strips for the spiked cowpea samples with different levels of fenpropathrin

图6 豇豆中10 种农药添加样品的快速检测结果准确性评价Fig.6 Accuracy of the rapid test results for the spiked cowpea samples with 10 pesticides

2.3.4 实用性 机抽检浙江省36 个县市区的36 份豇豆样品，将本研究建立的快速检测方法与传统的HPLC-MS/MS 方法进行比对，结果如表6所示，其中，1.2.4 节快速检测方法检测得出阳性和阴性结果，其中阳性表示样品中相应农药浓度高于或等于MRL，阴性表示样品中相应农药浓度低于MRL。结果显示：36 份豇豆样品中克百威超标1 个、三唑磷超标2 个、毒死蜱超标1 个、吡唑醚菌酯超标1 个、多菌灵超标1 个、灭蝇胺超标1 个，其余4 种农药有检出，但均未超标。快速检测方法结果与定量检测方法结果比对，其准确率≥ 97.2%，表明该快速检测方法在实际样品分析中具有较强的实用性。

表6 豇豆实际样品定量检测和快速检测比对结果Table 6 Comparison results of quantitative testing and rapid testing of actual cowpea samples

3 结论与讨论

本研究建立了豇豆样品中10 种农药残留的金标免疫层析试纸快速检测方法，并采用真实样品进行HPLC-MS/MS 检测结果比对，快速检测方法准确率可达97.2%以上。所建立的金标试纸除毒死蜱外，克百威、三唑磷、啶虫脒、异菌脲、吡唑醚菌酯、多菌灵、腐霉利、灭蝇胺和甲氰菊酯9 种金标试纸对豇豆中相应农药的检出限均满足我国MRL 标准的检测要求。虽然毒死蜱快速检测方法的检出限0.25 mg/kg 与豇豆中MRL 0.02 mg/kg存在差距，但在实际样品检测中，毒死蜱残留量为0.310 mg/kg 的豇豆样品快速检测结果显示阳性，可以用于毒死蜱超标高风险样品的快速筛查。除克百威金标试纸对丁硫克百威和异丙威存在10%交叉反应外，三唑磷、毒死蜱、啶虫脒、异菌脲、吡唑醚菌酯、多菌灵、腐霉利、灭蝇胺和甲氰菊酯9 种金标试纸具有高特异性，与其结构类似农药物无明显交叉反应。GB 2763—2021 中规定，除克百威的残留物以克百威及3-羟基克百威之和表示外，其他9 种农药的残留物中无代谢物，因此克百威的快速检测结果不能指示其代谢物3-羟基克百威的残留情况。

综上所述，金标快速检测方法可实现豇豆中10 种农药残留的快速、准确及定性分析。样品的前处理过程简易、快速、环保，样品前处理和金标试纸检测时间仅需15 min，提取溶液为20%甲醇PBS 溶液，极大地减少了分析样品时间和有机溶剂用量，有较强的现场检测实用性，可为豇豆中10 种农药残留的快速筛查提供技术保障，并为建立我国豇豆中农药残留快速检测金标免疫层析方法标准提供重要的参考数据。