钙调神经磷酸酶在老年子宫内膜癌中的表达及其相关性分析

李建敏，高 萍，林维凤，张 艳

（高密市人民医院妇科，山东高密 261500）

子宫内膜癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，在过去10年中发病率每年上升约1.3%，主要发生在55～65岁之间的女性[1]，研究显示老年女性的子宫内膜癌比年轻人的更具侵袭性，严重威胁女性健康[2]。因此，探索新的分子标志物并确定潜在的治疗靶点至关重要。钙调神经磷酸酶（calcineurin，CN）和下游信号通路在结直肠癌肿瘤和细胞系中被激活，抑制CN会降低肿瘤细胞的存活和增殖。此外CN与恶性肿瘤骨转移密切相关，在体内参与多种细胞功能调节[3]。然而，CN 表达在子宫内膜癌中的影响尚不完全清楚，仍有待进一步阐明。本研究检测了CN 在老年子宫内膜肿瘤组织中的表达，并探讨其与临床病理因素和预后的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

收集2015年3月—2021年12月高密市人民医院妇科收治的50 例老年子宫内膜癌患者作为观察组，组织类型：子宫内膜样腺癌44 例，浆液性乳头状腺癌6例。FIGO（国际妇产科联盟）子宫内膜癌分期：Ⅰ期28例，Ⅱ期6例，Ⅲ期11例，Ⅳ期5例。纳入标准：观察组所有患者均符合子宫内膜癌诊断标准，均经组织学检验确诊。所有患者均未接受任何术前治疗，包括化疗和放疗。

另选取50 例因子宫肌瘤切除的正常子宫内膜组织样本作为对照组。排除标准：合并严重感染性疾病的患者；合并其他恶性肿瘤的患者；严重肝肾功能不全的患者。本研究通过高密市人民医院伦理委员会审批（高医伦理2018-0010）。

1.2 研究方法

检测CN 在子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织中的表达。将各组织样本用10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，制备成4μm厚切片。切片首先在65℃下孵育30min，然后在二甲苯中脱蜡，乙醇中水化。加入EDTA液和蒸馏水进行加压修复，进行苏木精-伊红（HE）染色。用PBS冲洗3次后，将切片在室温下暴露于小鼠抗钙调磷酸酶抗体1h。用PBS 冲洗3 次后，将切片在二抗中孵育30min。室温下将载玻片在显色底物3，3'-二氨基联苯胺中孵育，苏木精复染，脱水，吹干，封固。

CN 表达阳性的判断：根据CN 在免疫染色中的表达，评估阳性肿瘤细胞的比例，≥30%为表达阳性，＜30%为表达阴性[4]。

记录患者的临床特征，包括年龄、FIGO 分期、分化程度、肌层浸润深度、淋巴结转移和远处转移。全部病例均完成随访，随访时间从患者手术时间开始截止到2022年3月。随访时记录总生存时间，总生存时间定义为从患者手术时间至死亡或随访截止时间。

1.3 统计学方法

应用SPSS18.0统计软件处理数据，组间的CN的阳性表达率的比较采用卡方检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。采用多因素Logistic 回归分析CN 阳性表达的影响因素。采用Kaplan-Meier 法分析CN 表达与预后的相关性，并用log-rank 检验进行比较。

2 结果

2.1 不同内膜组织标本中CN的表达

采用免疫组化法检测CN 在子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织中的表达，观察到CN主要表达于子宫内膜癌组织的细胞核中，细胞核中呈现棕褐色的颗粒，见图1A、1B（封二）。在正常子宫内膜组织中，部分腺体细胞核中可见CN 阳性表达，见图1C、1D（封二）。

2.2 CN 在正常子宫内膜组织和子宫内膜癌组织中的表达率的比较

比较对照组和子宫内膜癌组中CN的表达，表1 示，子宫内膜癌组的CN 阳性表达率显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.001）。

表1 CN在对照组和子宫内膜癌组中的阳性表达比较

2.3 CN表达与临床病理特征的关系

表2 示，子宫内膜癌组患者的临床病理特征中，不同病理类型、分化程度、是否合并转移的患者之间CN的阳性表达率差异均无统计学意义（P＞0.05）。FIGO Ⅲ-Ⅳ期患者的CN阳性表达率显著高于FIGO Ⅰ-Ⅱ期患者（P＜0.05）。肌层浸润深度＞1/2 患者的CN 阳性表达率显著高于肌层浸润深度＜1/2的患者（P＜0.05）。

表2 子宫内膜癌患者中CN的表达

2.4 子宫内膜癌患者CN阳性的影响因素

以CN 是否阳性为因变量（赋值：否=0，是=1），以FIGO分期、肌层浸润深度为自变量，通过多因素Logistic 回归分析发现，患者FIGO 分期、肌层浸润深度是子宫内膜癌患者CN 阳性的独立影响因素（P＜0.05），见表3。

表3 子宫内膜癌患者CN阳性的多因素Logistic回归分析

2.5 CN的表达和子宫内膜癌患者预后的关系

KM 生存曲线（图2）显示，CN 阴性的子宫内膜癌患者平均生存时间为（73.86±1.89）个月，显著高于CN 阳性的子宫内膜癌患者（61.60±2.30）个月，Log Rank检验统计值为χ2=11.20（P＜0.05）。

图2 子宫内膜癌患者的KM生存曲线

3 讨论

3.1 CN与子宫内膜癌

子宫内膜癌是女性常见的恶性肿瘤。已有研究逐渐探索子宫内膜癌的分子机制及其预后影响因素[5]。等级较高、晚期或非子宫内膜样组织学是高危子宫内膜癌的特点[6]。约15%～20%的子宫内膜癌患者存在高危疾病且预后较差[7]。尽管有新的抗肿瘤药物和更有效的联合治疗，据报道Ⅳ期子宫内膜癌患者的5年生存率约为17%[1，8]，迫切需要研究潜在的分子标志物以改善子宫内膜癌患者的预后。

CN 是一种钙依赖性丝氨酸/苏氨酸磷酸酶，由2个亚基组成，钙调神经磷酸酶A（CNA）和钙调神经磷酸酶B（CNB），在免疫调节中发挥重要作用，如CN 抑制剂环孢素A 和他克莫司（FK506）作为免疫抑制剂在临床具有广阔的应用前景[9]。CN与钙调蛋白结合后被激活和随后的靶蛋白发生去磷酸化。此外，CN 底物还包括转录因子、参与细胞周期和凋亡的蛋白质、细胞骨架蛋白、膜通道和受体[10]。研究显示CN/NFAT 通路在乳腺癌中被激活，对乳腺癌细胞的存活和转移至关重要[11]。然而，CN在子宫内膜癌中的作用尚不清楚。

3.2 CN阳性表达与子宫内膜癌临床特征的关系

本研究表明，老年子宫内膜癌组织中CN的表达高于正常子宫内膜组织，提示CN在子宫内膜癌细胞中的表达上调，表明CN可能在肿瘤新生血管形成中发挥重要作用。本研究结果与其他研究结果一致，Eleni 等[12]研究显示钙调磷酸酶γ 催化亚基PPP3CC 通过miR-200c-3p 的调控影响上皮性卵巢癌细胞凋亡，这些结果表明CN与肿瘤的进展密切相关。

为了确定CN 表达在老年子宫内膜癌各种组织学亚型中的临床意义，本研究对患者的临床特征包括FIGO分期、病理类型、分化程度、肌层浸润深度、合并转移进行了单因素分析。结果显示，FIGO Ⅲ-Ⅳ期患者的CN 阳性表达率显著高于FIGO Ⅰ-Ⅱ期的患者（P＜0.05）。肌层浸润深度＞1/2患者的CN阳性表达率显著高于肌层浸润深度＜1/2 的患者（P＜0.05）。未发现CN 表达与其他临床或病理参数显著相关。多因素Logistic 回归分析结果显示FIGO分期、肌层浸润深度是子宫内膜癌患者CN阳性的独立影响因素。

3.3 CN与子宫内膜癌的预后

本研究采用KM 生存曲线分析CN 阳性表达对老年子宫内膜癌患者预后的影响，结果显示CN阴性的子宫内膜癌患者平均生存时间显著高于CN 阳性者。推测可能由于磷酸化是调节蛋白质功能的关键机制，CN 引起的蛋白质去磷酸化在肿瘤形成和进展中发挥重要作用，与肿瘤患者的预后密切相关[13]。

综上，老年子宫内膜癌组织中CN的表达与临床病理特征密切相关，包括FIGO分期和肌层浸润深度，检测CN的阳性表达对于评估老年子宫内膜癌的预后也具有临床价值。