幽门螺杆菌感染胃癌患者胃黏膜MIF和P-gp与FasL的表达及意义

于小雨

（赤峰市医院病理科，内蒙古 赤峰， 024000）

随着人们生活方式、饮食结构的改变，我国胃癌发病率逐渐增高，调查显示，2021年胃癌新发病例、死亡病例分别为47.9万例、37.4万例，2022年新发病例、死亡病例分别为68万例、99.8万例[1-2]。胃癌的发生和多方面因素存在联系，以幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）感染为主[3]。研究指出，Fas配体(Fas ligand, Fast)在恶性肿瘤的发生中占据了重要的地位[4]。巨噬细胞移动抑制因子(Macrophage migration inhibition factor，MIF)参与了肿瘤细胞的增殖、转移过程[5]。P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)参与了恶性肿瘤细胞的凋亡过程。所以，测定幽门螺杆菌感染胃癌患者胃黏膜MIF、P-gp、FasL的表达对胃癌后续治疗方案的合理制订具有重要的指导性意义。本研究选择针对赤峰市医院病理科2020年5月—2022年5月留存的胃癌患者胃黏膜组织开展研究，对其MIF、P-gp、FasL表达进行探究，旨在为幽门螺杆菌感染胃癌后续治疗发展提供重要的参考依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2020年5月—2022年5月赤峰市医院病理科留存的胃癌患者胃黏膜组织为A组（n=59），选取同期留存的距离癌组织边缘超过5 cm且经过病理确诊为正常黏膜组织为B组（n=59）。A组男30例，女29例；年龄28～70岁，平均年龄（44.61±4.37）岁；B组男32例，女27例；年龄30～70岁，平均年龄（45.21±5.07）岁。上述两组患者一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。另外，以Warthin-Starry银染法测定结果为依据，确定A组有无合并Hp感染分组：①Hp阴性组（n=35），包括男性患者20例，女性患者15例；年龄29～70岁，平均年龄（43.69±3.41）岁；TNM分期为19例Ⅰ期+Ⅱ期、16例Ⅲ期+Ⅳ期；分化程度为15例高分化、中低分化20例，有淋巴结转移9例、无淋巴结转移26例。②Hp阳性组（n=24），包括男性患者16例，女性患者8例；年龄31～70岁，平均（44.21±4.05）岁；TNM分期为14例Ⅰ期+Ⅱ期、10例Ⅲ期+Ⅳ期；分化程度为11例高分化、中低分化13例，有淋巴结转移10例、无淋巴结转移14例。上述一般资料（年龄、性别结构、TNM分期、分化程度等）比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究纳入对象对研究内容知晓并签署知情同意书。本研究经赤峰市医院医学伦理委员会审批。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：①受检者神志清楚，可与他人正常沟通、交流，依从性良好；②符合《中国胃癌筛查与早诊早治指南（2022，北京）》[6]，结合临床表现、影像学检查、病理组织活检等确诊为胃癌。

排除标准：①胃癌复发或伴有认知障碍、心理疾病；②合并凝血功能障碍、先天性免疫缺陷病、重要脏器功能衰竭等；③取材前已进行放化疗；④既往存在Hp感染史。

1.3 检测方法

安排同一组医生进行取材及MIF、P-gp、FasL水平测定操作。

检测前，与受检者主动交谈，介绍MIF、P-gp、FasL表达阳性率的意义，以取得患者的理解，同时指导患者签署知情同意书。

检测时，抗MIF的试剂盒为人巨噬细胞移动抑制因子酶联免疫吸附检测试剂盒（生产企业：上海西格生物科技有限公司），抗P-gp的试剂盒为人P-糖蛋白酶联免疫吸附检测试剂盒（生产企业：北京中科质检生物技术有限公司），抗FasL的试剂盒为人凋亡相关因子配体酶联免疫吸附测定试剂盒（生产企业：武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司）。按照免疫组化法测定MIF、P-gp、FasL表达阳性率情况，即取出适量的胃癌患者胃黏膜组织、距离癌组织边缘超过5 cm且经过病理确诊为正常的黏膜组织，分别进行10%甲醛固定，再完成常规石蜡包埋；石蜡切片，并放在67 ℃烘箱内烘片2 h，脱蜡至水，经磷酸缓冲盐溶液（PBS）（pH=7.4）冲洗，共3次，3 min/次；取一定量柠檬酸盐缓冲液（＜500 mL）于微波盒内，加热至沸腾，将脱蜡水化后的组织放在已煮沸的缓冲液内继续煮20 min进行修复；除去柠檬酸盐缓冲液，于切片滴入适量的新鲜配制的二氨基联苯胺，显微镜下观察5 min；蒸馏水进行冲洗，用苏木素复染，再经自来水冲洗；将PBS作为阴性对照，而已知阳性切片为阳性对照。

检测后，安排2名病理医生进行切片病理分析，结果有争议时询问高级职称的影像学专家，得出最终结论。

1.4 观察指标

以A组与B组为观察指标，统计MIF、P-gp、FasL表达阳性率。MIF、P-gp、FasL表达定位均在细胞质，在显微镜下观察5个视野，根据染色程度、染色细胞百分比进行评分，即（1）无染色为0分；淡黄色为1分；黄色为2分；棕黄色为3分。（2）着色细胞数在5%及以下，记录0分；着色细胞数为6%～25%，记录1分；着色细胞数为26%～50%，记录2分；着色细胞在51%及以上，记录3分。依照得分计算阳性表达情况，得分在1分及以下，视为阴性；得分为2～3分，视为弱阳性；得分为4～5分，视为中度阳性；得分在6分及以上，视为强阳性。

分析MIF、P-gp、Fas与Hp阳性组的临床病理特征关系，包括临床分期、分化程度、有无淋巴结转移等。

以病理学组织活检结果为金标准，联合检测时只要一项指标呈阳性标准，即可判断为阳性。比较MIF、P-gp、FasL联合项目指标与单一项目指标对Hp阳性组胃癌患者的诊断效能，包括敏感度、特异度。采用受试者操作特征（ROC）曲线分析MIF、P-gp、FasL诊断Hp阳性组患者的敏感度、特异度。

（2）特异度=真阴性人数/（真阴性人数+假阳性人数）×100%；

（3）敏感度=真阳性人数/（真阳性人数+假阴性人数）×100%。

1.5 统计学分析

选择SPSS 25.0统计学软件进行数据分析。计量资料以（）表示，两组组间差异比较采用t检验；计数资料采用[n（%）]描述，数据组间差异行χ2检验。用Medcalc软件绘制ROC曲线，分析单一项目检测及联合检测的诊断价值。以以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 比较A组与B组患者MIF、P-gp、FasL表达阳性率

A组患者MIF、P-gp、FasL表达阳性率较B组高，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 比较A组与B组患者MIF、P-gp、FasL表达阳性率 [n（%）]

2.2 MIF、P-gp、Fas与Hp阳性组的临床病理特征关系分析

Ⅲ期+Ⅳ期Hp阳性组MIF、P-gp、FasL表达阳性率较Ⅰ期+Ⅱ期高，差异有统计学意义（P＜0.05）；中低分化Hp阳性组MIF、P-gp、FasL表达阳性率较高分化组高，差异有统计学意义（P＜0.05）；有淋巴结转阳性组MIF、P-gp、FasL表达阳性率较无淋巴结转高，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 ZMIF、P-gp、Fas与Hp阳性组的临床病理特征关系分析

2.3 联合项目指标检测诊断Hp阳性组胃癌患者的ROC曲线分析

联合检测筛查敏感度、特异性较MIF、P-gp、Fas单一项目指标检测高，差异有统计学意义（P＜0.05），详见表3、图1。

图1 联合项目指标检测与单一项目指标检测诊断Hp阳性组的ROC曲线图

表3 联合检测对Hp阳性组胃癌患者的诊断分析 （%）

3 讨论

胃癌是一种较常见的疾病，具有起病隐匿、发病率高等特点，是目前危及人体健康安全的重要因素之一。胃癌的发生与饮食、环境、遗传、药物及Hp等存在联系，早期症状缺乏特异性，表现为食欲减退、恶心、反酸等症状，不易被发现，确诊时已处于中晚期阶段，错过最佳手术治疗时机[7]。有研究指出，早期胃癌患者经手术治疗预后较好，5年生存率超过90%以上[8]。

Hp作为一种需氧螺旋状革兰氏阴性杆菌，具有一定的传染性，持续感染已成为胃癌的重要诱因[9]。经调查发现，半数以上胃癌的发生与Hp感染有关[10]，因此有理由认为Hp在胃癌发生、发展过程中起到了重要作用。

随着相关报道增多，人们对胃癌与Hp感染关系认识程度逐步加深，Hp诱发胃癌是一个复杂的免疫反应过程，即促进炎性细胞聚集，使其增生、释放细胞因子，引发分子改变，造成癌变。胃癌的发生被认为是多因子、多步骤相互作用的复杂生物学过程[11]。MIF是一种由亲水性原子排列构成，具有双重作用特性的蛋白，参与恶性肿瘤发展、炎性反应过程，可促进细胞转化、增殖、分裂、新生血管形成[12]。有研究指出，MIF在乳腺癌、胰腺癌、肝癌等恶性肿瘤中呈高表达[13]。研究显示，A组患者MIF表达阳性率较B组高，说明MIF参与胃癌的发生，故呈高表达。P-gp是一种位于细胞膜上的ATP，参与机体能量代谢过程，也是参与介导肿瘤多药耐药性的重要蛋白[14]。有研究表明，恶性肿瘤细胞中P-gp呈高表达，参与肿瘤的复发、转移、进展[15-16]。本研究结果显示，A组P-gp表达阳性率较B组高，说明P-gp参与胃癌的发生，故呈高表达。Fasl是一种跨膜蛋白，可介导细胞的凋亡，当其结合受体Fas分子，并产生特异性反应，可向细胞内传递细胞凋亡信号[17-18]。有研究指出，恶性肿瘤患者细胞内P-gp明显增高，攻击浸润性活化的T细胞，使恶性肿瘤细胞凋亡[19-20]。本研究结果显示，A组Fasl表达阳性率较B组高，说明Fasl参与胃癌的发生，故呈高表达。

结合上述分析，进一步探究Fasl、MIF、P-gp与Hp阳性组临床分析、分化程度、有无淋巴结转移的相关性，结果发现Fasl、MIF、P-gp高表达与Hp阳性胃癌患者密切相关，即临床分期越高、分化程度越高、有淋巴结转移的Hp阳性胃癌患者胃黏膜组织Fasl、MIF、P-gp高表达。此外，进一步分析联合项目检测对Hp阳性组胃癌患者的诊断效能，发现联合检测筛查敏感度、特异度较MIF、P-gp、Fas单一项目指标检测高，说明联合项目检测效果更理想。

综上所述，MIF、P-gp、Fasl在胃癌患者胃黏膜组织中呈高表达，且胃癌合并Hp感染患者MIF、P-gp、Fasl水平更高，尤其是Ⅲ期+Ⅳ期、中低分化、有淋巴结转移的胃癌合并Hp感染患者，而MIF、P-gp、Fasl的联合检测诊断效果更理想，能够为其后续治疗提供重要依据。