老年急性脑出血并癫痫患者血清中血管生成素样蛋白4和微小RNA-124蛋白表达水平及其临床意义

杜志刚,伊红丽,吴海燕,仇汉诚,崔晨曦,崔贵香

1.首都医科大学附属北京地坛医院顺义院区综合科,北京 101113;2.华北理工大学附属医院神经内科;3.首都医科大学附属北京地坛医院神经外科

老年急性脑出血具有高致死率、致残率[1]。癫痫为发生率较高的急性脑出血并发症,且癫痫发生率随患者年龄的增长而上升,随癫痫病情的发展,可造成患者认知损伤加重,对患者预后影响较大[2-3]。血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)是可保持血管完整性、炎症信号传导、调节氧化应激的分泌蛋白[4]。微小RNA-124(miR-124)可参与神经元分化与发育、神经细胞凋亡等过程,对神经元修复具有促进作用[5]。目前关于ANGPTL4、miR-124在老年急性脑出血并发癫痫患者中表达研究报道较少。本文研究分析ANGPTL4、miR-124在老年急性脑出血并发癫痫患者中表达及其意义,以期为老年急性脑出血并发癫痫早期诊治提供借鉴。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2020年1月至2022年1月首都医科大学附属北京地坛医院顺义院区收治的72例急性脑出血并发癫痫患者为急性脑出血并发癫痫组,另选取同期收治的单纯急性脑出血患者50例为急性脑出血组,健康体检的健康志愿者50例为对照组。本研究经首都医科大学附属北京地坛医院伦理委员会审核通过,患者均已签署知情同意书。

1.2 纳入与排除标准 纳入标准:急性脑出血患者均符合《中国脑出血诊治指南(2019)》[6]的诊断标准,急性脑出血并发癫痫患者同时符合《中国基因性全面性癫痫临床诊治实践指南》[7]中的诊断标准,均经颅脑CT或MRI检查确诊;年龄≥65岁。排除标准:合并视力障碍者;合并精神分裂者;近期服用抗抑郁焦虑药物者;既往存在癫痫史者;脑出血恢复期者。

1.3 研究方法

1.3.1 ANGPTL4水平、miR-124 mRNA表达量检测 于发病后第2天或体检当日抽取空腹静脉血6 mL,以离心半径3 cm、转速3 000 r/min离心处理15 min,分离上层血清,-70 ℃保存待检。通过酶联免疫吸附(ELISA)法对4组受试者ANGPTL4水平进行检测,通过实时荧光定量(Real-timePCR)法对血清中的miR-124 mRNA表达量进行检测,采用Trizol法提取血清总RNA,使用Takara逆转录试剂盒将血清中的RNA逆转录为cDNA,采用Primer 5.0软件设计引物序列;反应体系:0.4 μL上反向引物、1 μL cDNA模板、10 μL SYBGreen,加蒸馏水至20 μL。反应条件:95 ℃预变性1 s、95 ℃ 5 s、60 ℃ 31 s,共进行40个循环,采用2-ΔΔCt方法计算出miR-124的表达量。miR-124上游、反向引物序列分别为:5′-GCGGCCGTTCACAGCGGACC-3′、5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′,内参基因U6上游、反向引物序列分别为:5′-CTCGCTTCGGCAGCAVATATACT-3′、5′-ACGCTTCACGAATTTGCGTGTC-3′。

1.3.2 癫痫严重程度、认知障碍及出血量评估 将癫痫依照严重程度分为轻度(2个月发作1次或更少),中度(1个月发作<4次,2个月发作>1次),重度(1个月发作≥4次)。通过简易智能状态量表(MMSE量表)对患者认知障碍情况进行评分,以分值≤27分为存在认知障碍。采用CT对颅内出血量进行检查计算,其中大出血为出血量≥30 mL,小出血为出血量<30 mL。

2 结果

2.1 各组临床资料比较 3组性别、年龄、体重指数对比,差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性。见表1。

表1 各组临床资料对比

2.2 各组间ANGPTL4水平及miR-124 mRNA表达的比较 与对照组比较,急性脑出血组、急性脑出血并发癫痫组ANGPTL4水平较高,miR-124 mRNA表达量较低,差异有统计学意义(P<0.05);与急性脑出血组比较,急性脑出血并发癫痫组ANGPTL4水平较高,miR-124mRNA表达量较低,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 各组ANGPTL4水平及miR-124 mRNA表达对比

2.3 ANGPTL4、miR-124与老年急性脑出血并发癫痫临床特征的关系 ANGPTL4与癫痫严重程度、认知障碍、脑卒中史呈正相关,miR-124与癫痫严重程度、认知障碍、脑卒中史呈负相关,差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 ANGPTL4、miR-124与老年急性脑出血并发癫痫临床特征的关系分析

2.4 影响急性脑出血并发癫痫危险因素的logistic回归分析 以老年急性脑出血是否发生癫痫为因变量(0=否,1=是),以认知障碍、脑卒中史、ANGPTL4、miR-124为自变量,建立logistic回归模型,多因素结果显示认知障碍、脑卒中史、ANGPTL4、miR-124为影响老年急性脑出血发生癫痫的危险因素。见表4。

表4 影响急性脑出血并发癫痫的logistic回归分析

2.5 ROC曲线分析ANGPTL4、miR-124对老年急性脑出血并发癫痫的预测价值 ROC曲线显示,2项联合检测对老年急性脑出血并发癫痫的预测价值高于ANGPTL4、miR-124单项检测预测,差异有统计学意义(P<0.05)。见表5、图1。

注:ANGPTL4为血管生成素样蛋白4;miR-124为微小RNA-124。

表5 ROC曲线分析ANGPTL4、miR-124对老年急性脑出血并发癫痫的预测价值

3 讨论

老年急性脑出血可造成线粒体功能障碍、神经胶质细胞损伤、神经递质失衡,进而对神经细胞间电传导过程造成了影响,导致中枢神经系统兴奋性变化,最终发生癫痫。癫痫作为老年急性脑出血常见并发症,可造成患者脑部神经元损伤加重、缺氧时间延长,进而影响其预后[8-10]。

ANGPTL4是一种主要在脂肪组织、肝脏中所存在的分泌蛋白,可调节脂肪代谢,减少脂质吸收,同时可促进血管形成、调节血管通透性、参与炎症反应,在心脑血管疾病、动脉粥样硬化发展过程中均有参与[11-13]。本研究发现老年急性脑出血并发癫痫患者中ANGPTL4水平较高,且与患者癫痫严重程度、认知障碍、脑卒中史相关。研究[14-16]发现,ANGPTL4在脑血管疾病中多呈高表达,可增加脑出血患者病灶区域血管通透性,加剧脑水肿、神经炎症发展,继而引发神经元损伤,促进急性脑出血并发癫痫患者病情发展;同时ANGPTL4可造成脑灌注量减少,加重脑缺血性损伤、认知能力下降,其结果与本研究结果相似。表明,老年急性脑出血并发癫痫患者中ANGPTL4异常表达,其与老年急性脑出血并发癫痫病情发展密切相关。

miR-124作为微小RNA家族成员之一,在个体正常发育、DNA修复、细胞增殖及分化、免疫调节等过程中均发挥着重要作用,在神经系统发育及成熟过程中miR-124呈高表达[17-19]。有研究[20]表明,miR-124可通过调节突触长时程可塑性增强机体学习能力,认知障碍程度减低;同时miR-124可抑制炎症因子表达,而炎症因子可促进神经细胞兴奋性及癫痫发作。因此,高表达miR-124可抑制癫痫的发生、发展。本研究发现,老年急性脑出血并发癫痫患者中miR-124呈低表达,低表达的miR-124为老年急性脑出血并发癫痫发生的因素之一,且与癫痫严重程度、认知障碍、脑卒中史相关,其结果与董晗等[21]研究结果相似。表明,miR-124与患者临床特征相关,可参与老年急性脑出血并发癫痫的发生、发展。

综上所述,老年急性脑出血并发癫痫患者中ANGPTL4高表达,miR-124低表达,ANGPTL4、miR-124与癫痫严重程度、认知障碍、脑卒中史相关,两者均为发生老年急性脑出血并发癫痫的独立危险因素,且ROC曲线显示,ANGPTL4、miR-124两者联合检测对老年急性脑出血并发癫痫的预测价值较高。