肺结核88例外周血单核细胞中白细胞分化抗原36水平及其临床意义

陈志富，李利娟，蒋蜀玫

作者单位：广安市人民医院，a感染科，b全科医学科，c骨科，四川 广安638000

肺结核是由结核分枝杆菌（MTB）引起的一种慢性肺部感染性疾病，通过打喷嚏、空气飞沫和咳嗽等多种方法在人与人之间传播，是造成世界上成千上万人死亡的最重要传染病之一，其发病率一直呈上升趋势，有效的临床防治是降低肺结核发病率的重要手段［1-2］。脂类代谢是一种必需的代谢过程，越来越多的证据表明脂代谢在肺结核发病机制中具有关键的调节作用，MTB可以控制其细胞壁的脂质结构，影响宿主在感染过程中免疫应答［3］。另外的研究发现，肺结核病病人血脂相关指标的水平与健康者相比明显下降［4］。白细胞分化抗原36（CD36）属于B族清道夫受体家族，可与多种配体结合，包括凋亡细胞、血小板反应素-1和脂肪酸，其生物学功能包括脂质摄取、免疫识别和分子黏附等［5］。据研究报道，CD36在脂质代谢中起着至关重要的作用，与人体免疫功能密切相关，并且CD36参与了结核病的发生发展过程［5-6］。然而对于CD36在肺结核病人中的表达水平及其与机体脂代谢的关系知之甚少。因此，本研究检测了肺结核病人外周血单核细胞中CD36的水平和血脂相关指标的水平，旨在分析CD36与脂代谢的关系，以及对疾病发生发展的影响，为肺结核的预防和治疗提供理论指导。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究共纳入广安市人民医院2020年3月至2021年9月期间住院治疗的肺结核病人88例作为研究组，男性48例，女性40例，年龄范围20～63岁，年龄（41.98±10.63）岁。根据是否耐药分为非耐药肺结核（52例）和耐药肺结核（36例），耐药肺结核中单耐药21例、多耐药15例。单耐药：肺结核病人感染的MTB，经体外药物敏感性试验（DST）证实，是对1种一线抗结核药物耐药的肺结核；多耐药：肺结核病人感染的MTB，经体外DST证实，对至少2种一线抗结核药物耐药的肺结核，且排除同时对利福平和异烟肼耐药的病人［7］。根据痰涂片结果分为痰涂片阴性（40例）和痰涂片阳性（48例）。所有病人依据中华人民共和国卫生行业标准《WS 288—2017肺结核诊断》［8］标准确诊为肺结核，具备结核病影像学表现特征，均为初治病人。被诊断患有艾滋病、肾脏疾病、免疫系统疾病和任何呼吸系统疾病（例如慢性阻塞性肺疾病、纤维化、慢性支气管炎、哮喘或肺癌）的受试者都被排除在本研究之外。选取88例同期于广安市人民医院进行体检的健康者作为对照组，男性46例，女性42例，年龄范围18～60岁，年龄（40.75±11.09）岁。研究组和对照组的性别（χ2=0.09，P=0.762）、年龄（t=0.75，P=0.454）比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。病人或其近亲属知情同意，本研究符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》相关要求。

1.2 方法

1.2.1 外周血单核细胞分离 所有参与者使用真空采血管在禁食状态下抽取外周血5 mL。取1 mL血液使用乙二胺四乙酸进行抗凝，加等量肝素的无血清缓冲液悬浮细胞，将细胞悬液加在与血液等量的淋巴细胞分离液上，室温下以2 000 r/min离心20 min，吸去最上层的血浆，收集乳白色淋巴细胞层，加入含肝素的离心管中混匀，200×g离心10 min，经两次沉淀洗涤后得到单核细胞，用于CD36水平检测。剩余血液离心分离血清，转移到新的试管中用于血脂水平检测。

1.2.2 外周血单核细胞中CD36表达水平的检测用TRIzol试剂（深圳子科生物科技有限公司，货号15596018）提取外周血单核细胞总RNA，然后，根据说明书步骤用PrimeScript RT试剂盒（北京宝日医生物技术有限公司，货号RR036A）反向转录1 μg总RNA为第一链互补DNA。用SYBR Green Master Mix试剂盒（北京百奥莱博科技有限公司，货号MT0017）进行实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR），qRT-PCR在ABI 7500荧光定量仪上（美国ABI生物公司）完成。用于qRT-PCR的特异引物序列见表1。β-肌动蛋白（β-actin）作为内参基因用于标准化，应用2-ΔΔCt法计算CD36的相对表达水平。

表1 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应引物序列

1.2.3 血清中血脂水平的检测 血清三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、载脂蛋白AI（ApoAI）、载脂蛋白B（ApoB）水平利用免疫比浊法在全自动生化分析仪上（美国贝克曼公司，型号BECKMAN COULTER AU5800）完成测定。

1.3 统计学方法 本研究数据处理使用SPSS 24.0软件完成。计数资料用例表示，比较采用χ2检验；计量数据用表示，两组采用独立样本t检验分析比较各组之间外周血单核细胞CD36表达水平及血清中血脂水平的差异；采用Pearson法分析研究组CD36的表达水平与血脂水平的相关性；采用多元线性回归分析外周血单核细胞CD36表达水平的影响因素。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组外周血单核细胞中CD36及血清中血脂水平的比较 研究组外周血单核细胞中CD36表达水平显著高于对照组（P＜0.05），血清中TG、TC、LDLC、HDL-C、ApoAI和ApoB水平均明显低于对照组（P＜0.05）。见表2。

表2 两组外周血单核细胞中CD36及血清中血脂水平的差异比较/

表2 两组外周血单核细胞中CD36及血清中血脂水平的差异比较/

注：CD36为白细胞分化抗原36，TG为三酰甘油，TC为总胆固醇，HDL-C为高密度脂蛋白胆固醇，LDL-C为低密度脂蛋白胆固醇，ApoAI为载脂蛋白AI，ApoB为载脂蛋白B。

ApoB/（g/L）1.16±0.26 0.94±0.21 6.18＜0.001组别对照组研究组t值P值例数88 88 CD36 1.06±0.32 1.80±0.42 13.15＜0.001 TG/（mmol/L）1.79±0.54 1.12±0.29 10.25＜0.001 TC/（mmol/L）4.45±0.55 4.05±0.91 3.53 0.001 HDL-C/（mmol/L）1.57±0.39 1.13±0.32 8.18＜0.001 LDL-C/（mmol/L）2.43±0.44 2.05±0.57 4.95＜0.001 ApoAI/（g/L）1.63±0.28 1.42±0.42 3.90＜0.001

2.2 耐药和非耐药肺结核病人外周血单核细胞中CD36及血清中血脂水平的比较 耐药肺结核病人外周血单核细胞中CD36表达水平显著高于非耐药肺结核（P＜0.05），血清中TG、TC、LDL-C、HDL-C、ApoAI和ApoB水平均明显低于非耐药肺结核（P＜0.05）。见表3。

表3 耐药和非耐药肺结核病人外周血单核细胞中CD36及血清中血脂水平的比较/

注：CD36为白细胞分化抗原36，TG为三酰甘油，TC为总胆固醇，HDL-C为高密度脂蛋白胆固醇，LDL-C为低密度脂蛋白胆固醇，ApoAI为载脂蛋白AI，ApoB为载脂蛋白B。

ApoB/（g/L）1.00±0.23 0.86±0.18 3.06 0.003类别非耐药肺结核耐药肺结核t值P值例数52 36 CD36 1.65±0.39 2.01±0.47 3.91＜0.001 TG/（mmol/L）1.19±0.32 1.02±0.25 2.67 0.009 TC/（mmol/L）4.22±0.96 3.82±0.84 2.02 0.046 HDL-C/（mmol/L）1.20±0.34 1.04±0.29 2.30 0.024 LDL-C/（mmol/L）2.17±0.60 1.88±0.53 2.34 0.022 ApoAI/（g/L）1.51±0.43 1.30±0.40 2.32 0.023

2.3 痰涂片阳性和阴性肺结核病人外周血单核细胞中CD36及血清中血脂水平的比较 痰涂片阳性病人外周血单核细胞中CD36表达水平显著高于痰涂片阴性（P＜0.05），血清中TG、TC、LDL-C、HDL-C、ApoAI和ApoB水平均明显低于痰涂片阴性（P＜0.05）。见表4。

表4 痰涂片阳性和阴性肺结核病人外周血单核细胞中CD36及血清中血脂水平的比较/

表4 痰涂片阳性和阴性肺结核病人外周血单核细胞中CD36及血清中血脂水平的比较/

注：CD36为白细胞分化抗原36，TG为三酰甘油，TC为总胆固醇，HDL-C为高密度脂蛋白胆固醇，LDL-C为低密度脂蛋白胆固醇，ApoAI为载脂蛋白AI，ApoB为载脂蛋白B。

ApoB/（g/L）1.04±0.24 0.85±0.19 4.14＜0.001类别痰涂片阴性痰涂片阳性t值P值例数40 48 CD36 1.60±0.38 1.97±0.45 4.12＜0.001 TG/（mmol/L）1.22±0.34 1.03±0.25 3.02 0.003 TC/（mmol/L）4.27±0.95 3.86±0.88 2.10 0.039 HDL-C/（mmol/L）1.21±0.33 1.06±0.31 2.20 0.031 LDL-C/（mmol/L）2.23±0.62 1.90±0.53 2.69 0.009 ApoAI/（g/L）1.55±0.45 1.31±0.39 2.68 0.009

2.4 研究组外周血单核细胞CD36表达水平与血脂水平的相关性 根据Pearson相关性分析结果发现，研究组外周血单核细胞CD36表达水平分别与血清中TG、TC、LDL-C、HDL-C、ApoAI和ApoB水平呈负相关（P＜0.05），见表5。

表5 肺结核88例外周血单核细胞CD36表达水平与血脂水平的相关性分析

2.5 外周血单核细胞CD36表达水平的多元线性回归分析 以外周血单核细胞CD36表达水平为因变量，TG、TC、HDL-C、LDL-C、ApoAI、ApoB为自变量进行多元线性回归分析，结果显示，经校正其他影响因素后，TG降低、HDL-C降低、ApoB降低是外周血单核细胞CD36表达水平的影响因素（P＜0.05），见表6。

3 讨论

肺结核是一种严重威胁人类身心健康的传染性疾病之一，传染性较强，由于需要长期服用药物，治疗周期较长，对病人的生活质量及家庭的经济状况造成严重影响，是全球面临的公共卫生健康问题。随着医学技术不断地进步，肺结核病的治愈率有了明显的提高，但根据最新的全球肺结核病报告数据表明，我国仍是全球肺结核第三高负担国家［9-10］。肺结核的发病机制比较复杂，并且临床治疗效果受多种因素的影响，预防和防治是当前治疗肺结核的重点，深入了解肺结核的发生发展的有关因素，将有助于制定更好的临床治疗措施。

CD36是一种单链跨膜糖蛋白，位于人类7号染色体，存在于许多细胞的表面，如血小板、巨噬细胞、脂肪细胞、肝细胞、肌细胞和上皮细胞，在多种疾病的病理过程中具有重要作用，其高表达可促进机体对脂质的摄入和吸收，加速以巨噬细胞为首的慢性炎症反应［11］。除此之外，CD36可以维持正常脂质代谢，可作为外源长链脂肪酸受体和转运蛋白在脂代谢中发挥作用［12-13］。近年来，关于CD36在脂类代谢异常相关疾病中的作用受到研究人员的关注。现有的研究已经报道了血清CD36在糖尿病、动脉粥样硬化中表达水平显著升高，参与肾脏疾病的发病机制和进展，可能作为潜在的治疗靶点［14］。此前有研究显示，MTB感染能够诱导巨噬细胞CD36的表达，促进细胞内脂质聚集，在MTB感染巨噬细胞脂质代谢过程中发挥重要作用［15］。有人指出，过氧化物酶增殖物活化受体γ（PPARγ）能够增强CD36的表达，在体外增强人巨噬细胞中结核分枝杆菌的生长，结核病病人外周血单核细胞CD36基因和蛋白表达水平升高［16］。本研究利用qRT-PCR技术检测发现肺结核病人的外周血单核细胞中CD36的表达水平升高，符合前人所报道的研究结果，说明其可能在肺结核的发病机制中发挥一定的作用。同时发现耐药肺结核病人外周血单核细胞中CD36表达水平较非耐药肺结核高，痰涂片阳性病人外周血单核细胞中CD36表达水平较痰涂片阴性高，说明CD36的高表达可能与肺结核病人疾病严重程度有关。

脂质是机体内重要的成分，决定了机体的营养状况和免疫功能，脂质及其代谢物通过免疫系统对结核病抗性产生有益作用［17-18］。血脂含量可以反映体内脂代谢的情况，在脂代谢途径中起着至关重要的作用。正常情况下，人体血浆中的血脂水平（TC、TG、HDL-C、ApoAI等）能够良好地保持着动态平衡，在疾病的因素下出现血脂异常。MTB感染可以通过多种方式控制宿主体内的脂质，MTB感染诱导巨噬细胞脂质积累，以促进其在巨噬细胞内的存活，另一方面以宿主脂质作为主要营养源。在慢性感染期间，MTB对脂质的利用导致巨噬细胞脂代谢异常，也是导致TB病人血脂水平低的原因。现有的文献已经表明，与正常受试者相比，肺结核病人的血液中TG、TC、LDL-C、HDL-C、ApoAI和ApoB水平下降［19-20］。本研究与以往研究结果一致，与对照组相比，肺结核病人血清的TG、TC、LDL-C、HDL-C、ApoAI和ApoB水平明显降低。同时发现耐药肺结核病人血清中血脂水平均明显低于非耐药肺结核，痰涂片阳性病人血清中血脂水平均明显低于痰涂片阴性。上述结果表明，血脂水平是影响肺结核发生发展的重要因素，适当水平的血脂对免疫系统的正常运作是必要的。上述文献报道了CD36在大量疾病中与脂代谢有关，在肺结核中的研究较少。既往研究发现，在MTB感染过程中PPARγ从不同水平调节脂质代谢，且结核病病人机体血脂水平的下降与PPARγ调节CD36表达有一定的关系［16］。因此本研究分析了CD36与肺结核病人脂代谢的关系，对肺结核病人外周血单核细胞中的CD36水平与血清中血脂水平进行了相关性分析，发现CD36水平分别与血清中TG、TC、LDL-C、HDL-C、ApoAI和ApoB水平呈负相关，且线性回归分析结果显示，TG降低、HDL-C降低、ApoB降低是外周血单核细胞CD36表达水平的影响因素，表明CD36表达可能调节血脂水平影响肺结核病人脂代谢过程，在肺结核的发病机制中发挥重要作用。

综上所述，肺结核病人CD36水平较高，血脂水平较低，均与病人是否耐药及痰涂片结果有关，CD36表达参与了肺结核病人脂代谢过程，在肺结核的发病机制中发挥重要作用。本研究结果有助于进一步了解肺结核的发生发展机制，提示通过研究MTB的生理代谢，对发现新的结核病治疗的分子靶点，筛选新药具有重要意义。