高危人乳头瘤病毒基因分型聚合酶链式反应检测在宫颈病变筛查中的价值

万英净 朱纯刚

【摘要】  目的    分析高危人乳头瘤病毒（HR-HPV）基因分型（DNA）聚合酶链式反应（PCR）检测宫颈病变的临床价值。方法    对瑞昌市人民医院2018年1月—2020年12月8 600份妇女宫颈脱落细胞样本进行HR-HPV DNA PCR、超薄液基细胞学检查（TCT），以组织病理检查结果为金标准，对比2种检测方法的诊断效能、不同病变检出率，并分析HR-HPV各基因型与宫颈病变相关性。结果    组织病理检查结果显示，8 600份妇女宫颈脱落细胞样本中，阳性1 462份、阳性率为17.00%，阴性7 138份、阴性率为83.00%；TCT检测结果显示，真阳性1 298份、假阳性412份、真阴性6 726份、假阴性164份；HR-HPV DNA PCR检测结果显示，真阳性1 401份、假阳性243份、真阴性6 895份、假阴性61份。HR-HPV DNA PCR检测方法诊断准确度、敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值显著高于TCT检测，差异有统计学意义（P<0.05）。与组织病理检查相比，TCT、HR-HPV DNA PCR对不同病变检出率差异均无统计学意义（P>0.05）；TCT、HR-HPV DNA PCR 2种检测方法相比，差异无统计学意义（P>0.05）；与TCT检测方法相比，HR-HPV DNA PCR检测方法对不同病变检出率更接近于病理检查，诊断价值更高。经Logistic回归分析，HPV16、18、31、33、52、58亚型与宫颈病变的发生均呈正相关（P<0.05）。结论    HR-HPV感染与宫颈病变具有密切的相关性，HR-HPV DNA PCR在宫颈病变的检测中具有较高检出率，诊断效能显著。

【关键词】  人乳头瘤病毒； 基因分析； 宫颈病变； 超薄液基细胞学

中图分类号：R739.34        文献标识码：A

文章编号：1672-1721（2023）29-0114-03

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.29.038

目前，大量研究已证实，HR-HPV感染后所引起的原癌基因、抑癌基因表达改变可促进细胞的增殖与恶性轻化，HR-HPV的持续感染为导致宫颈癌发生的首要病因。因此，寻求有效的检测方法及时筛查该病具有必要性[1]。既往多采用TCT、巴氏涂片法等，但此类检测方法易受主观因素影响，检测特异度、灵敏度仍具较大上升空间[2]。多种HPV亚型病毒感染均可导致宫颈发生癌前病变，不同基因型之间也具有明显的差异，但目前临床关于此观点尚未达成完全一致。本研究选择瑞昌市人民医院8 600份妇女宫颈脱落细胞样本，进一步探讨HR-HPV DNA PCR的诊断效能。

1    资料与方法

1.1    临床资料    对瑞昌市人民医院2018年1月—2020年12月8 600份妇女宫颈脱落细胞样本进行HR-HPV DNA PCR、TCT。诊断标准：符合文献中关于宫颈病变的判定标准[3]。纳入标准：符合诊断标准者；具有阴道内分泌物增多、下腹疼痛、腰部疼痛等症状；患者均知情此研究且签署同意书。排除标准：子宫切除患者；具有宫颈手术史者；合并严重的心、脑、血管等疾病者；肝、肾功能不全者；合并其他妇科恶性肿瘤疾病者；处于妊娠期或哺乳期者；检查前24 h有性生活者；临床资料不全、依从性不佳者。

1.2    方法    3种检查方法具体操作如下。

1.2.1    组织病理检查方法    对患者进行阴道镜下宫颈组织病理学检查，并将其检查结果作为本次研究的金标准。于电子阴道镜（江苏新玛医疗器械有限公司）下，定位宫颈内可疑病灶，取出部分宫颈组织行病理检查。若于阴道镜下未发现病灶，则于宫颈管口搔刮进行多点取材后，将其送检。由瑞昌市人民医院2名经验丰富、资历较深的病理师对病理检查结果进行诊断，若意见不一致，进行商讨后达成一致。宫颈肿瘤组织分类主要可分为正常或炎症、宫颈上皮内瘤变（CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ级）、鳞状细胞癌（SCC）5种类型，其中CINⅠ级及以上为阳性[4]。

1.2.2    TCT检测方法    指导患者取膀胱截石位，取样前，应用棉拭子将宫頸口分泌物去除，应用特制毛刷取宫颈脱落细胞，将其保存在Thinprep保存液中，对其进行漂洗，之后测定细胞密度，离心沉降液体，应用Prep2000制片系统固片机（孝感奥华医疗科技有限公司），将其制成薄层细胞涂片（直径大小为2 cm），选择质量分数为95%的酒精作为固定液进行湿固定。巴氏染色细胞后，于显微镜下（奥林巴斯公司，型号CX21）对其进行镜检。将其镜检结果分为正常或炎症、不典型鳞状细胞（ASCH）、高度鳞状上皮内病变（HSIL）、低度鳞状上皮内病变（LSIL）、鳞状细胞癌（SCC）5种类型，其中LSIL、HSIL判定为阴性，SCC判定为阳性[5]。

1.2.3    PCR定量检测方法    指导患者保持膀胱截石位，取样前应用棉拭子去除宫颈口分泌物，之后将采样刷深入到患者宫颈内1～2 cm处，按照顺时针的方向旋转5～8周，停留5 s取出，将采样刷置于一次性使用宫颈脱落细胞保存液中，置于4～8 ℃的环境中保存，以待检测。应用人乳头瘤病毒核酸分型检测试剂盒（荧光PCR法）（HPV21分型）（江苏硕世生物科技股份有限公司），按照试剂盒说明书操作步骤进行HPV检测。高危HPV基因型包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、82等亚型。PCR扩增条件为50 ℃ 5 min UNG酶处理、95 ℃预变性10 min、95 ℃ 10 s、58 ℃ 40 s、38 ℃ 5 s，共45个循环，其中HPV亚型扩增曲线呈典型S曲线且CT值小于参考值判定为阳性。

1.3    观察指标    分析检测结果，对比2种检测方法的诊断效能、不同病变检出率，分析HR-HPV各基因型与宫颈病变相关性。

1.4    统计学方法    采用SPSS 22.0统计学软件分析数据，计量资料以x±s表示，采用t检验，计数资料以百分比表示，采用χ2检验，采用Logistic回归分析法分析高危HPV基因分型与宫颈病变的关系，P<0.05为差异有统计学意义。

2    结果

2.1    检测结果    组织病理检查结果：8 600份妇女宫颈脱落细胞样本中，阳性1 462份、阳性率为17.00%，阴性7 138份、阴性率为83.00%。TCT检测结果：真阳性1 298份、假阳性412份、真阴性6 726份、假阴性164份。HR-HPV DNA PCR检测结果：真阳性1 401份、假阳性243份、真阴性6 895份、假阴性61份，见表1。

2.2    诊断效能    HR-HPV DNA PCR检测方法诊断准确度、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值显著高于TCT检测，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

2.3    不同病变检出率    与组织病理检查相比，TCT、HR-HPV DNA PCR对不同病变检出率差异均无统计学意义（P>0.05）；TCT、HR-HPV DNA PCR 2种检测方法相比，差异无统计学意义（P>0.05）；与TCT检测方法相比，HR-HPV DNA PCR检测方法对不同病变检出率更接近于病理检查，诊断价值更高，见表3。

2.4    Logistic回归分析    经Logistic回归分析，HPV16、18、31、33、52、58亚型与宫颈病变的发生均呈正相关（P<0.05），见表4。

3    讨论

宫颈癌在临床上非常常见，此病的发生主要是量变到质变的过程，发展周期高达3～8年。据相关统计资料显示，宫颈癌疾病的发病率在女性恶性肿瘤中的占比高达25%，且近些年来此病患者逐渐年轻化，对广大女性身体健康造成极为不利的影响[6-8]。因此，早期对宫颈病变进行正确筛查，对于防治宫颈癌具有重要意义。

既往临床多采用宫颈细胞学检查、阴道镜检查、组织病理学检查等方法，TCT检测较为常见，主要应用宫颈刷对宫颈鳞柱交界处细胞进行收集，并在相应处理后进行巴氏染色，之后根据国际癌症协会推荐标准对检测结果进行诊断[9-11]。此种检测技术可在一定程度上提高细胞数量、质量，可更加科学客观地描述病情，但此检测方法的诊断结果与操作人员制片经验具有一定关系，且细胞消化不充分、固定液的时间过长等因素，均可导致TCT检测结果不准确，影响诊断结果[12-13]。本研究发现，HR-HPV DNA PCR检测方法诊断准确度、敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值显著高于TCT检测，差异有统计学意义（P<0.05）。2种检查方式对不同病变检出率差异无统计学意义（P>0.05）；与TCT检测方法相比，HR-HPV DNA PCR检测方法对不同病变检出率更接近于病理检查结果，诊断价值更高。研究数据进一步证实，HR-HPV DNA PCR检测方法对宫颈病变的诊断效能更显著。近些年来，多数研究学者认为HPV持续感染极易导致上皮细胞的无限增殖，是引起宫颈癌疾病的主要分子机制[14-15]。本研究还发现，经Logistic回归分析，HPV16、18、31、33、52、58亚型与宫颈病变的发生均呈正相关；数据提示高危HPV基因分型与宫颈病变的发生具有直接关系。分析其原因，病毒进入患者机体后，主要通过将自身DNA整合入宿主细胞中，从而有效抑制宿主的抑癌基因，其中最常见的感染类型为HPV 16、18亚型，而HPV31、33、35、39等其他基因分型次之。再次证实HPV感染为导致宫颈癌疾病发生的高危因子，并且不同基因分型对于宫颈癌的致病力也有所不同。由此可见，HPV基因分型PCR检测对于宫颈病变的诊断具有显著价值。

综上所述，高危HPV基因分型与宫颈病变的发生具有紧密的相关性，高危HPV基因分型PCR检测在宫颈病变筛查中具有较高的診断准确度、灵敏度，对宫颈不同病变检出率较高，临床应用价值显著，可继续推广。

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