支气管肺泡灌洗液中HSP90α、TSGF对肺部良、恶性疾病的诊断价值

邢金生

(商丘市中医院 急诊科,河南 商丘 476000)

肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,在所有类型的肿瘤中病死率最高,早期诊断是提高肺癌生存率的关键[1]。纤维支气管镜检查目前是诊断中心型肺癌的主要工具,支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)和纤维刷可提供肿瘤细胞学标本[2]。然而纤维支气管镜检查常常无法获得周围型肺癌的组织标本,部分肿块靠近肺门或患者具有客观因素导致肺活检的风险较高。血清肿瘤标志物水平检测可为肺癌的诊断提供参考,但在肿瘤发展的早期,血清肿瘤标志物水平变化不明显[3-4]。BALF是较敏感的样品,并且BALF中的肿瘤标志物在肿瘤早期就发生改变[5]。热休克蛋白90α(heat shock protein 90α,HSP90α)和肿瘤特异性生长因子(tumor specific growth factor,TSGF)可作为BALF标志物用于肺癌患者的筛查。本研究旨在探讨BALF中HSP90α、TSGF的变化对肺部良、恶性疾病的诊断价值。

1 对象与方法

1.1 研究对象

前瞻性选取在医院经病理学检查确诊的90例肺癌患者作为肺癌组,选取90例肺部良性疾病患者作为良性组,手术时间为2020年1月至2022年4月。纳入标准:肺癌诊断标准参考《中华医学会肺癌临床诊疗指南(2018版)》[6];年龄19～79岁;肺部良性疾病的诊断标准参考《诊断学》第8版[7];患者及家属均签署知情同意书。排除标准:伴有其他部位恶性肿瘤;接受本研究相关检查之前,患者具有放化疗史、免疫治疗史;长期使用糖皮质激素、免疫调节剂治疗。肺癌组:年龄47～76(60.82±6.67)岁;男54例,女36例;TNM分期Ⅰ期21例,Ⅱ期41例,Ⅲ期25例,Ⅳ期3例;病灶直径≥3.0 cm 33例,<3.0 cm 57例;发生淋巴结转移32例;肺腺癌74例,肺鳞癌16例。良性组:年龄42～79(62.14±8.38)岁;男48例,女42例;肺部炎症性疾病55例,肺结核26例,支气管腺瘤7例,肺脓肿2例。本研究通过医院医学伦理委员会批准。

1.2 标本采集方法

将EPS3500电子支气管镜(日本Pentax公司)的末端放在病变末端的肺叶或支气管开口中,确保以楔形方式插入活检位置。注入200 mL 37 ℃的生理盐水,每次注入30～50 mL,通过-19.95～-13.33 kPa的负压抽吸灌洗液,收集上清液。以3 000 r·min-1的速度离心,半径5 cm,离心时间15 min,并保存在-80 ℃的冰箱中用于下一步测试。

1.3 检测方法

采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测BALF中HSP90α、TSGF水平。首先用ELISA试剂盒中的稀释液稀释,将其添加到预先包被的96孔板中,添加100 μL稀释的样品和标准液,并在37 ℃下孵育90 min,除去上清液后,洗涤约3次,向每个孔中添加100 μL亲和素-过氧化物酶复合物,并在37 ℃下孵育30 min,再次去除上清液并洗涤5次,向每个孔中添加100 μL TMB显色溶液,并在黑暗中于37 ℃反应30 min后,添加TMB终止溶液。通过标准曲线计算样品中相应指示剂的浓度。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 肺癌组和良性组BALF中HSP90α、TSGF水平

肺癌组BALF中HSP90α、TSGF水平均高于良性组(P<0.05),见表1。

表1 肺癌组和良性组的BALF中HSP90α、TSGF水平比较

2.2 不同特征肺癌组患者BALF中HSP90α、TSGF水平

TNM分期为Ⅲ期和Ⅳ期、发生淋巴结转移的肺癌患者BALF中HSP90α、TSGF水平分别高于TNM分期为Ⅰ期和Ⅱ期、未发生淋巴结转移的肺癌患者(P<0.05);不同年龄、性别、病灶直径大小、病理学特征肺癌患者BALF中HSP90α水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 不同特征肺癌组患者BALF中HSP90α、TSGF水平比较

2.3 BALF中HSP90α、TSGF水平鉴别诊断肺部良恶性疾病的价值

经ROC曲线分析结果显示,HSP90α及TSGF联合鉴别诊断肺部良恶性疾病的曲线下面积、灵敏度、特异度均大于单独检测,见表3。

表3 BALF中HSP90α、TSGF水平鉴别诊断肺部良恶性疾病的价值

3 讨论

肺癌是临床上最常见的恶性肿瘤,在肺泡上皮细胞恶性转化的过程中,恶性细胞可以新合成或过表达某些物质,患者的血清和支气管肺泡表面可以检测到其水平变化,称为肿瘤标志物,常用于诊断疾病[7]。研究表明,肿瘤标志物由肿瘤细胞释放到病变的局部支气管肺泡中,然后通过血液和淋巴液回流进入血液循环[8],其水平首先在支气管肺泡局部改变,然后进行血液循环,引起血清中水平变化[9]。因此,血清肿瘤标志物水平的变化在恶性肿瘤早期不明显,BALF中肿瘤标志物的灵敏度较高[10]。越来越多的研究报道,BALF中肿瘤标志物水平变化比血清更敏感,这是更理想的诊断肺癌的方法[11-12]。

肿瘤标志物HSP90α和TSGF与肺癌的发生密切相关,可以用于肺癌的诊断[13]。TSGF是由恶性肿瘤细胞产生的特殊物质,是一组与恶性肿瘤发生有关的碳水化合物和代谢物的总称,可以促进肿瘤周围毛细血管增生,并且随着恶性肿瘤的形成和生长TSGF逐渐释放到外周血中,使血清TSGF水平高于健康人群,肺癌患者BALF中TSGF水平高于良性肺疾病患者,这表明在BALF中检测TSGF对肺癌的早期诊断具有重要意义[14-15]。当机体受到刺激时,会大量分泌热激蛋白,HSP90是热激蛋白之一,是细胞突变的重要缓冲因子,可纠正突变蛋白的错误折叠[16]。HSP90抑制剂可用作肿瘤靶向治疗药物,目前正在广泛研究中[17]。研究认为,HSP90α可在临床上用作肺癌标志物[18]。本研究结果表明,肺癌患者BALF中HSP90α水平高于良性患者。分析其原因可能是HSP90α与肿瘤密切相关,可以在肿瘤细胞中高度表达,可与癌基因产物结合使用,从而保护后者免受蛋白酶降解和延长的半衰期。本研究结果显示,TNM分期为Ⅲ期和Ⅳ期、发生淋巴结转移的肺癌患者BALF中HSP90α水平分别高于TNM分期为Ⅰ期和Ⅱ期、未发生淋巴结转移的肺癌患者。肿瘤细胞内外均大量存储HSP90α,并可有效激活血纤维蛋白溶酶,促进肿瘤细胞转移和浸润。

TNM分期为Ⅲ期和Ⅳ期、发生淋巴结转移的肺癌患者BALF中TSGF水平分别高于TNM分期为Ⅰ期和Ⅱ期、未发生淋巴结转移的肺癌患者;TSGF可促进肿瘤生长和周边毛细血管的大量增生,其与TSGF受体作用后,会发生靶细胞的血管化,促进肿瘤细胞转移至全身。因此,TSGF水平可用于评估肿瘤的发生发展情况。

在临床上恶性肿瘤的检测主要为血清指标检测,敏感度和特异度低[19-20]。许多病变部位的病理组织通常不能通过纤维支气管镜获得。寻找具有较高诊断效率的检测方法有助于恶性肿瘤的诊断和鉴别诊断,解决临床实际问题。BALF中的肿瘤标志物是细胞分泌的代谢产物,经冲洗可以直接从细胞表面脱落,不会被人体代谢、吸收和释放,BALF中的肿瘤标志物比血清指标出现更早并且水平更高。本研究结果显示,HSP90α、TSGF联合鉴别诊断肺部良恶性疾病的灵敏度、特异度高于单独检测。因此根据肺癌的病理特点,选择合适的检测组合有助于肺癌的分层诊断。

4 结论

BALF中HSP90α、TSGF水平对于鉴别诊断肺部疾病性质及判断肺癌进展有一定的参考价值。