血细胞直方图联合血液涂片分析在疟疾诊断中的应用

刘文雄 邱明好 毛远科 莫善颖 罗国兰 赖军华 蒋利君 Dr Chaibou Salaou Ali Chaibou Moctar Abdel Salam Boukary Saiba

疟疾是危害全球人类健康的重大传染病，是由疟原虫通过传播媒介雌性按蚊叮咬后传播给人类引起的寄生虫病。2015 年的疟疾高危人群中，全球约有30.2 亿人口，占全球人口的一半，大多数疟疾病例和死亡者发生在非洲撒哈拉沙漠［1］。本研究的资料来源于中国援建尼日尔综合示范医院，即处于非洲撒哈拉沙漠南缘，属于疟疾高发流行地区。2020 年7 月-12 月，在中国援建尼日尔综合示范医院检验科通过BC-5300 血细胞分析仪进行血液常规检测以及血液涂片对疟原虫进行快速、有效的检测，为医生对疟疾的早发现、早诊断、早治疗、早隔离提供科学的参考依据。现将检测的结果进行分析，报告如下。

1 一般资料与方法

1.1 一般资料

中国援建尼日尔综合示范医院2020 年7 月至12 月就诊患者中选450 例作为研究对象，根据血常规白细胞直方图是否异常以及发热情况进行分组，发热患者，体温＞38℃，且血常规白细胞直方图有异常表达或结果有异常报警信息为A 组；非发热患者，体温＜37℃，且血常规白细胞直方图有异常表达或结果有异常报警信息为B 组；非发热患者，体温＜37℃，且血常规白细胞直方图无异常表达或结果无异常报警信息为C 组；其中A 组150例：男69 例，女81 例，平均年龄（36.81±1.32）岁；B组150 例，男73 例，女77 例，平均年龄（36.62±1.35）岁；C 组150 例，男69 例，女81 例，平均年龄（36.69±1.25）岁。本研究经院医学伦理委员会批准通过，受试者已签署《知情同意书》。

1.2 材料

广东深圳生产的迈瑞Mindray BC-5300 血液分析仪（五分类BC-5300，迈瑞公司，批号：518057），仪器所需的溶血素、稀释液以及清洗液均为配套试剂。南京江南永新光学有限公司生产BM2000 型光学显微镜。吉姆萨细胞染色液比利时Cypress Diagnostics 公司生产。乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝管。

1.3 方法

1.3.1 疟原虫检查

采集患者静脉血2 mL 于EDTA 抗凝管中，轻缓摇匀置室温30 min 后采用Mindray BC-5300 血液细胞分析仪进行检测，观察检测结果报告，选取白细胞直方图有异常表达或结果有异常报警信息的样本，取全血作涂片，按《全国临床检验操作规程》（第4 版）的规范［2］，进行吉姆萨染色后，用BM2000 型光学显微镜油镜下观察疟原虫。

1.3.2 异常细胞检测

BC-5300 型血液细胞分析仪采用半导体激光系统，通过多角度的激光散射，可以提供细胞大小、细胞核和细胞颗粒的大小及复杂信息，并且结合细胞化学染色技术，准确区分各类白细胞，同时筛选出各类异常细胞，从而实现更精确的五分类结果。

1.3.3 判别标准［2］

对A、B、C 三组患者厚薄血液涂片进行光学显微镜下疟原虫观察，显微镜下观察到疟原虫结果为阳性，未观察到疟原虫结果为阴性。A、B 两组病人的血常规白细胞直方图有异常表达或结果出现报警信息。

1.4 统计学处理

应用SPSS 22.0 进行数据分析。用（）表示正态分布的计量资料，组间比较行独立样本t检验，计数资料以n（%）表示，行χ2检验；P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组患者疟原虫阳性率比较

三组间疟原虫阳性率比较有差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 三组患者疟原虫阳性率比较［n（%）］Table 1 Comparison of Plasmodium Positive Rates among Three Groups of Patients［n（%）］

2.2 正常血细胞及异常血细胞DIFF 分类图

正常血细胞及异常血细胞DIFF 分类图见图1。

图1 正常血细胞及异常血细胞DIFF 分类图示例（瑞氏染色，×40）Figure 1 Example of DIFF classification map for normal and abnormal blood cells（瑞氏染色，×40）

2.3 流行病学调查

2.3.1 疫源地分布

密切接触人员（生活区）中无确诊疟疾的情况疫源地分布450 例患者均长期居住在尼日尔的首都尼亚美，是非洲撒哈拉沙漠以南疟疾高流行地区。

2.3.2 临床表现

A 组患者有发热症状，均为发热38℃以上的患者；B 组患者中，均有头晕、肌肉酸痛、乏力，腹泻等症状表现；C 组则是以感冒、外伤等原因入院治疗的患者。

3 讨论

疟疾是一种由寄生虫引起的威胁生命的疾病，通过受感染的雌性按蚊叮咬传播给人类。据世界卫生组织（world health organization；WHO）的统计，在2019 年，全球估计有2.29 亿疟疾病例，死亡人数估计为40.9 万人。非洲区域在全球疟疾的分布中占有畸高的比例，2019 年，该区域占疟疾病例和死亡数占全球疟疾的分布中的94%［3］。

在我国援助的非洲国家尼日尔医疗卫生条件比较有限，同时也限制了PCR 技术的应用。血液涂片染色镜检法依然是疟原虫检查的金标准［4］，但疟原虫的形态学分型需要经验丰富的检验技师。血细胞直方图是一种血液学检查方法，可以定量地测量红细胞、白细胞和血小板的数量及其分布情况。通过血细胞直方图的结果，可以初步判断出某些疾病的可能性和严重程度。

本研究结果显示。相比于其他诊断方法，血液涂片具有一些优势。首先，它是一种直接、直观的检测方法，可以快速确定患者是否感染疟疾；其次，血液涂片制备技术简单，成本低廉，适用性强；此外，血液涂片的敏感性和特异性较高，可以准确检测出疟原虫感染。在进行血液涂片检测时，需要严格控制制备过程和观察方法，同时结合其他诊断手段进行综合评估。相较于单一的血液涂片诊断方法，血细胞直方图联合血液涂片分析具有更高的准确率与可靠性。

本研究的对象国处于非洲撒哈拉沙漠南缘的尼日尔，属于疟疾高发流行地区，450 例患者均长期居住在尼日尔的首都尼亚美，是非洲撒哈拉沙漠以南疟疾高流行地区。当地经济发展相对落后，居住条件差，防蚊、灭蚊意识薄弱，防蚊物品不完备，有利于疟疾的传播［5］。由于资金、技术等因素的限制，这些地区缺乏有效的疟疾防治手段，导致患者不易得到及时有效的治疗。尼日尔是一个国土广阔的沙漠国家，大部分地区属于荒漠和半荒漠地带，该地区的疟疾高发与当地的气候和生态环境有关。

李正兰等［6］对收集的1 735 例跨国流动人员血液标本进行ACL-8000 血细胞分析仪流水线技术联合染色镜检，1 735 例归国人员筛查出疟疾25 例镜检确诊疟疾24 例阳性率1.38%筛查率96%。且24 例疟疾病例均有发热、头晕或头痛、畏寒、肌肉疼痛，体温达39℃以上者有19 例，占79%；与本研究结果基本一致。这是由于疟疾是由疟原虫引起的传染病，其主要临床症状包括寒战、高热、头痛、关节痛和乏力等症状。具体来说，疟疾患者通常会经历以下四个阶段的症状：寒战期：患者出现剧烈寒战，持续15～60 分钟。发热期：随着寒战停止，患者体温迅速上升至40℃以上，伴有头痛、肌肉酸痛等不适症状，此期可持续数小时至3 天。减退期：体温逐渐下降，患者出汗，感觉疲倦无力，此期可持续几小时至一天［7-9］。缓解期：疟疾症状消失，恢复正常活动能力。疟疾患者会出现发热的原因是因为疟原虫在感染人体后，在红细胞内繁殖，释放代谢产物，导致人体免疫系统失调，释放的细胞因子如白细胞介素等会刺激下丘脑的体温调节中枢，导致体温调节失常，从而出现高热等症状。另外，疟疾病人往往因为寒战导致肌肉收缩，也会产生一定的热量，使体温升高。

由于大量临床药物的使用在一定程度上掩盖了疟疾的典型临床表现，使疟疾病例的临床诊断受到了干扰［10-12］，仅凭典型临床表现不能快速准确诊断出疟原虫感染，但是通过结合Mindray BC-5300型血液分析仪其检测结果的报警信息及异常的直方图，可以有针对性的对相应样本进行厚薄血液涂片并进行显微镜下检查，从而为检测疟原虫找到简便、快捷、有效的方法提供了有价值的参考，为在援外医疗中对传染病的防治工作，做到早发现、早诊断、早报告、早治疗。在受援国医疗卫生条件比较艰苦，医学检验仪器相对有限的情况下，本研究值得在援外医疗的临床检验中推广和应用。