C-erbB-2和C-MYC 基因在非小细胞肺癌中的表达及其与预后的关系

蒲发晓 任婷远 王雁 姜烜星

非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）是常见的肺癌类型之一，我国NSCLC 发病率居高不下，大部分患者确诊时处于中晚期，5年存活率相对较低。C-erbB-2基因是一种原癌基因，C-erbB-2基因所编码的蛋白具有酪氨酸激酶活性，能够促进细胞增殖、分化、转移，其在乳腺癌、食管癌、口腔癌等多种恶性肿瘤中高表达，并与患者不良预后相关［1］。C-MYC基因是一种核蛋白类癌基因，可促进细胞分裂和无限增殖，抑制细胞凋亡，其在肝癌、胰腺癌、骨肉瘤中异常表达［2］。目前对于C-erbB-2和C-MYC基因在NSCLC 中的表达情况有初步研究，NSCLC 可能存在C-erbB-2和C-MYC 高表达［3］，但C-erbB-2 和C-MYC 高表达是否影响患者预后尚不明确。本研究将探讨C-erbB-2和C-MYC基因在NSCLC 中的表达情况，分析C-erbB-2 和C-MYC 阳性表达与NSCLC 患者临床病理特征、预后的关系，报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2016 年1 月至2018 年3 月河西学院附属张掖人民医院收治的89 例NSCLC 患者，所有患者均行肺癌根治术，术中切除癌组织以及距病灶3 cm 的癌旁组织做病理诊断。纳入标准：①符合NSCLC 的诊断标准［4］；②满足肺癌根治术指征［4］；③病例资料及随访记录完整。排除标准：①生存期＜3 个月；②合并其他恶性肿瘤；③远处转移患者。男63 例，女26 例；年龄43～72 岁，平均年龄（64.37±4.05）岁。病理类型［4］：鳞癌64 例，腺癌25例。原发肿瘤-淋巴结-远处转移（tumor node metastasis，TNM）分期［4］：Ⅰ期21 例，Ⅱ期32 例，Ⅲ期36 例。分化程度［4］：高分化20 例，中分化30 例，低分化39 例。伴随区域淋巴结转移35 例，有吸烟史48 例。所有患者或家属已签署知情同意书。本研究获得医院伦理委员会批准。

1.2 方法

取所有NSCLC 患者肺癌根治术中切除的癌组织以及距病灶3 cm 的癌旁组织，分别在中性福尔马林中浸泡固定24 h，经脱水、透明后浸蜡，制作3～4 mm 石蜡切片。采用免疫组化技术检测NSCLC 癌组织以及癌旁组织C-erbB-2 及C-MYC表达情况。由病理科医师在光学显微镜下观察，采用Bresalier 半定量法评分［5］：①染色深浅度评分：不显色=0 分，浅黄色=1 分，棕黄色=2 分，棕褐色=3 分；②阳性细胞数评分：阳性细胞数＜5%=0分，阳性细胞数5～25%=1 分，阳性细胞数26%～50%=2 分，阳性细胞数51%～75%=3 分，阳性细胞数≥76%=4 分。染色深浅度与阳性细胞数的评分乘积0 分为阴性，≥1 分为阳性。C-erbB-2 免疫组化染色采用鼠抗人C-erbB-2 单克隆抗体。C-MYC免疫组化染色采用兔抗人C-MYC 多克隆抗体，所有试剂盒均购自上海酶联生物科技有限公司。

1.3 资料收集与随访

收集患者临床资料，包括性别、年龄、吸烟史、病理类型、TNM 分期、分化程度、是否有区域淋巴结转移。根据NSCLC 癌组织标本C-erbB-2 及C-MYC 表达情况，分为C-erbB-2 阳性组与C-erbB-2阴性组、C-MYC 阳性组与C-MYC 阴性组。比较各组之间的临床特征。对所有患者进行为期5 年的随访，追踪患者生存时间和生存状态，比较各组之间的总生存期和5 年生存率。

1.4 统计学方法

使用SPSS 22.0 统计分析软件分析数据。计数资料以n（%）表示，采用χ2检验。采用Kaplan-Meier 法绘制生存曲线，生存分析进行Log rank 检验。以P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 NSCLC 癌组织及癌旁组织的C-erbB-2 和C-MYC 表达比较

采用免疫组化技术检测NSCLC 癌组织以及癌旁组织中C-erbB-2 及C-MYC 的表达情况。结果见图1。NSCLC 癌组织的C-erbB-2、C-MYC 阳性表达率高于癌旁组织，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 NSCLC 癌组织及癌旁组织的C-erbB-2 和C-MYC 表达比较［n（%）］Table 1 Comparison of C-erbB-2 and C-MYC expression in NSCLC cancer tissue and adjacent tissues［n（%）］

图1 免疫组化检测C-erbB-2 及C-MYC 在NSCLC 癌组织以及癌旁组织中的表达情况Figure 1 The expression of C-erbB-2 and C-MYC in NSCLC tissues and adjacent tissues detected with immunohistochemistry

2.2 C-erbB-2 和C-MYC 表达与NSCLC 临床特征的关系

C-erbB-2 阳性患者病理类型为腺癌、分化程度为低分化的比例高于C-erbB-2 阴性患者，差异有统计学意义（P＜0.05）；C-erbB-2 阳性与阴性患者的性别、年龄、吸烟史、TNM 分期、区域淋巴结转移比较差异无统计学意义（P＞0.05）。C-MYC 阳性患者TNM 分期为Ⅲ期、分化程度为低分化、有区域淋巴结转移的比例高于C-MYC 阴性患者，差异有统计学意义（P＜0.05）；C-MYC 阳性与阴性患者的性别、年龄、吸烟史、病理类型比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 C-erbB-2 和C-MYC 表达与NSCLC 临床特征的关系［n（%）］Table 2 Relationship between C-erbB-2 and C-MYC expression and clinical characteristics of NSCLC［n（%）］

2.3 C-erbB-2和C-MYC表达与NSCLC预后的关系

本研究进行5 年随访，89 例NSCLC 患者中，总生存期为10.6～60.0 个月，中位生存期为57.2 个月，死亡45 例，存活44 例，5 年生存率为49.44%。C-erbB-2 阳性与阴性患者的总生存期比较差异有统计学意义（P＜0.05）。见图2。C-MYC 阳性与阴性患者的总生存期比较差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3、图3。

表3 C-erbB-2 和C-MYC 阳性与阴性患者的生存情况比较Table 3 Comparison of survival between C-erbB-2 and C-MYC positive and negative patients

图2 C-erbB-2 阳性与阴性患者的生存曲线Figure 2 Survival curves of C-erbB-2 positive and negative patients

图3 C-MYC 阳性与阴性患者的生存曲线Figure 3 Survival curves of C-MYC positive and negative patients

3 讨论

NSCLC 发病受遗传因素影响，与原癌基因和抑癌基因的改变密切相关。C-erbB-2 基因属于src基因家族，是常见的原癌基因之一。C-erbB-2 蛋白的病理研究最开始见于乳腺癌，C-erbB-2 蛋白阳性表达是乳腺癌预后差的重要标志物［6］。C-erbB-2在正常上皮细胞中存在微弱表达，但无基因扩增。本研究发现，NSCLC 癌组织的C-erbB-2 阳性表达率高于癌旁组织，提示C-erbB-2 在NSCLC 癌组织中表达上调。进一步分析C-erbB-2 阳性表达与临床病理特征和预后的关系，结果显示，病理类型为腺癌、低分化的NSCLC 患者的C-erbB-2 阳性表达率较高。朱国荣等［7］研究也报道，C-erbB-2 与组织学分型相关，周围型、腺癌的患者C-erbB-2 阳性表达率较高。C-erbB-2 在腺癌中的表达较高，可能是因为肺腺癌起源于支气管黏膜上皮及粘液腺，大部分患者病灶在外周，表现为周围型肺癌，肺腺癌组织的C-erbB-2 受体较多。本研究结果显示NSCLC 低分化与C-erbB-2 高表达有关，机制可能是C-erbB-2 基因表达的蛋白产物具有酪氨酸激酶活性，可催化三磷酸腺苷的磷酸基，C-erbB-2 基因表达的蛋白产物经过转移之后使下游蛋白酪氨酸残基发生磷酸化，促进了细胞无限增殖和低分化，分化程度越低说明肿瘤细胞与正常细胞的异型性越大，故而C-erbB-2 高表达的患者更容易发生低分化。本研究发现，C-erbB-2 阳性表达患者的总生存期较短，5 年生存率也较低。既往研究［8］分析乳腺癌及子宫内膜癌患者C-erbB-2 与预后的关系，也发现C-erbB-2 阳性表达患者的预后更差，5 年生存率更低。这可能是因为C-erbB-2 阳性表达患者癌组织的分化程度越低，与正常组织的异型性越高，肿瘤的恶性程度也越高，癌细胞侵袭、转移、进展也越快，也更容易复发，治疗效果相对较差，因此患者生存期也较短。

C-MYC基因是一种具有转录调节作用的癌基因，是人类较常见的高丰度癌基因，属于MYC基因家族成员。该家族包括C-MYC、N-MYC、L-MYC 等基因，其中C-MYC 基因参与调节与DNA 损伤和修复有关的基因表达，激活基因突变，表达大量C-MYC 蛋白，促进细胞增殖和分化［9］。本研究发现，NSCLC 癌组织的C-MYC 阳性表达率高于癌旁组织。李王平等［10］研究也报道，在人小细胞肺癌H446 细胞中C-MYC 高表达。本研究显示，C-MYC 在Ⅲ期、低分化、有区域淋巴结转移的NSCLC 患者中高表达，这与李琛等［11］研究观点一致。分析机制：C-MYC 基因主要通过基因扩增和染色体易位重排的方式激活，C-MYC 基因产物为外显子2 和3 共同编码的P62C-MGC 磷酸化蛋白，其通过与染色体DNA 结合发挥转化细胞的能力，从而调节细胞生长、分化［12］。C-MYC 表达越高，癌细胞的分化程度也越低，恶性程度越高，越容易发生淋巴结转移，TNM 分期也越高［13］。进一步对C-MYC 阳性与阴性患者进行生存分析，结果显示，C-MYC 阳性患者的5 年生存率明显低于C-MYC 阴性患者，预后更差。

综上所述，C-erbB-2 和C-MYC 表达情况与NSCLC 临床特征相关，C-erbB-2 和C-MYC 表达情况与NSCLC 患者预后密切相关，可作为分子标志物评估NSCLC 患者预后。