保健食品中辅酶Q10 类软胶囊酸价测定方法探究

吴媛媛， 冯雪萍，李亚军，杨子忠，石志慧，杜 晶，谭周杨

（1.酵母功能湖北省重点实验室，湖北 宜昌 443003；2.安琪纽特股份有限公司，湖北 宜昌 443003）

0 引言

随着生活水平的提高，人们更加注重通过食用保健品来提高自身免疫力[1-2]。辅酶Q10是人体重要的辅酶之一，具有提高人体免疫力[3-4]、清除自由基[5-6]、降低血压[7]、抗氧化性的功效[8-9]，在预防和辅助治疗心血管疾病[10-11]、糖尿病[12-13]、肿瘤等慢性病方面有良好的效果[14-15]，因此辅酶Q10类软胶囊被广泛运用于保健品中，而酸价是保健食品中反映油脂类产品质量优劣的重要检测指标[16-18]。

酸价是混合物中游离羧酸基团数量的一个计量标准，以中和1 g 油脂中游离脂肪酸所需的氢氧化钾的毫克数来表示[19-20]。若酸价过高则会导致人体肠胃不适、腹泻并损害肝脏[21-22]；酸价越小，代表油脂质量越好[23-24]，营养价值越高，因此酸价常用于衡量油脂的品质[25-26]。

目前，国内尚未建立保健食品中辅酶Q10类软胶囊酸价检测标准，现采用的检测方法多为GB 5009.229《食品安全国家标准 食品中酸价的测定》[27]。此外，为保证食品检测水平，还需对检测方法进行不确定度分析，测量不确定度是判断测量结果的依据和评定测量水平的指标，并利用该手段来提高质量评价与质量控制水平，为今后保健食品的检验提供支持[28-29]。

由于保健食品中辅酶Q10类软胶囊内容物性质较为特殊，当室内温度较高时，内容物为液体状态，室内温度较低时，内容物为凝固状态，因此研究通过对样品前处理进行优化，在常温或低温状态下均能使内容物被混合溶液完全溶解成澄清的油脂试样，便于使用酚酞指示剂滴定法及冷溶剂自动电位滴定法开展酸价检测工作。除此之外，酚酞指示剂滴定法相较于自动电位滴定法节省仪器成本、方法操作简单、准确度高，且更适用于颜色较浅的油脂试样，可为实验室及检测机构在进行保健食品软胶囊酸价检测时提供参考。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

仪器：G20S 型自动电位滴定仪、电极（DGi116-Solvent）、ME204/02 型分析天平、HH-M4 型恒温水浴锅。

试剂：无水乙醚（含量≥99.5%）、异丙醇（含量≥99.7%）、氢氧化钠（含量≥96.0%）、无水乙醇（含量≥99.7%）。

1.2 试验方法

1.2.1 试验前准备

油脂试样前处理：取辅酶Q10软胶囊，将内容物挤于250 mL 锥形瓶中，放置于50 ℃水浴锅内，使内容物融化为液体状态。

混合溶液前处理：配置中性乙醚/异丙醇（1/1，V/V）混合溶液于具塞试剂瓶中，放置于30 ℃水浴锅内，使混合溶液保持微热状态。

1.2.2 试验方法

参考国标GB 5009.229《食品安全国家标准 食品中酸价的测定》。

1.2.3 计算公式

3.3 患者版目标管理对冠心病患者心功能及生活质量的影响 本研究结果显示，观察组患者干预后LVEF、VO2max、6MWT指标及生活质量较对照组明显改善(P<0.01)。目标管理手册通过微信随访的方式，加强了患者院外管理及指导，提高了患者院外疾病管理意识及积极性，使患者明确达到管理目标与改善心功能的关系，提高其健康意识及疾病管理意愿，促使患者建立健康的生活方式，从而改善患者心功能[10]。此外，目标管理加强了患者与医护人员的沟通及交流，增强患者治疗信心，同时目标管理让患者学会情绪管理，缓解其不良情绪，促进患者身心健康，从而提高患者生活质量。

式中：X——酸价，mg/g；

V——消耗标准滴定液体积，mL；

V0——空白消耗标准滴定液体积，mL；

C——滴定溶液的浓度，mol/L；

m——滴定用供试品的称样量，g。

2 结果与分析

2.1 检测方法结果

2.1.1 酚酞指示剂滴定法

该方法对试样前处理后，按照GB 5009.229 第一法进行检测，平行检测6 次，测得酸价为1.031 1 mg/g，RSD 为0.45%。

表1 酚酞指示剂滴定法试验结果

2.1.2 冷溶剂自动电位滴定法

该方法对试样前处理后，按照GB 5009.229 第二法进行检测，平行检测6 次，测得酸价为1.029 8 mg/g，RSD 为0.42%。

冷溶剂自动电位滴定法试验结果见表2。

表2 冷溶剂自动电位滴定法试验结果

2.1.3 热乙醇指示剂滴定法

该方法采用自动电位滴定法，平行检测6 次，测得酸价为1.132 6 mg/g，RSD 为0.45%。

热乙醇指示剂滴定法试验结果见表3。

表3 热乙醇指示剂滴定法试验结果

以辅酶Q10类软胶囊为研究对象，当室内温度过低时内容物为固体状态时，将内容物及乙醚/异丙醇混合溶液置于水浴内，采用GB 5009.229 第一法、第二法进行试验，并与GB 5009.229 第三法进行对比，由表1、表2 和表3 可知，3 种方法的酸价检测结果无显著差异，由此说明，经优化后的前处理方式不会对辅酶Q10类软胶囊酸价测定产生影响，测量结果比较接近试验结果的真实值。保健食品辅酶Q10类软胶囊酸价的测定是一个难点，若在不同温度条件下采用不同的酸价检测方法，可能会导致酸价检测结果存在偏差。研究表明，冷溶剂自动电位滴定法可有效避免颜色干扰，适用于颜色较深的样品。另外，该方法测得的结果也较为准确，但是该方法对实验室有一定要求[23]，与指示剂手动滴定相比，电位滴定速度较慢，而较长时间的滴定过程使得滴定结果受到影响。在不能配备自动电位滴定仪的条件下，可采用热乙醇指示剂滴定法和冷溶剂指示剂滴定法，但热乙醇指示剂滴定法仅适用于固体油脂样品，另外，根据表1、表2 和表3 可见，热乙醇指示剂滴定法消耗的滴定体积更多。综合上述分析，使用酚酞指示剂滴定法操作更加简单、便捷，不仅可以提高试验效率、节省试剂，还可以延长了设备的使用寿命，且该方法更适用于颜色较浅的油脂样品，更适用于实验室日常检测。

2.2 不确定度评价

2.2.1 不确定度的来源和分析

测试产生的不确定度采用A 类方法评定。由于重复性测试所导致，来源于单一测定重复性标准偏差u（1）。

系统效应导致的不确定度采用B 类方法评定，包括称取试样产生的不确定度u（2）、50 mL 棕色滴定管产生的不确定度u（3）、氢氧化钠标准滴定液浓度产生的不确定度u（4）、氢氧化钠摩尔质量产生的不确定度u（5）。

2.2.2 不确定度的评价

酸价测量结果重复性引入的不确定度分量urel（1）。重复性测量引入的不确定度可连续测量得到的测量列，采用A 类评定方法进行评定。重复测量6 次，结果见表1。样品平均质量为10.138 5 g，平均酸价为1.031 1 mg/g，标准偏差为0.004 6 mg/g，相对标准偏差为0.004 5，则样品酸价测量重复性引入的相对不确定度为urel（1）为0.004 5。

氢氧化钠标准滴定液的不确定度u（4）。氢氧化钠标准溶液为直接购买的，由标准物质认定证书得到扩展不确定度urel=0.3%，置信概率为95%，浓度为0.100 1 mol/L，假设正态分布，查表得Kp=1.960，因此相对标准不确定度urel（4）=0.001 53。

氢氧化钾摩尔质量所产生的不确定度u（5）。从IUPAC 最新版的原子量表中查的氢氧化钾中各元素的原子量和不确定度见表4，对于每一个元素来说，标准不确定度是将IUPAC 所列不确定度作为矩形分布的、极差计算得到的。

表4 氢氧化钾各元素原子量和不确定度

氢氧化钾各元素原子量和不确定度见表4。

2.2.3 合成标准不确定度计算

影响其结果的各分量相互独立，相对合成不确定度为：

扩展不确定度：取包含因子k=2，则扩展不确定度Urel=3.15%×2=6.30%。

2.2.4 测量扩展不确定度报告

用手动滴定法测定辅酶Q10软胶囊中酸价，测定值为1.031 1 mg/g的测量不确定度为Urel=6.30%，k=2。

3 结论

保健食品因其成分复杂，存在各方面干扰，合适的样品前处理方法和检测方法是影响酸价测定的关键所在。根据保健食品中辅酶Q10类软胶囊内容物特性，对样品前处理进行优化，在常温或低温状态下均能使内容物被混合溶液溶解成澄清的油脂试样。这样既可以使用酚酞指示剂滴定法又可以使用冷溶剂自动电位滴定法测定其酸价，使用酚酞指示剂滴定法检测时，测得标准偏差为0.004 6 mg/g，相对标准偏差为0.45%，扩展不确定度为6.30%。结果表明，利用酚酞指示剂滴定法测定酸价是一种可行的方法，此方法操作简单、重复性好、准确度高，且适用于颜色较浅的食用油脂样品，无需特殊仪器可以快速测出保健食品中辅酶Q10类软胶囊酸价的含量，为今后类似产品的酸价测定奠定了基础。