血清Asprosin、miR-206、IMA在多囊卵巢综合征患者中的表达及临床意义

欧慧慧,胡新,李婧,张畅

多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)是以雄性激素过高、胰岛素抵抗(insulin resis-tance,IR)、内分泌失调造成卵巢异常改变的常见病,常见于育龄女性[1]。有研究认为[2],大约有4%的女性会患PCOS,表现为月经紊乱、多毛、肥胖,还容易影响生育力,对患者家庭生活造成严重伤害。PCOS病因尚不清楚,多认为与代谢、环境、遗传有关。脂肪组织作为机体最大内分泌组织,可分泌参与PCOS发生发展的脂肪因子,如白脂素(Asprosin)可调节IR,与糖尿病、肥胖疾病有关[3]。研究认为[4],PCOS缺血介导的炎性反应和氧化应激是PCOS发生发展的关键,微小RNA-206(micro RNA-206,miR-206)作为miRNA家族重要成员,其表达与IR关系密切;缺血修饰白蛋白(ischemia-modified albumin,IMA)是组织缺血的敏感标志物,可反映不同疾病活动状态,在PCOS患者中可反映机体氧化应激[5]。但由于目前Asprosin、miR-206、IMA三者在PCOS患者中的研究相对较少,对PCOS患者发生IR与三者间的关系不明确,因此,本研究通过对PCOS患者血清Asprosin、miR-206、IMA及逆行检测,旨在分析血清Asprosin、miR-206、IMA在PCOS患者中的表达变化和意义,为PCOS的可能病理生理变化提供参考依据,现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2019年6月—2022年6月青岛市市立医院收治的PCOS患者120例为病例组,另选同期健康体检孕龄妇女60例为健康对照组。根据BMI将PCOS患者分为超重/肥胖亚组(BMI≥25 kg/m2)68例、体质量正常亚组(BMI<25 kg/m2)52例;再根据胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)将PCOS患者分为IR亚组(HOMA-IR≥2.69)73例、非IR亚组(HOMA-IR<2.69)47例。本研究经医院伦理委员会批准(2019审字第077号),入选者及家属均知情同意并签署知情同意书。

1.2 病例选择标准 (1)纳入标准:①符合《多囊卵巢综合征中国诊疗指南》中PCOS的诊断标准[6],青春期、生育期症状:月经异常、多毛、不孕;中老年症状为糖尿病、心血管疾病、高血脂症状;超声下显示卵巢有直径2～9 mm卵泡12个以上,卵巢体积增大超过10 cm3;血清激素检查显示卵泡刺激素正常或偏低,黄体生成素、雌二醇升高。②患者近期无感染,3个月内未使用避孕、降脂、降糖药。③患者均为育龄已婚妇女,年龄18～40岁。(2)排除标准:①存在严重精神类、免疫系统疾病患者。②合并肝肾、心血管疾病及导致雄性激素分泌增多、月经异常的疾病患者,如库欣综合征、卵泡膜细胞增殖症、功能性下丘脑性闭经、甲状腺疾病等。③存在恶性肿瘤者。

1.3 观测指标与方法

1.3.1 血清Asprosin、IMA表达水平检测:研究对象均于月经周期第5～8 d抽取清晨空腹外周静脉血5 ml,闭经患者静脉血抽取时间不限,以3 000 r/min离心10 min,取上清,采用上海臻科生物人Asprosin Elisa试剂盒、人IMA Elisa试剂盒检测血清Asprosin、IMA,操作步骤严格按照试剂盒说明书。

1.3.2 血清miR-206表达水平检测:采用美国 Invitrogen 公司Trizol reagent RNA 提取试剂盒,提取总RNA,采用美国ABI公司7500型荧光定量聚合酶链式反应(PCR)仪,应用实时聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测血清miR-206表达水平,以U6为内参,RNA催化合成采用cDNA:PrimerScriptTMRT试剂盒,RNA扩增采用SYBR Premix Ex TaqTMqRT-PCR试剂盒,miR-206正向引物:5'-ATCCAGTGCGTGTCGTG-3',反向引物:5'-TGCTTGGAATGTAAGGAAG-3',U6正向引物:5'-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3',反向引物:5'-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3',反应条件为:95℃ 5 min预变性,95℃ 15 s 变性,60℃ 30 s 退火,72℃ 10 s延伸,共40个循环,以U6为miR-206内参,采用2-ΔΔCt法计算miR-206表达水平,ΔΔCt =ΔCt实验组标本-ΔCt健康对照组标本。

1.3.3 血糖、血脂检测:鱼跃血糖仪580检测空腹血糖(FPG),上海化邦生物人空腹胰岛素 Elisa试剂盒检测FINS,根据空腹血糖×空腹胰岛素/22.5计算稳态模型胰岛素抵抗指数(homeostatic model insulin resistance index,HOMA-IR);采用西门子全自动生化分析仪Viva-proE检测总胆固醇、三酰甘油。

1.3.4 性激素检测:采用西门子全自动生化分析仪(Viva-proE)检测雌二醇、催乳素、黄体生成素、卵泡刺激素、睾酮等。

1.3.5 血肌酐(SCr)、hs-CRP检测:采用西门子全自动生化分析仪(Viva-proE)检测SCr,上海初态生物人高敏C反应蛋白(hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP)ELISA试剂盒检测hs-CRP。

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2 结 果

2.1 病例组和健康对照组临床资料比较 病例组BMI、HOMA-IR、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、黄体生成素、卵泡刺激素、睾酮、hs-CRP、Asprosin、IMA高于健康对照组,miR-206低于健康对照组(P<0.05),其他资料比较差异无统计学意义(P>0.05),见表1。

表1 健康对照组、病例组临床资料比较

2.2 病例组不同BMI患者血清Asprosin、miR-206、IMA比较 超重/肥胖亚组PCOS患者血清Asprosin、IMA高于体质量正常亚组(P<0.01),miR-206低于体质量正常亚组,见表2。

表2 病例组不同BMI患者血清Asprosin、miR-206、IMA比较

2.3 病例组不同HOMA-IR患者血清Asprosin、miR-206、IMA比较 IR亚组PCOS患者血清Asprosin、IMA高于非IR亚组,miR-206低于非RI亚组(P<0.01),见表3。

表3 病例组不同HOMA-IR患者血清Asprosin、miR-206、IMA比较

2.4 血清Asprosin、miR-206、IMA与各指标间的相关性分析 Asprosin与BMI、HOMA-IR、总胆固醇、三酰甘油呈正相关(P<0.01),miR-206与HOMA-IR、Asprosin呈负相关(P<0.01),IMA与HOMA-IR、Asprosin呈正相关,与miR-206呈负相关(P<0.01),见表4。

表4 血清Asprosin、miR-206、IMA与各指标间的相关性分析

2.5 影响PCOS发生IR的多因素Logistic回归分析 以PCOS患者是否发生IR为因变量(1=是,0=否),以血清Asprosin、miR-206、IMA连续变量为自变量进行多因素Logistic回归分析,结果显示,血清Asprosin、IMA高表达水平、miR-206低表达水平是影响PCOS发生IR的危险因素(P<0.05),见表5。

表5 影响PCOS发生IR的多因素Logistic回归分析

2.6 血清Asprosin、miR-206、IMA及联合对PCOS发生IR的预测价值分析 血清Asprosin、miR-206、IMA及联合预测PCOS发生IR的AUC为0.761、0.894、0.667、0.918,联合预测的AUC高于血清Asprosin、IMA(Z=3.831、4.663,P<0.01),见表6、图1。

图1 血清Asprosin、miR-206、IMA预测PCOS发生IR的ROC曲线

表6 血清Asprosin、miR-206、IMA及三者联合对PCOS发生IR的预测价值分析

3 讨 论

Asprosin是由哺乳动物白色脂肪组织产生的一种与肝脏葡萄糖释放有关的空腹诱导的糖原蛋白激素,由140个氨基酸组成,分子量30 kDa,是反映葡萄糖稳态、胰岛素抵抗、肥胖状态等异常代谢性疾病的有效生物标志物,机体正常状态下在血液中的含量极少,禁食后表达水平会升高,但进食后其浓度恢复正常,因此,认为Asprosin可能参与胰岛素调节[10]。Alan等[11]研究表示,Asprosin表达水平升高与IR的PCOS有一定相关性,可作用于下丘脑调节患者食欲和体质量。miRNAs是一种类似于siRNA的单链RNA,由高等真核生物基因组编码,在细胞生长、发育、凋亡、肿瘤形成过程的调节中起多种作用,miRNA在血液中表达稳定,易于检测,该分子的发现和深入探究为临床疾病的诊疗提供了新思路。miR-206位于人体染色体6p12.2上,在心肌组织、骨骼、肿瘤形成中具有调节作用[12]。研究表示[13],miR-206的表达可能会受胰岛素调节,控制卵巢颗粒细胞凋亡,参与PCOS的发病。IMA是一种较为理想的新型缺血标志物,可反映机体氧化应激反应程度,在一些心血管疾病的早诊断、指导治疗中有重要意义。国外学者Guven等[14]首次报道PCOS患者中存在血清IMA升高情况,PCOS患者由于糖脂代谢异常、胰岛素抵抗,使患者机体处于氧化应激状态。卵泡内分泌微环境存在氧化、抗氧化动态平衡,当机体处于氧化应激时,卵泡局部微环境氧化、抗氧化动态失衡,卵母细胞发育、成熟受损,无法正常排卵,出现月经少、闭经、不孕等PCOS的表现,因此,PCOS不单单是一种妇科疾病,还是复杂、多种因素参与的内分泌紊乱疾病[15]。

本研究中,PCOS患者BMI、HOMA-IR、总胆固醇、三酰甘油、黄体生成素、卵泡刺激素、睾酮、hs-CRP、Asprosin、IMA均高于健康对照组,miR-206表达水平低于健康对照组,表明PCOS可能与上述指标有关,超重肥胖是PCOS常见特征,同时本身为代谢类疾病,存在糖脂代谢异常,虽然超重/肥胖并未纳入PCOS诊断标准,但在PCOS患者中,50%～70%伴有超重/肥胖。IR是PCOS的发病机制之一,IR可提高17α羟化酶活性,促进卵泡膜细胞合成雄激素,引发高雄激素血症,进而影响胰岛素介导的葡萄糖代谢能力,加重机体IR程度,导致恶性循环;IR的存在可影响窦卵泡发育,增加流产风险,降低生育力,同时IR与超重/肥胖相互促进,两者共同存在在PCOS的发生发展中起重要作用[16]。PCOS激素失衡导致总胆固醇、三酰甘油升高,与IR有关,其中激素睾酮作为PCOS患者体内活性最高的雄激素,对卵巢颗粒细胞的分化影响较严重,可导致卵泡发育停滞,影响生育力。研究认为[17],氧化应激是造成PCOS患者体内雄激素升高的重要原因。hs-CRP由PCOS慢性炎性反应引起,可增高心血管疾病、糖尿病风险,袁芬等[18]研究显示,PCOS患者中BMI、hs-CRP、睾酮、黄体生成素、IMA均高于正常健康体检者,hs-CRP与IMA无相关性,其水平升高的原因可能与PCOS患者超重/肥胖有关,与本研究结果相符。Asprosin可影响机体体质量,作为增进食欲激素,其表达水平高说明患者食欲高,缺乏Asprosin可导致食欲减退,患者出现消瘦情况,因此,本研究结果中Asprosin在超重/肥胖PCOS患者中的表达水平较高,同时IR亚组PCOS患者Asprosin较高,高表达水平是影响PCOS发生IR的危险因素,提示Asprosin与PCOS患者BMI、IR有关。Alan等[11]研究显示,RI组和超重/肥胖PCOS患者Asprosin水平较高,Asprosin与PCOS患者的BMI、IR密切相关。Wang等[19]研究提示Asprosin在肥胖儿童中的表达水平较高,与HOMA-IR呈正相关。另有研究表示[20],减肥术后患者血清Asprosin表达水平较术前低,说明BMI与Asprosin有关。本研究结果显示,超重/肥胖PCOS患者血清IMA表达水平较高,高表达水平是影响PCOS发生IR的危险因素,与欧英霞等[21]研究结果一致。miR-206可通过促进胰岛素信号减少葡萄糖产生,本研究结果发现,在超重/肥胖和IR亚组PCOS患者中血清miR-206表达水平较低,低表达水平是影响PCOS发生IR的危险因素,提示miR-206与IR有关,桑敏等[22]研究显示,miR-206与PCOS患者BMI呈负相关,刘彩霞等[23]研究显示,miR-206在PCOS不孕患者中表达水平较低,经治疗后药物通过改善葡萄糖代谢、IR调节miR-206,使miR-206表达水平上升。经Pearson相关性分析显示,血清Asprosin与BMI、总胆固醇、三酰甘油、HOMA-IR呈正相关,miR-206与HOMA-IR、Asprosin呈负相关,IMA与HOMA-IR、Asprosin呈正相关,与miR-206呈负相关,与以往研究结果相符[24-25]。白爱红等[13]研究显示,miR-206与HOMA-IR呈负相关,与本研究结果一致。

褚冉等[26]研究提示,Asprosin在胰岛素调节中扮演重要角色,通过血糖、胰岛素影响PCOS的发生进展,由于PCOS存在IR导致Asprosin水平升高,但具体机制不明,仍需进一步深入研究。进一步研究发现Asprosin预测PCOS发生IR的AUC为0.761,与本研究结果一致。本研究经ROC曲线分析显示,Asprosin、miR-206、IMA及三者联合预测PCOS发生IR的AUC为0.761、0.894、0.667、0.918,三者联合预测的AUC高于Asprosin和IMA,提示联合检测有助于提高PCOS发生IR的预测价值。但由于本研究样本量较小,对于Asprosin、miR-206、IMA与PCOS发生IR的机制未进行详细分析,需临床进一步研究。

综上所述,血清Asprosin、IMA在PCOS中呈高表达,miR-206呈低表达,与IR有关,对预测PCOS患者发生IR具有一定价值,可作为PCOS发生IR的预测指标。

利益冲突：所有作者声明无利益冲突

作者贡献声明

欧慧慧:设计研究方案,实施研究过程,论文撰写;胡新:提出研究思路,分析试验数据,论文审核;李婧:实施研究过程,资料搜集整理,论文修改;张畅:进行统计学分析及课题设计,论文撰写