比格犬妊娠早期孕囊发育及子宫血流变化分析

董志颖,王 岩,郭志林,刘俊平*

(1.内蒙古农业大学 兽医学院,内蒙古 呼和浩特 010018;2.呼和浩特职业学院,内蒙古 呼和浩特 010051)

在兽医临床实践中,超声检查具有准确率高、损伤性小、可操作性强的特点,因而得到广泛应用[1]。犬妊娠后孕囊是负责胚胎发育的成熟囊胚,B型超声可以用于监测孕囊的变化,妊娠初期孕囊非常小,直径只有几毫米,表现为无回声结构(绒毛膜液体),周围有1层薄的高回声壁(滋养层)[2]。子宫动脉血流阻力指数(resistance index,RI)和搏动指数(pulsatility index,PI)是监测犬妊娠的有用变量,通过测量这些变量可以区别犬的正常妊娠和异常妊娠[3]。多普勒超声可以用于检测胎儿的血流供应情况[4],其独特的成像技术可以通过监测子宫动脉血流情况进而来评估胎盘血液循环和预测胎儿存活率[5],目前在监测血液流动及妊娠胎动方面得到广泛应用[6]。

在过去的10余年中兽医工作者将彩色多普勒超声用于马[7]、牛[8]、羊[9]、犬[10]、家猫[11]的报道已有很多,但是多普勒用于犬的妊娠监测和子宫动脉血流特征的研究报道较少[12]。因此,本研究运用B型超声和多普勒超声探查技术监测比格犬的早期妊娠和子宫动脉血液特征,为犬的早期妊娠诊断、子宫动脉血流特征以及胎儿生长发育研究提供数据参考。

1 材料与方法

1.1 试验动物

标准试验比格犬18只,雌性,2～4岁,体重12±2 kg,健康状态良好,购自福州振和实验动物技术开发有限公司,许可证号SCXK(闽)2018-0001。

1.2 试验器材和试剂

犬孕酮ELISA试剂盒,新启迪生物科技有限公司;MyLab60型彩色多普勒超声诊断仪和LA523 4-13 MHz线性传感器,百胜(深圳)医疗设备有限公司;宠物专用保定架;兽用耦合剂,天津市西苑寺制作所;显微镜CX21,日本Olympus公司;载玻片,江苏世泰实验器材有限公司;Dif-Quik染液,北京普博斯生物科技有限公司。

1.3 试验方法

1.3.1 试验动物繁殖管理 比格犬单独或成对饲养在室内,日照时间充足,每天喂2次宝路牌成犬犬粮,并自由饮水。每天对母犬进行外阴部检查,母犬出现外阴肿胀和阴道血样分泌物被认为是发情前期的标志,一般持续7～12 d。每天对母犬进行阴道上皮细胞收集检查,并在Dif-Quik染液染色后进行细胞学检查,以建立无核细胞指数,发情前期的第5天开始采集血样,之后每周采集3次血样,通过ELISA测量血浆孕酮浓度,当血浆孕酮浓度首次达到5 μg/L(5 ng/mL)的那天被定义为排卵日,即黄体期的第1天[13]。所有比格母犬在排卵后1或2 d交配,间隔24 h交配第2次,以第2次配种为配种第1天(d1)。

1.3.2 B型超声监测孕囊的变化 配种后第20天进行超声检查。超声检查前,对试验比格犬前界至剑状软骨部、右侧至第11肋骨末端、左侧至最后肋骨部、后界为耻骨联合部进行备皮处理。使用MyLab60 VET机器和LA523 4-13 MHz线性传感器进行B型超声和多普勒超声检查。按照各器官的解剖位置及相互之间位置关系,在相应区域进行扫查,可以定位于膀胱或者肾脏,子宫位于膀胱的背侧、直肠的腹侧,卵巢位于肾脏后方1～2 cm,以此作为定位点来扫查子宫[14]。将试验犬置于仰卧位,根据超声扫描的需要,将其改为右侧或左侧卧位。利用B型超声检查确定是否存在孕囊,如图1,测量孕囊的头臀侧外径(OLL)、头臀侧内径(ILL)、背腹侧外径(ODV)和背腹侧内径(IDV)[15]。每只犬进行3次测量,并确定每个指标的平均值。将声像图进行保存分析,总结不同阶段声像图的规律。

图1 比格犬孕囊早期的超声成像及其直径的测量

1.3.3 多普勒超声监测子宫动脉血流的变化 于妊娠第22、25及28天依据1.3.2的试验方法找到子宫,在子宫旁侧找到与子宫并行的子宫动脉,如图2,用脉冲多普勒测定子宫动脉收缩期峰值流速(PSV)、舒张末期流速(EDV)、搏动指数(PI=[PSV-EDV]/平均流速)和阻力指数(RI=[PSV-EDV]/PSV)[15]。每只犬进行3次测量,并确定每个指标的平均值。将血流图进行保存分析,总结不同阶段血流图的规律。

图2 多普勒模式下子宫动脉血流的测量

1.4 数据分析

2 结果与分析

2.1 细胞学检查结果

细胞学检查结果见图3和图4。由图3可知,比格犬发情初期阴道细胞多为红细胞和脱落的有核上皮细胞,发情末期阴道细胞多为角质化上皮细胞;由图4可知,角质化上皮细胞在发情第6～8天迅速增加,在第11天左右达到峰值,红细胞由发情初期开始逐渐减少。

图3 比格犬发情期阴道涂片镜检

图4 发情期阴道细胞占比

2.2 血浆孕酮含量

比格犬发情期血浆孕酮含量见表1,孕酮在犬发情第9天左右达5 ng/mL。

表1 发情期血浆孕酮检测结果

2.3 孕囊变化情况

比格犬孕囊变化情况见表2和图5。由表2可知,OLL在妊娠第20～23天无显著差异(P>0.05),第24～25天显著高于第23天(P<0.05),第26～27天显著高于第24～25天,显著低于第28天(P<0.05);ILL在妊娠第23天显著高于第20、21天(P<0.05),第26～28天显著高于第23～24天(P<0.05);ODV在妊娠第23天显著高于第20天(P<0.05),第25天显著高于第23天,显著低于第28天(P<0.05);IDV在妊娠第22天显著高于第20天(P<0.05),第25天显著高于第22天(P<0.05),第27天显著高于第25天,显著低于第28天(P<0.05)。由图5可知,妊娠时间对孕囊各直径有正向影响。

表2 不同妊娠时间孕囊直径

图5 孕囊直径与妊娠时间关系

2.4 子宫动脉血流变化情况

子宫动脉血流测定结果见表3。由表3可知,各诊断日期之间子宫动脉血流均无显著差异(P>0.05)。

表3 不同妊娠天数子宫动脉血流

3 讨 论

尽早确定犬是否妊娠便于兽医尽早干预计划外的妊娠,减小对母犬的伤害。妊娠检查也可发现子宫的生理性或病理性变化,以免造成更大的损害。因此,早期妊娠诊断是犬繁殖中必不可少的一部分。

在人早期妊娠的研究中显示,孕囊的平均直径每周可以增加约5 mm,可以根据孕囊的平均直径来推测孕龄及胚胎的生长发育情况[16]。本研究中绝大多数比格犬孕囊出现的时间是配种后第20天,其中1只比格犬在配种后的第18天检测到孕囊的存在,早期孕囊很小,直径只有几毫米,受肠内气体的影响易被忽略,检查时需要细心观察,且检查过程中易受到肠管及血管的干扰,检查时可以90°转动探头、调换到多普勒模式下并根据分层情况进行区分。随着胚胎的发育,卵圆形的孕囊逐渐变大,OLL、ODV、IDV均在第23天开始迅速增长,ILL在第22天迅速增长,且在结果中可以看出孕囊头臀侧径和背腹侧径增长速度不一,原因可能与孕囊的生长方向有关,检查结果总体显示孕囊在妊娠早期生长迅速。

子宫动脉作为母胎循环的主要供应源与运输通道,直接关系到早期妊娠的成败。通过多普勒模式测量子宫动脉血流情况对于早期妊娠诊断和监测胎儿生长发育具有重要意义[17]。本研究中,妊娠母犬子宫收缩期峰值速度均值为23.26±1.89 cm/s、舒张末期速度均值为5.78±1.05 cm/s,因其受到母犬产仔数的影响,产仔数越大其数值越高[18],所以没有具体范围,且在正常妊娠过程中,随着胎龄的增加,数值也逐渐升高;搏动指数均值为1.73±0.23;血管阻力指数均值为0.75±0.05,符合Batista等[18]研究结果中所给出的参考范围(0.64～0.79),且在测定期内所监测的子宫动脉血流搏动指数和血管阻力指数变化不明显,同Miranda等[15]研究的结果相符。在正常妊娠中后期,子宫动脉RI和PI随胎龄的增加逐渐降低,反映子宫动脉灌注量增加,与胎儿的不断增长有关,不受产仔数的影响,所有多普勒参数均不受年龄、体重或胎次的影响[19]。在人和犬的妊娠过程中,子宫动脉RI无下降趋势则提示与产科疾病相关,且这种异常的血流模式先于其他超声改变出现[19]。

超声能够对妊娠早期孕囊进行准确检测,从而直观地反应胚胎的发育情况,也有助于对胚胎血液供应情况及阻力指数等变化进行分析[20]。妊娠早期胚胎的发育对子宫血流的灌注具有较强的依赖,若有子宫血流灌注不足的情况会对胚胎的发育及继续妊娠产生不利的影响[21],因为子宫动脉血流限制了胎盘的氧气和营养,会直接影响胎盘功能和胎儿的生长发育[22]。

4 结 论

利用超声探查技术成功地监测到比格犬妊娠早期孕囊OLL、ILL、ODV、IDV随着妊娠时间增加而快速增长,且妊娠时间对其有正向影响;子宫动脉血流在测定期内变化不明显;检测结果显示妊娠情况良好、胎儿发育正常。