某猪场致生长育肥猪腹泻的猪圆环病毒2型(PCV-2)病原学检测与病理组织学观察

张永康,杨秀进

(1.宁夏职业技术学院,宁夏 银川 750021;2.北京科牧丰生物制药有限公司,北京 102600)

猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)为圆环病毒科的圆环病毒属成员,动物病毒中直径最小的环状 DNA 病毒,该病毒主要分为1型(PCV-1)和 2型(PCV-2),其中PCV-2为引起仔猪发病的致病血清型[1]。相关研究表明,国内猪场 PCV-2 阳性率高达100%,常常引起混合感染或继发感染[2]。猪感染PCV-2后免疫功能会受到损害,机体抵抗力降低,更易与猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬甚至肠道疾病形成混合感染,被视为我国养殖业重大危害之一,给养猪业造成巨大的经济损失。

生长育肥猪腹泻在国内养猪业是一个很普遍的问题,很多人认为主要原因是胞内劳森氏菌导致的回肠炎,却忽略了另外一个因素——PCV2。本文介绍一起典型的由PCV-2引起感染的案例,涵盖鉴别诊断和综合防控,希望对生长育肥猪腹泻的控制提供参考。

1 材料与方法

1.1 猪场情况

宁夏某1 500头单点式猪场,商品猪不进行PCV-2免疫,80日龄左右的生长育肥猪群出现顽固性腹泻,腹泻粪便的形状复杂,大致分为水泥样粪便和黄色粪便,发病率70%以上,其中部分猪只最终会出现逐渐消瘦、死亡。用抗生素仅能控制约50%的病例。

1.2 试验材料

1.2.1 病料采集 选取2头具有典型腹泻症状的病猪扑杀,用注射器采集5 mL血液样品,2～8 ℃保存,送实验室进行病原检测。无菌采取其脾脏、回肠、淋巴结等脏器,进行福尔马林固定。

1.2.2 主要试剂和仪器 中性福尔马林固定液(10%),G2161,北京索莱宝科技有限公司,PCV-2荧光PCR检测试剂盒,SYA415-VQF,北京百奥莱博科技有限公司。大动物解剖器械,ZM-21,泰兴市振牧畜禽器材厂;实时荧光定量PCR检测仪,QuantStudio 5,美国ABI。

1.3 试验方法

1.3.1 病毒DNA提取和PCR检测 采集病猪血液分离出血清,然后采用无菌枪头吸取50 μL血清至1.5 mL无菌试管中,加入50 μL DNA抽提液充分混匀,100 ℃恒温10 min,13 000 r/min离心3 min,取上清5 μL进行PCR反应。反应体系配制、qPCR反应条件和结果分析均根据说明书进行操作。

1.3.2 病理变化分析 无菌采集病猪的脾脏、淋巴结等主要病变组织,观察其病变。

1.3.3 病理组织学观察 选取剖检病猪回肠、淋巴结、脾脏等病变部位,置于中性福尔马林固定液。固定3 d后,修剪组织至合适大小,用PBS清洗组织5遍,然后进行石蜡切片制作并进行HE染色,显微镜下观察结果。

2 结果与分析

2.1 临床症状

临床症状主要表现为80日龄左右的生长育肥猪群出现顽固性腹泻,腹泻粪便形状以水泥样粪便(图1A)和黄色粪便(图1B)为主,发病率在70%以上,其中部分猪只最终会出现逐渐消瘦、死亡。

图1 腹泻病猪的粪便

2.2 实时荧光定量PCR检测

实时荧光定量PCR检测显示,剖检的2头猪的血液样本中PCV-2的CT值均远远小于PC对照,结果显示,2头猪均为PCV-2强阳性(CT值3.5～5)(图2)。

图2 实时荧光定量PCR结果

2.3 剖检及病理组织学观察

剖检发现有许多具有普遍性的病变:脾脏有轻微梗死(图3)、淋巴结萎缩,其他脏器无显著变化。

图3 脾脏轻微梗死

通过对病料组织固定、脱钙、石蜡包埋、切片和HE染色,镜检结果显示,回肠肠粘膜上皮细胞显著增生,由单层变为多层(图4)。淋巴结和脾脏的淋巴细胞数量显著减少(图5、图6)。

图4 回肠粘膜上皮细胞显著增生,由单层增生为多层

图6 脾脏淋巴细胞数量显著减少,白髓淋巴细胞减少尤为明显

3 讨 论

猪圆环病毒(PCV)属于圆环病毒科圆环病毒属,是当前已知的最小的病毒。PCV主要分为3种血清型:PCV-1、PCV-2 和PCV-3。其中 PCV-2是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)等相关疾病的主要病原[3]。PCV-2 对不同年龄、品种的猪都具有很强的感染性,育肥猪一般是隐形感染;母猪感染主要表现为繁殖障碍;仔猪感染后主要表现为仔猪先天性震颤(CT)、断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)和猪皮炎肾病综合征(PDNS)等,其中PMWS和PDNS对仔猪危害较大[4]。在国内猪场PCV-2相关性疾病发病率高,但在生长育肥猪阶段与回肠炎一起引起顽固性腹泻的病例并未见报道。

本猪场育肥猪出现顽固性腹泻,发病率70%以上,其中部分猪只出现逐渐消瘦、死亡。用抗生素仅能控制约50%的病例。从临床发病症状可以获知该病原不只是胞内劳森氏菌导致的回肠炎,还存在病毒性传染病的可能;从剖检及病理组织学观察,发现该病主要损害的是免疫器官和免疫细胞,这和猪圆环病毒作为一种免疫抑制性疾病引起的症状相契合,最后通过实时荧光定量PCR检测PCV-2呈强阳性,而该猪场未免疫PCV-2,进一步证实了该猪场受到了猪圆环病毒2型的感染。

本试验在生长育肥猪腹泻中检出PCV-2,并确定其是引起育肥猪腹泻的罪魁祸首之一,对临床防治育肥猪腹泻具有很强的指导意义。该猪场后来加强了PCV-2免疫,生长育肥猪再结合抗生素对回肠炎的防控,猪群腹泻控制得到了极大改善(腹泻率<3%)。

4 结 论

本试验通过对发病猪场病猪进行临床症状观察、实时荧光定量PCR检测、剖检及病理组织学观察,实验结果表明,猪圆环病毒2型(PCV-2)是引起该猪场生长育肥猪腹泻的主要病原之一。