陈 瑜,李晓丽,韩光奎,倪 亚,李 勇
(1.泗阳县三庄镇农村工作局,江苏 泗阳 223700;2.泗阳县水产技术指导站,江苏 泗阳 223700;3.泗阳县倪亚水产技术服务中心,江苏 泗阳 223700)
2022 年12 月初,泗阳县穿城柴河渔场丁老板13 亩塘放养的草鱼种,入塘不到1 周,陆续发生水霉病,经历两个多月的治疗,效果一般,死鱼不断,造成一定的病害损失。现回顾整个疾病过程,溯源找因,探索处置方案,以此启示和指导养殖户做足、做实前期预防细节,以期达到科学精准防控。
发病池塘13 亩,平均水深1.8 米。2022 年11 月底成鱼起捕销售后,因年底鱼种价格便宜,于12月3日在塘底冻晒不到4天就从附近购鱼种入塘。主放品种为草鱼,搭配放养鲢、鳙、鲤,具体放养情况见表1。拉网起捕、操作运输较规范,入塘前,于水车厢中以1 升水加40 克食盐配比浸浴10 分钟左右,采用塑料布铺设放鱼道,谨慎细致入塘。鱼种入塘约1周,于12月9日发现有草鱼种零星死亡,开始使用硫醚沙星与二氧化氯泼洒,连用3 天,不仅未见好转,鱼死亡量反而上升,从每天7~8 尾上升至30 尾,至2023 年2 月1 日,草鱼死亡量约1 150 尾,单品种死亡率11%。整个治疗过程长、见效慢。
表1 13亩塘鱼种放养情况
12月15日接诊后,塘口巡查发现有20多尾草鱼独游岸边,其遇人不惊,反应迟缓,池塘下风口处慢游鱼较多;水中明显可见鱼体尾柄、头部着生灰白色絮状绒毛,少数鱼体鳍条溃烂,呈扫帚状,也见部分濒死鱼鳍条完好,但鳍末梢发白,呈白色镶边;鱼体连片发炎、鳞片脱落,部分肌肉溃烂,溃烂灶边缘着生灰白色绒毛物;多数可见眼眶、吻部肌肉溃烂。
用眼科剪刀剪取濒死鱼少许病灶边缘灰白色绒毛,制成水浸片进行显微镜观察,见水霉外菌丝,呈暗灰色,粗壮,分枝较少,梢端膨大成棒状。
鱼体周身鳞片粗糙,暗淡发灰无光泽;部分濒死鱼眼球凹陷;鳃丝暗紫肿胀,鳃丝末端有灰白色发暗弧线,整个鳃丝覆盖明显灰白色黏液;脾正常,未见脆性变化,肝脏见花斑状纤维化纹路;胆囊大,胆汁盈足,暗灰绿色;肠道内无食物,韧性尚好,内皱襞较完好,无明显坏死细胞脱落;肾脏暗红有弹性;心脏动脉球血液淤积发紫。
将鱼肠道剖检,刮取肠道内容物,镜检无肠道寄生虫;剪取鳃丝制成水浸片,镜检见大量车轮虫寄生,10×10倍视野下计数33个车轮虫。
12 月15 日10 时,池塘下风口水温2℃、透明度30 厘米、pH 7.9、氨氮1.41 毫克/升、亚硝酸盐0.01 毫克/升、高锰酸盐指数6.81 毫克/升、总氮2.51 毫克/升、总磷0.19 毫克/升、悬浮物67.7毫克/升。总体水质指标氨氮偏高,悬浮物偏多,藻类单一。
细菌检测:在无菌实验室用接菌环探入病灶溃烂深处,接菌划线分离于普通营养琼脂平板上,经生化培养箱中28℃、24 小时培养后,挑取优势菌落,再次划线纯化分离培养(28℃下)24 小时,依据梅里埃API-20E细菌鉴定操作规程,挑取纯化分离后的菌落配制0.5麦氏浊度菌悬液,将其按规定量滴加至试剂条每个生化反应小杯管中,置于恒温生化培养箱37℃、24 小时进行生化反应,比色判读。另用无菌棉签蘸取1个纯化菌落进行氧化酶反应试验判读。判读鉴定结果为API-20E生化反应序号为2200004,菌株为荧光假单胞菌,鉴定率99.9%(见表2)。
表2 实验室病菌检测API-20E鉴定试剂条生化反应判读结果
菌落形态观察:圆形,直径1.5~2 毫米,灰白色,半透明,边缘整齐,微凹,表面较光滑。菌株革兰氏染色阴性(G-),杆状,两端钝圆。
药敏试验:药敏分析96 孔试剂板,对分离纯化菌株进行药物感受性试验,其结果如表3。
试验表明:本次分离得到的优势菌落荧光假单胞菌对磺胺间甲氧嘧啶钠、氟苯尼考、甲砜霉素耐药性最强,氟苯尼考对荧光假单胞菌的MIC值水平较高,MIC>100微克/毫升,其次磺胺间甲氧嘧啶钠MIC>512微克/毫升。盐酸多西环素对荧光假单胞菌最为敏感,MIC值0.2微克/毫升,其次为恩诺沙星,MIC 值0.39 微克/毫升。据此,首选抗菌药物为盐酸多西环素和恩诺沙星,另外硫酸新霉素MIC值1.56微克/毫升,也可用于处方选药。
综合池塘环境观察、水质检测、濒死鱼解剖镜检和实验室病原检测,本次病例为冬放鱼种水霉病继发细菌性赤皮、蛀鳍、疥疮等,属真菌性与细菌性综合感染发病。
①选择晴好天气,在13:00前后,使用硫酸铜0.5 克/米3+硫酸亚铁0.2 克/米3,化水全池泼洒杀灭车轮虫(第1 天);②五倍子末200 克/(亩·米)+食盐2 500 克/(亩·米),熬水全池泼洒(第3 天);③10%聚维酮碘500 毫升/(亩·米)(继第4天开始泼洒,隔天1次,用药2次);④底部增氧与改良,过氧碳酸钠400 克/(亩·米)(根据监测氨氮、pH指标变化适度增减),治疗期间隔天1 次,共4 次,于17:00 前后使用;⑤发病时段气温较低,鱼摄食不旺,虽然药敏试验出恩诺沙星、盐酸多西环素、硫酸新霉素对致病菌敏感,但实际内服抗菌措施很难到位。
12 月15 日接诊后,在进入实验室病原检测的同时,就初定给药方案予以治疗,主要从环境改良与水体灭菌入手,历经1周疗程,所见濒死鱼体表絮状绒毛明显减少,但草鱼体表肌肉溃烂、蛀鳍等继发细菌性感染的死亡尾数持续15 尾/天左右,占比多数,后续跟踪流调此现象延续至2月初才渐渐回落。