注射用血栓通（冻干）包装系统密封性研究

陈苑君 童冰妮 麦志雄 冼卫清　

注射用血栓通（冻干）包装系统密封性研究

陈苑君1,2童冰妮1,2麦志雄1,2冼卫清1,2

（1.广西梧州制药（集团）股份有限公司，广西 梧州 543002；2.广西三七综合利用技术重点实验室，广西 梧州 543002）

目的：建立测试注射用血栓通（冻干）包装系统密封性的真空衰减测定方法。方法：利用密封性测试仪、气体流量计及设置的不同样品组，摸索最优的方法参数并完成验证，并与微生物挑战法进行方法比对，用经过验证的真空衰减法测试注射用血栓通（冻干）包装的密封完整性。结果：该方法在0.03～1.65 cc·min-1流量值（模拟泄漏率）范围内线性关系良好，=0.999 9。可检测的最小泄漏孔径为3 μm。判定不同泄漏等级（漏孔尺寸）样品准确率达100%，高于微生物挑战法。结论：该方法灵敏度及准确性高，操作简单，可有效用于注射用血栓通（冻干）的包装系统密封性试验。

注射用血栓通（冻干）；包装系统密封性；真空衰减法

引言

包装系统密封性（package integrity），又称容器密封完整性（container closure integrity），是指包装系统防止内容物损失、微生物侵入以及气体（氧气、空气、水蒸气等）或其他物质进入，保证药品持续符合安全与质量要求的能力。包装系统密封性检查（package integrity test），又称容器密封完整性检查（Container closure integrity test，CCIT），是指对任何破裂或缝隙的包装进行泄漏检测（包括理化或微生物检测方法），检查可以确定泄漏的尺寸和位置[1]。从1998年开始，欧美药品监管机构便陆续发布并不断完善包装系统密封完整性的相关法规，而我国对药品包装密封完整性要求最早出现在《药品生产质量管理规范（2010年修订）》中；2020年相继出台了《化学药品注射剂仿制药质量和疗效一致性评价技术要求》和《化学药品注射剂包装系统密封性研究技术指南（试行）》（下简称《指南》）[2]。《指南》指出，根据制剂自身特点、不同的包装类型等，应选用适宜的密封性检查方法，且应该进行适当的方法学验证。常用的密封性检查方法有概率性方法（如微生物挑战法、色水法、气泡释放法等）和确定性方法（如真空衰减法、高压放电法、质量提取法等）。

注射用血栓通（冻干）为三七主根茎中活性成分三七总皂苷加工制成的冻干粉针剂，有活血祛瘀、通脉活络的功效，常用于治疗淤血阻络、中风偏瘫、胸痹心痛及视网膜中央静脉阻塞症。该无菌药品为类白色或淡黄色无定形粉末或疏松固体状物，具有一定的引湿性。因此在包括药品生产、质量控制、运输、储存等整个药品生命周期内，为了避免外环境因素对无菌药品质量的影响，需确保药品的包装系统密封性是否达到要求，以保证药品质量及临床用药的安全性。

注射用血栓通（冻干）的包装系统包括中硼硅玻璃管制注射剂瓶（以下简称西林瓶）、注射用冷冻干燥用氯化丁基橡胶塞和铝塑盖。在注射用血栓通（冻干）全生命周期中，如包装设计过程中西林瓶、铝盖、胶塞的不匹配，药品储存过程中包装系统发生泄漏等，均可能导致西林瓶内气压变化，造成外界气体、有害微生物及颗粒污染物进入等情况发生，从而影响药品在有效期内的质量。有文献报道，胶塞硬度、黏弹性、润滑性、覆膜等对容器密封完整性有潜在的影响；但也有研究表明，胶塞（配方、大小）、瓶（大小、类型）对包装系统一年内的容器密封完整性影响较小[3]。因此还需要结合具体制剂的包装系统特点开展研究。

目前，未见针对注射用血栓通（冻干）包装系统密封性开展的研究。本研究拟采用真空衰减法检查注射用血栓通（冻干）的包装系统密封性。

1 材料、仪器和样品制备

1.1 材料

中硼硅玻璃管制注射剂瓶（7 mL，沧州四星玻璃股份有限公司），中硼硅玻璃管制注射剂瓶（3、5、10 μm漏孔，重庆奥凯科技有限公司），抗生素瓶用铝塑组合盖、注射用冷冻干燥用氯化丁基橡胶塞（φ20 mm，安徽中马橡塑制品有限公司），注射用血栓通（冻干）（规格：150 mg/瓶）由广西梧州制药（集团）股份有限公司提供。

1.2 仪器

微泄漏密封性测试仪（Leak-S，济南三泉中石实验仪器有限公司）、气体流量计（FCO210，Furness Controls），分析天平（TB-215D，DENVER），分析天平（T-2002，DENVER），密封性测试仪（MFY-05S，济南三泉中石实验仪器有限公司），密封性测试仪专用测试腔体（7 mL）。

1.3 样品制备

1.3.1 阴性样品制备

按照注射用血栓通（冻干）包装系统的外形及大小，使用实心不锈钢制作阴性样品，经检测无漏气后方可使用。

1.3.2 阳性样品制备

取3、5、10 μm泄漏孔径的西林瓶，装入150 mg注射用血栓通（冻干）粉末后，用注射用冷冻干燥用氯化丁基橡胶塞进行压塞，轧盖。

1.3.3 大漏样品制备

取掉注射用血栓通（冻干）包装的上部塑料盖，把孔径1 mm玻璃吸管从制剂包装的胶塞处插入距西林瓶底部约2.5 cm处，裁掉胶塞外多余玻璃管。

2 方法

真空衰减法的原理是将待测的包装容器置于密封性测试仪专用测试腔体中，对测试腔体进行抽真空，此时容器内外会产生压差，导致容器内部气体通过漏孔进入测试腔体，通过监测压力变化，将压力变化值和参考值作比较，以判断容器是否存在泄漏。通过设置不同阶段的压力值及时间，可对不同泄露程度的包装容器进行判定。

仪器参数设置如下：第一阶段，压力为5.0 mbar，平衡时间为4.0 s；第二阶段，压力为1.7 mbar，平衡时间为7.0 s，测试时间为18.0 s，泄压时间为5.0 s。

3 结果与分析

3.1 专属性

取“1.3.1”项中的阴性样品连续测试6次，阴性样品的差压波动均在2.5 Pa内，符合专属性要求。

表1 专属性结果

注可接受标准为差压波动在2.5 Pa内。

3.2 线性

泄漏一般被概念化为具有限定直径的孔，或具有特殊直径和长度的通道，大多呈不规则性。因此，可用气体泄漏率确定泄漏尺寸。气体泄漏率是在特定温度条件下穿过泄漏路径的气体流速（以质量或体积单位计）的量度。本试验通过使用流量计，调整流量值分别为0.03、0.13、0.54、0.84、1.65 cc·min-1，模拟瓶子不同的泄漏率，记录各流量值下得到的差压，计算流量值（泄漏率）与差压的线性关系。结果见表2、图1。方法中流量值和差压的相关系数r为0.999 9，大于0.990，符合线性要求。

表2 线性结果

注cc为体积单位，1 cc即1 mL，也等于1 cm3。

图1 线性标准曲线

3.3 检测限（P/F阈值）

采用0.03 cc·min-1泄漏率所得的差压值作为实时限值，能够准确判定阴性样品合格、最小孔径（3 μm）阳性样品不合格，准确率达到100%。即泄漏率检测限为0.03 cc·min-1；经阳性瓶验证的检测限为3 μm。

3.4 准确度

设置3组不同泄漏等级（漏孔尺寸）的样品作为准确度样品，分别为无漏（0 μm，阴性样品）、微漏（3、5、10 μm，阳性样品）、大漏（1000 μm，大漏样品）等级。将样品分别放入测试腔进行测试，统计判定准确率。结果显示，阴性样品合格，阳性样品、大漏样品不合格，判定不同漏孔尺寸样品的准确率达100%。

3.5 精密性

3.5.1 重复性

取3 μm阳性样品重复测试6次，差压分别为49.8、48.1、50.2、49.5、48.0、49.6 Pa，RSD为1.88%。

3.5.2 中间精密度

由另一位实验员在不同时间取3μm阳性样品重复测试6次，差压分别为49.6、47.7、49.8、49.3、47.3、49.6 Pa，RSD为2.23%。

与重复性共12份样品一起计算，差压RSD为1.99%。

3.6 耐用性

其它参数不变，分别调整第二阶段测试压力（1.7±0.1）mbar、平衡时间（7.0±1.0）s和测试时间（18.0±1.0）s，分别测试阴性样品、3 μm阳性样品和大漏样品，结果见表3。

表3 耐用性结果

结果显示，改变方法参数后，均能100%准确判定结果，表明该方法耐用性良好。

3.7 样品测定

采用拟定的真空衰减法，分别测定初始点的注射用血栓通（冻干）（150 mg/瓶）6批的包装密封性，包装用的胶塞分别为河北橡一医药科技股份有限公司、安徽中马橡塑制品有限公司提供的注射用冷冻干燥用氯化丁基橡胶塞，以同时考察不同厂家生产的相同类型胶塞对包装密封性的影响。

仪器预热稳定后，使用阴性样品进行校准。把阴性样品放入腔体中，调整流量计至0.03 cc·min-1作为限值进行测试。结果见表4。结果显示，初始样品各批次注射用血栓通（冻干）的包装密封性合格率均为100%，表明该药品在初始点的包装密封性良好。

表4 包装密封性测试结果

注仪器根据试样的差压值判定是否合格，试样的差压值大于或等于0.03 cc·min-1泄漏率的差压值为不合格，试样的差压值小于0.03 cc·min-1泄漏率的差压值为合格。

3.8 真空衰减法与微生物挑战法（侵入法）的比较

采用微生物挑战法（侵入法）与真空衰减法进行比较，对注射用血栓通（150 mg/瓶）的药品包装密封性进行研究。

菌种使用广东省微生物菌种保藏中心提供的缺陷假单胞菌。培养基使用胰酪大豆胨液体培养基（TSB），取29.8 g培养基，加入1 L纯化水，搅拌溶解后，分装到瓶子里，121℃灭菌20 min后待用。取无漏孔的西林瓶，分别灌装注入4 mL培养基，胶塞压塞，轧盖密封，121℃湿热条件下灭菌20 min后取出检漏，未检测到泄漏即可作为试验样品。取已激光打孔的各泄漏孔径（3、5、10、15、30 μm）西林瓶，分别灌装注入4 mL培养基，胶塞压塞，轧盖密封，121℃湿热条件下灭菌20 min，即得阳性样品。侵入试验开始前确认试验样品和阳性样品的无菌状态，并验证试验样品的促菌生长能力，保证该试验方法稳定可靠。

将试验样品及阳性样品倒置浸入到制备好的高浓度菌悬浮液中（菌悬浮液浓度达到1×106CFU·mL-1以上），抽真空使绝压为54.9 kPa±5%（参考ASTM D6653，模拟4 877 m的高度），保持10 min再放真空至常压，继续浸泡3小时，取出。用干净的棉球擦干试样容器外残余的菌悬浮液，置于紫外灯下照射30 min后，置30℃～35℃培养箱中培养14天，结果见表5。微生物侵入试验结果显示，3 μm孔径阳性样品有58%的试验菌侵入率，其余孔径阳性样品均完全侵入，试验样品全部没有细菌侵入。结果表明，阳性瓶被试验菌侵入存在一定概率，且耗时较长。而真空衰减法灵敏度较高，且在本方法检测限以上的漏孔尺寸样品达到100%的检出率。

表5 微生物挑战法（侵入法）结果

4 结论

利用真空衰减法对注射用血栓通（冻干）包装系统密封性进行检查，从专属性、线性、检测限、准确度、精密度和耐用性等指标验证该方法，验证结果表明该方法稳定、可靠。准确性、耐用性等均满足预先设定的限度要求，即可对注射用血栓通（冻干）（150 mg/瓶）包装系统大于0.03 cc·min-1的泄露率（通过比较差压值）做出准确判定。

对比真空衰减法和微生物挑战法，在微生物挑战法中，微生物未能100%侵入3 μm孔径的阳性样品，存在一定的概率性，这与文献中报道的微生物挑战法研究中泄漏孔径范围为5～10 μm的侵入率能达到100%的结果一致[4]。而本试验中真空衰减法可以对大于0.03 cc·min-1的泄露率（经阳性瓶验证检测限为3 μm）做出100%准确判定，证明了真空衰减法较微生物挑战法具有更高的灵敏度及准确性。

包装密封性研究应贯穿整个药品的生命周期，以确保患者药品使用的质量和安全。通过对注射用血栓通（冻干）初始样品各批次的包装密封性进行测试，合格率均为100%，表明该无菌药品在初始点的包装密封性良好，为药品在储存、运输期间免受外界如水汽、微生物等因素影响提供保障。除产品包装设计阶段及生产放行阶段外，放行后的稳定性考察阶段的包装系统密封性研究同样十分重要。本试验结果表明，真空衰减法能用于开展如血栓通等冻干粉针剂初始点的包装密封性检查；同时其作为一种无损的检测方法，对西林瓶/胶塞/铝盖的包装系统而言具有操作简单、方便、省时的特点，有利于后续开展稳定性考察中的包装密封性研究，也可为今后开展其他药品品种的包装系统密封性检查提供检测思路及方法基础。

[1] The United States Pharmacopeial Convention. (1207) Package integrity evaluation-sterile products[EB/OL]. (2018-4-6) [2022-11-30]. https://www.doc88.com/p-5426418036578. html．

[2] 陆维怡，蔡荣. 国内外药品包装系统密封完整性研究与保障药品质量安全的思考[J]. 中国药事，2021，35(7): 828-834.

[3] 马骏威，郭涤亮，刘涓，等. 胶塞/玻璃瓶容器密封完整性研究的探讨[J]. 中国新药杂志，2021，30(5): 394-398.

[4] 史春辉，尹翔，张肖宁，等. 包材密封性微生物挑战法实验方案探讨[J]. 中国药物警戒，2022，19(11): 1181-1185.

Study on Sealability of Packaging System of Xueshuantong (Lyophilized) for Injection

Objective: To establish a vacuum decay measurement method for testing the sealability of packaging system of Xueshuantong (Lyophilized) for injection. Methods: Using the sealing tester, gas flowmeter and different sample sets, the optimal method parameters were explored and verified, and compared with the microbial challenge method. The sealing integrity of the packaging of Xueshuantong (lyophilized) for injection was tested using a proven vacuum decay method. Results: The linear relationship of the method was good in the range of 0.03～1.65 cc·min-1flow rate (simulated leakage rate),=0.999 9. The minimum leak aperture that can be detected is 3 μm. The accuracy of determination of samples with different leak grades (leak hole size) was 100%, higher than that of microbial challenge method. Conclusion: The method has high sensitivity, high accuracy and simple operation, and can be effectively used in the sealing test of the packaging system of Xueshuantong (lyophilized) for injection.

Xueshuantong (lyophilized) for injection; sealability of packaging system; vacuum decay method

R95; TB48

A

1008-1151(2023)09-0030-04

2023-06-02

中央引导地方科技发展资金项目（桂科ZY22096004）；梧州市科技计划项目（202202020）。

陈苑君（1986－），女，广西梧州制药（集团）股份有限公司工程师，研究方向为质量标准研究及质量控制。

童冰妮（1986－），女，广西梧州制药（集团）股份有限公司高级工程师，研究方向为药品质量标准建立、质量风险管理与生产质量管理。