肝移植术后患者血浆miRNA122水平预测急性呼吸窘迫综合征发生的价值

张可静 李桃红 董绉绉 徐慧娜 方荣

肺部并发症是肝移植术后患者死亡的主要原因[1-2]。急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome，ARDS）是肝移植术后严重的肺部并发症，发生率为2.6%～4.1%，其可导致患者机械通气时间延长及全身性感染的发生，最终影响移植效果[3]。近年来，越来越多的研究认为miRNA可以作为ARDS的生物标志物[4-8]，也有研究认为miRNA122 与ARDS 存在相关性[9-10]。miRNA122 是肝脏特异性表达的RNA，既往研究聚焦于和肝病的关系研究[11]，而miRNA122 和肝移植及移植后ARDS发生之间的关系尚未见报道。本研究通过分析肝移植术后患者血浆miRNA122 水平的变化，探讨肝移植术后血浆miRNA122水平预测ARDS发生的价值。

1 对象和方法

1.1 对象 选取2015 年1 月至2022 年12 月宁波市医疗中心李惠利医院ICU 收治的经典背驮式肝移植术后患者60 例，术后连续监测3 d，其中发生ARDS 21 例（术后并发症组），未发生ARDS 39例（手术对照组）。两组患者性别、年龄、术前肝功能Child-Pugh 评分及终末期肝病模型（model for end-stage liver disease，Meld）评分比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05），见表1。纳入标准：（1）年龄≥18岁；（2）肝移植术后患者；（3）符合ARDS 柏林定义诊断标准[12]。排除标准：既往有心、肺疾病者。选取同期本院健康献血者40 名为健康对照组，男36 名，女4 名；年龄43～58（45±3）岁。本研究经宁波市医疗中心李惠利医院医学伦理委员会审查通过（批准文号：DYLL2018081），所有研究参与者均知情同意。

表1 两组患者一般资料比较

1.2 方法

1.2.1 提取外周血总miRNA 术后并发症组和手术 对照组肝移植术后第1、2、3 天及健康对照组体检时分别抽取外周静脉血4 mL，混匀，12 000 r/min 离心2次彻底除去细胞碎片与杂质，得到纯化的血浆标本。标本经裂解液处理使得核酸蛋白复合物完全分离；后依次经乙醇、去蛋白液、漂洗液离心清洗去除杂质，最终加入洗脱液浸泡3 min，离心得到纯化的总miRNA。

1.2.2 miRNA122 检测 采用实时荧光定量PCR 法。使用miRcute 增强型miRNA cDNA 第一链合成试剂盒（批号：KR211，中国北京天根生化科技公司）进行反转录，取2 000 ng RNA 为模板，42 ℃反应60 min 使miRNA 加A 尾，反转录为cDNA，95 ℃反应3 min 使酶失活。检测上游引物（批号：CD201-0006）、检测下游引物（批号：CD200-01）及外参（批号：CR100）均购自中国北京天根生化科技公司。使用miRcute 增强型miRNA 荧光定量检测试剂盒（批号：FP411，北京天根生化科技公司）检测miRNA122表达水平。实时荧光定量PCR反应条件为95 ℃15 min 预变性，94 ℃20 s，60 ℃34 s，40 个循环。根据Ct 值，采用2-ΔΔCt法计算miRNA122 相对表达水平。

1.3 统计学处理 采用SPSS 26.0 统计软件。符合正态分布的计量资料以表示，组间比较采用两独立样本t检验；不符合正态分布的计量资料以M（P25，P75）表示，多组间比较采用Kruskal-WallisH检验，两两比较采用Nemenyi 检验；计数资料组间比较采用χ2检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

术后第1、2、3 天术后并发症组和手术对照组血浆miRNA122 水平均高于健康对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.01）；术后第2、3 天术后并发症组血浆miRNA122 水平均高于手术对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.01），但术后第1 天术后并发症组和手术对照组血浆miRNA122 水平比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 3 组对象血浆miRNA122 水平比较

3 讨论

我国作为世界上肝脏疾病发病率最高的国家之一，相当部分患者会发展为终末期肝病，以致并发肝功能衰竭而死亡。肝移植技术挽救了无数患者的生命，但移植后的各种并发症是制约肝移植存活率进一步提高的重要原因。ARDS 是临床上常见的危重症之一，其特点是起病急、病因复杂、顽固性低氧血症，加之缺乏特异性的检测指标，致使该综合征病死率高达25%～40%[13]，严重威胁患者的生命安全。ARDS 是肝移植术后严重的肺部并发症。

miRNA122 是最早发现的具有组织特异性的一种miRNA，在肝组织中高表达，约占肝组织miRNA 的70% ，在肝脏的生理病理等方面发挥重要作用[14]。研究报道，miRNA122 在ARDS 引起的微血管损伤及细胞氧合中具有重要作用，其可作为ARDS 的标志物且与患者28 d 生存率相关[9-10]。本研究发现，肝移植术后第1 天，所有患者血浆miRNA122 水平飙升，并且随着时间的推移，血浆miRNA122 水平急剧下降，术后并发症组血浆miRNA122 水平明显高于健康对照组，但术后并发症组和手术对照组血浆miRNA122 水平比较，差异无统计学意义，考虑和样本量较少，手术后应激及个体差异大有关；肝移植术后第2 天，术后并发症组和手术对照组血浆miRNA122 水平仍较高，且3 组两两比较差异均有统计学意义，说明血浆miRNA122 水平和肝移植术后并发ARDS 之间具有相关性，且去除了肝移植手术本身造成miRNA122 上升的影响，miRNA122可以作为肝移植后并发ARDS 的分子标志物。肝移植术后第3 天，术后并发症组和手术对照组血浆miRNA122 水平仍较高，但继续处于下降状态，术后并发症组和两个对照组间比较差异也有统计学意义。

综上所述，血浆miRNA122 水平在预测肝移植术后ARDS 发生方面具有一定的临床价值，可作为潜在的生物标志物，为临床医师提供更多及时而有效的依据。但miRNA122 在ARDS 病理生理中的具体机制、靶基因位点和信号转导途径等方面有待进一步深入研究。