血清血小板反应蛋白2、尿素氮及肌酐水平与增殖性糖尿病视网膜病变相关性研究

覃彦平 黄红波 何建明 韩光杰 柯柳华 覃振仲

1柳州市红十字会医院检验科，柳州 545001；2柳州市红十字会医院眼科，柳州 545001；3柳州市红十字会医院内科，柳州 545001；4柳州市中医医院检验科，柳州 545001

糖尿病是一种常见的以高血糖为特点的代谢性疾病［1］。长期的糖尿病会引起各种并发症，糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy，DR）是其中一种以视网膜微血管炎性病变为特点的并发症。随着DR病情不断进展，患者血-视网膜屏障受到损伤，新血管增生导致增殖性糖尿病视网膜病变（proliferative diabetic retinopathy，PDR）的发生。严重的PDR会对患者视功能造成不可逆转的损害。PDR的发病机制非常复杂，影响因素众多。目前，已有许多细胞因子与PDR发病相关的文献报告［2-3］，而血小板反应蛋白2（thrombospondin-2，TSP-2）是一种具有抗血管生成、抗炎等功能的细胞因子［4］。本地区患者血清TSP-2水平与PDR发生是否相关尚有待证实。另外，继发于糖尿病的全身性微血管损伤不仅会引发PDR，还会影响患者的肾脏功能。目前，肾功能的常用监测指标为血清尿素氮（urea nitrogen，BUN）、肌酐（creatinine，Cr）。本研究对血清TSP-2、BUN及Cr水平与PDR的相关性进行检测分析，以期揭示这些指标与PDR发病的关系，结果报道如下。

资料与方法

1.一般资料

研究对象为柳州市红十字会医院收治的2型糖尿病（type 2 diabetes，T2DM）患者和门诊正常体检者。T2DM患者共117例，52例不伴PDR患者为观察1组［男26例，女26例，年龄60（33，69）岁］，65例伴PDR患者为观察2组［男31例，女34例，年龄58（37，79）岁］。T2DM诊断标准按照2014年糖尿病视网膜病变临床诊疗指南进行［5］。正常对照组（对照组）共52例，男25例，女27例，年龄56（40，87）岁，均为门诊体检健康合格的正常人，无心、肝、肾等重要脏器疾患，无糖尿病病史。排除标准：排除1型糖尿病及其他特殊类型糖尿病患者、急慢性感染、甲状腺等内分泌代谢疾病及恶性肿瘤等。3组一般资料比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05）。本研究已获柳州市红十字会医院伦理委员会审核批准，本研究方案及试验标本的获取均符合伦理学原则。

2.方法

采取试验者空腹静脉血标本，分离血清后检测。（1）血清TSP-2测定：采用酶联免疫分析法，试剂盒由上海联硕生物工程有限公司提供，严格按说明书进行实验操作。在检测标本的同时做空白对照样品、阴性对照样品及标准品，测量各孔的吸光度（OD值）。根据标准品浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。（2）血清BUN、Cr水平测定：采用罗氏生化分析仪，使用其配套试剂进行检测。

3.观察指标

观察并比较3组研究对象的血清TSP-2、BUN、Cr水平。

4.统计学处理

应用SPSS 20.0软件进行统计学分析，不符合正态分布的计量资料采用M（P25，P75）表示，采用Mann-WhitneyU检验。多组间比较采用单因素方差分析；计数资料采用χ2检验。OD值计算标准曲线采用ELISACalc软件。P＜0.05表示差异有统计学意义。

结果

对照组、观察1组及观察2组的TSP-2、BUN、Cr水平见表1。观察2组与对照组TSP-2值比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；观察1组与观察2组、对照组TSP-2值两两相比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05）。观察2组与观察1组、对照组BUN值两两相比较，差异均有统计学意义（均P＜0.05）；观察1组与对照组BUN值相比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。观察2组与观察1组、对照组Cr值两两相比较，差异均有统计学意义（均P＜0.05）；观察1组与对照组Cr值比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1 3组研究对象的TSP-2、BUN、Cr水平比较[M（P25，P75）]

讨论

当前，严重的PDR已成为我国主要的致盲性眼疾。DR的诱发因素包括病程、年龄、高血糖、高血压等，其发病的主要因素有山梨醇和糖基化终末产物的积聚、氧化应激、蛋白激酶C的激活及炎症［6-7］。这些因素均严重影响视网膜血管自动调节功能，导致血管调节功能丧失，血管基底膜增厚，细胞外基质蛋白降解，周细胞缺失，出现无功能血管。而毛细血管非灌注造成视网膜缺血、缺氧，缺氧的视网膜组织释放促血管增殖物质，引起内皮细胞增殖、迁移，继而出现微血管芽，生成新血管［7-8］引发PDR。

TSP-2是血小板反应蛋白家族中的重要成员之一，属于上皮来源组织中的细胞外基质糖蛋白［9］。TSP-2由成纤维细胞、内皮细胞、视网膜上膜等多类型细胞分泌。TSP-2对Ca+敏感，具有二硫键维系的三聚体结构。TSP-2可结合各种配体，如纤维粘连蛋白、纤溶酶原激活剂等，参与细胞黏合、迁移和增殖等细胞行为。TSP-2具有抑制血管生成、抗炎并维持细胞外基质完整性的作用。研究表明，TSP-2可明显抑制促血管生成的血管内皮生长因子（VEGF）的表达，抑制VEGF的信号通路，从而抑制VEGF的生物活性，达到抑制血管化的目的［10］。TSP-2通过与CD47相互作用，激活抗炎调节性T细胞来发挥抗炎作用。TSP-2还可通过抑制降解细胞外基质的基质金属蛋白酶2、9来维护细胞外基质完整性［9］。本研究发现，观察2组的TSP-2总体水平较对照组低，这两组TSP-2值比较差异有统计学意义（P＜0.05）。推测多数观察2组患者由于病情持续进展，TSP-2分泌减少，其抗炎、维持细胞外基质完整性等作用减弱，VEGF信号通路抑制及生物活性作用下降，导致VEGF促进PDR患者视网膜血管增生；少数患者TSP-2升高可能因病程等不同，抑制视网膜血管化的能力也不同。

有研究者证实随着DR严重程度的增加，肾脏功能也随之下降［11］。Wu等［12］研究发现血清BUN、年龄≤45岁和吸烟是中国东北地区PDR患者进行性纤维血管增殖的独立危险因素。Zhang等［13］发现较高水平的收缩压、高水平的BUN和Cr均与DR的发病有关。本研究显示血清BUN及Cr水平在观察2组与观察1组、对照组两两相比较时，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。本结果提示随着DR病情进一步发展到PDR时，患者血清BUN和Cr水平逐渐增加，肾脏功能受损日益严重。

综上所述，在PDR患者中血清TSP-2、BUN及Cr水平的变化均与PDR的疾病进展有关。因此，临床医生应注意检测PDR患者TSP-2、BUN及Cr水平，将有助于防治PDR。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突

作者贡献声明覃彦平：设计试验，实施研究，采集数据，分析/解释数据，起草文章，统计分析，获取研究经费；黄红波：采集数据，分析/解释数据，统计分析，技术、材料支持；何建明：对文章的知识性内容作批评性审阅，统计分析，行政、技术支持指导；韩光杰：采集数据，分析/解释数据，统计分析，技术、材料支持；柯柳华：分析/解释数据，统计分析；覃振仲：实施研究，采集数据