甲状腺癌组织的CCL11、VEGF表达与病理特征的关系

张红红 李涌

1青岛滨海学院附属医院病理科，青岛 266500；2济宁市第三人民医院病理科，济宁 272100

甲状腺癌是内分泌系统较为常见的恶性肿瘤之一。调查显示，其发病率占全身恶性肿瘤的1%～5%，每年发病率递增4%左右，其中女性患者的发病率远高于男性［1］。因为甲状腺癌组织起源不同，不同病理特征的生物学行为存在多样性，预后差异较大，所以早确诊并针对性治疗是改善患者预后的关键［2］。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）作为促血管生长因子，与多种恶性肿瘤血管形成及生长浸润均存在密切关联［3］。嗜酸性粒细胞趋化因子（CC chemokine ligand 11，CCL11）是一种十分重要的趋化因子，在多种恶性肿瘤中均处于高表达状态，但目前临床对于该趋化因子在甲状腺癌中表达的研究较少［4］。为此，本文分析CCL11、VEGF表达与甲状腺癌病理特征的关系。

资料与方法

1.一般资料

纳入标准：符合《2022年WHO甲状腺肿瘤分类概述》中甲状腺癌的诊断标准［5］；病理检查确诊为甲状腺癌；TNM（T为原发灶，N为淋巴结，M为远处转移）分期Ⅰ～Ⅳ期。排除标准：免疫系统存在缺陷；合并代谢性疾病；合并严重心脑血管疾病；近3个月服用抗生素治疗。根据纳入、排除标准对2020年12月至2022年12月在青岛滨海学院附属医院收集的120例甲状腺癌组织病理标本及同期收集的60例甲状腺良性疾病组织标本进行回顾性研究。将120例甲状腺癌组织病理标本设为观察组，将60例甲状腺良性疾病组织标本设为对照组。观察组男42例，女78例，年龄25～87（54.58±5.36）岁；病理类型：乳头状癌70例，滤泡状癌24例，未分化癌18例，髓样癌8例。对照组男21例，女39例，年龄26～86（53.66±5.65）岁；病理类型：结节性甲状腺肿39例，甲状腺腺瘤21例。两组性别、年龄等比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05）。本研究已获得医学伦理委员会批准。患者对该研究均知情同意。

2.方法

将两组组织标本切成3片厚度为4 μm的薄片，采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法（streptavidin-peroxidasemethod，SP）免疫组化技术对CCL11、VEGF表达进行检测，相关操作严格按照说明书进行。首先采用将切片置入二甲苯中脱蜡，采用无水乙醇、体积分数95%、85%、70%乙醇水化处理，于3% H2O2作用15 min，消除内源性过氧化物酶；EDTA（pH 8.0）修复液常规修复，微波炉高火、解冻、中高火分别加热10、2、10 min以暴露抗原位点，等待自然冷却，正常山羊血清室温封闭15 min，分别加兔抗人CCL11蛋白单克隆抗体试剂和兔抗人VEGF多克隆抗体，4 ℃孵育过夜，次日切片，采用1×PBST（1‰Tween）漂洗3次，5 min/次。DAB显色，10%苏木素复染，乙醇脱水，经二甲苯透明、封片，于显微镜下观察。兔抗人CCL11蛋白单克隆抗体试剂、兔抗人VEGF多克隆抗体试剂、SP试剂盒、DAB显色剂均由福州迈新生物技术开发公司提供。

CCL11于细胞膜或细胞质内着色，呈棕黄色颗粒，根据染色程度和阳性肿瘤细胞百分数评估：0分表示无染色；1分表示浅着色；2分表示中等着色；3分表示强着色。肿瘤细胞分数定义：0分表示＜10%；1分表示10%～＜50%；2分表示50%～75%；3分≥75%。阳性定义：以上两项相加0～1分为阴性（-）；≥2分为阳性（+）。VEGF于细胞膜和细胞浆着色，细胞阳性染色部分呈棕黄色、高倍镜下阳性细胞数占视野＜10%为阴性（-），占视野≥10%以上为阳性（+）。

3.统计学方法

采用统计学软件SPSS 23.0进行组间检验，采用χ2检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

结果

1.两组CCL11、VEGF阳性表达率

观察组的CCL11、VEGF阳性表达率均明显高于对照组（均P＜0.05），见表1。

2.甲状腺组织CCL11、VEGF阳性表达与病理特征的关系

不同甲状腺组织肿瘤分化程度、有无复发或转移患者CCL11阳性表达比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05）。甲状腺组织TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结转移、浸润深度为T3+T4的患者CCL11阳性表达率明显高于TNM分期为Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移、浸润深度为T1+T2的患者（均P＜0.05）；甲状腺组织低分化、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结转移、浸润深度为T3+T4、有复发或转移的患者VEGF阳性表达率明显高于高+中分化、TNM分期为Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移、浸润深度为T1+T2、无复发或转移的患者（均P＜0.05）。见表2。

表2 120例甲状腺癌组织病理标本CCL11、VEGF阳性表达与病理特征的关系[例（%）]

3.甲状腺癌组织CCL11和VEGF阳性表达与病理特征的相关性

甲状腺癌组织CCL11阳性表达与TNM分期、淋巴结转移、浸润深度呈正相关（均P＜0.05）；甲状腺癌组织VEGF阳性表达与分化程度、TNM分期、淋巴结转移、浸润深度、复发或转移呈正相关（均P＜0.05）。见表3。

表3 120例甲状腺癌组织病理标本CCL11和VEGF阳性表达与病理特征的相关性

讨论

1.甲状腺癌组织CCL11表达与病理特征的关系

CCL11主要位于人类染色体17q11中，其表达具有器官差异性，在肿瘤患者的病灶组织及其体液中均会出现异常表达的情况，是临床常用于诊断并预测恶性肿瘤发生发展及预后的重要指标［6］。相关体外实验认为，CCL11能够将前列腺癌细胞的上皮细胞间质化，进而加速前列腺癌细胞的侵袭和转移速度，促进病情进展［7-8］。目前，有不少研究发现，CCL11表达水平在多种恶性肿瘤发生发展及预后评估中均具有十分重要的意义［9-10］。相关研究认为，CCL11与结直肠癌患者淋巴结转移情况、肿瘤复发情况、随访死亡情况均存在一定关联，是评估结直肠癌发生发展及预后的重要预测因子［11］。临床对于CCL11与甲状腺癌组织病理特征之间的关系的研究较少。本研究发现，相较于良性的甲状腺组织而言，甲状腺癌组织的CCL11阳性表达率更高；且甲状腺组织TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结转移、浸润深度为T3+T4的患者CCL11阳性表达率均比TNM分期为Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移、浸润深度为T1+T2的患者高；CCL11阳性表达与TNM分期、淋巴结转移、浸润深度呈正相关。这提示CCL11是促进甲状腺癌发生、发展的重要趋化因子。研究发现，分化型甲状腺癌患者的血清CCL11表达水平明显比甲状腺良性疾病和健康对照组患者低，且与患者的淋巴结转移情况、浸润深度和TNM分期存在一定关联，提示CCL11直接参与了分化型甲状腺癌的发生发展过程，与本研究结果相似［12］。

2.甲状腺癌组织VEGF表达与病理特征的关系

VEGF可选择性在血管内皮细胞膜上flt-1和flk-1两种Ⅲ型酪氨酸激酶受体中发挥作用，加快血管的形成速度［13-14］。VEGF是针对内皮细胞特异性最高和促进肿瘤血管生成作用最强的调节因子。VEGF与恶性肿瘤发生发展及其预后有相关性［15-16］。相关研究发现，VEGF在胃癌组织中的阳性表达率高于癌旁组织，且其阳性表达与肿瘤大小、淋巴结转移、分化程度、临床分期及浸润深度具有相关性，可能参与了胃癌的发生发展过程［17］。本研究也发现，与良性的甲状腺组织相比，甲状腺癌VEGF阳性表达率更高；与甲状腺癌组织高+中分化、TNM分期为Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移、浸润深度为T1+T2、无复发或转移的患者相比，低分化、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结转移、浸润深度为T3+T4、有复发或转移的患者VEGF阳性表达率更高；VEGF阳性表达与分化程度、TNM分期、淋巴结转移、浸润深度、复发或转移呈正相关。这提示VEGF与甲状腺癌的发生、发展及其预后存在密切关联。多位学者研究认为，血清VEGF与甲状腺癌的淋巴结转移情况存在一定关联。有研究认为，肿瘤越大、发生淋巴结转移的患者血清VEGF水平越高，提示血清VEGF与甲状腺癌的侵袭、转移能力有关［18-19］。血清VEGF水平在甲状腺癌术后转移或复发中呈现出高表达的状态，提示VEGF与甲状腺癌的预后存在一定关联［20］。

综上所述，CCL11、VEGF参与了甲状腺癌发生、发展的过程中，根据CCL11、VEGF的阳性表达情况可有效评估甲状腺癌患者的病情、预后。