核桃青皮化学成分的研究

周媛媛，孙 朝，王思琪，张雪柔，王 萍，方振兴

（1.黑龙江中医药大学药学院，教育部北药基础与应用研究重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150040；2.黑龙江省中医药科学院，黑龙江 哈尔滨 150036；3.黑龙江省科学院自然与生态研究所，黑龙江 哈尔滨 150040）

核桃青皮是胡桃科胡桃属植物核桃楸Juglans mandshricaMaxim.未成熟果实的外果皮，具有清热解毒、止痛止痢的功效［1］，在我国民间已有广泛的应用基础。现代药理学研究表明，核桃青皮具有抗炎、镇痛、抗菌、抗肿瘤等作用［2-4］。近年来，国内外许多学者对核桃青皮的化学成分进行了大量研究，从中发现了萘醌类、萜类、二芳基庚烷类、黄酮类、酚酸类［5-6］等成分。为进一步挖掘核桃青皮的药效物质基础，充分利用该药用资源，本实验对核桃青皮二氯甲烷、乙酸乙酯部位进行化学成分研究，分离得到14 个化合物，且化合物1～7均为首次从该药用部位中分离得到。

1 材料

N-1300V-WB 型旋转蒸发仪（日本东京理化器械株式会社）；Bruker-600 型超导核磁共振仪（德国Bruker 公司）；HR-ESI-MS 高分辨质谱仪、1525EF 半制备型高效液相色谱仪（美国Waters 公司）；200～300 目柱硅胶、薄层色谱硅胶（青岛海洋化工厂）。胡萝卜苷对照品为实验室自制，批号20210615；甲醇为色谱纯（美国Tedia 公司）；其余试剂为分析纯 （天津市富宇精细化工有限公司）。

核桃青皮于2020 年7 月采自吉林省东南部长白山地区，经黑龙江中医药大学药学院杨炳友教授鉴定，确定其为胡桃科植物胡桃楸Juglans mandshuricaMaxim.的未成熟外果皮，即核桃青皮。植物标本（编号20200811） 现保存在黑龙江中医药大学中药化学教研室。

2 提取与分离

取阴干的核桃青皮10.0 kg 粉碎，室温下用8倍量95%乙醇浸泡7 d，收集滤液，重复3 次，减压浓缩得到浸膏（688.8 g）。浸膏加适量蒸馏水分散后，用二氯甲烷、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取，得到二氯甲烷部位（Fr.A，238.6 g）、乙酸乙酯部位（Fr.B，196.3 g）。

二氯甲烷部位（Fr.A） 经200～300 目硅胶柱分离，以二氯甲烷-甲醇（100 ∶0～0 ∶100） 梯度洗脱，TLC 检识合并，得到Fr.A1～Fr.A5。Fr.A1经硅胶柱分离，以二氯甲烷-甲醇（50 ∶1～0 ∶1）梯度洗脱，得到化合物3 （6.8 mg）、4 （5.7 mg）、5 （6.4 mg）。Fr.A2 经硅胶柱分离，以二氯甲烷-甲醇（30 ∶1～0 ∶1） 梯度洗脱，再经Sephadex LH-20 柱，以甲醇-水（8 ∶1） 洗脱，得到化合物1 （5.3 mg）、13 （8.4 mg）。Fr.A4 经硅胶柱分离，以二氯甲烷-甲醇（15 ∶1～0 ∶1） 梯度洗脱，得到化合物2 （6.6 mg）、8 （3.9 mg）。

乙酸乙酯部位（Fr.B） 经200～300 目硅胶柱分离，以二氯甲烷-甲醇（100 ∶0～0 ∶100） 梯度洗脱，TLC 检识合并，得到Fr.B1～Fr.B7。Fr.B1经硅胶柱分离，以二氯甲烷-甲醇（100 ∶1～20 ∶1） 梯度洗脱，得到化合物10 （5.7 mg）、11 （7.2 mg）。Fr.B2 经硅胶柱分离，以二氯甲烷-甲醇（50 ∶1～10 ∶1） 梯度洗脱，得到化合物6 （8.6 mg）、7 （3.7 mg）、12 （7.5 mg）。Fr.B5 经硅胶柱分离，以二氯甲烷-甲醇（50 ∶1～0 ∶1） 梯度洗脱，经Sephadex LH-20 柱，以甲醇-水（3 ∶1） 洗脱，再经半制备HPLC，以甲醇-水（60 ∶40） 纯化，得到化合物9 （4.5 mg，tR＝20.3 min）、14（4.6 mg，tR＝21.8 min）。

3 结构鉴定

化合物1：淡黄色油状物，HR-ESI-MSm／z：245.451 3 ［M+Na］+，分子式C15H26O。1H-NMR（CDCl3，600 MHz）δ：4.76 （1H，brs，H-11a），4.52 （1H，brs，H-11b），1.29 （6H，s，H-13～14），0.78 （3H，s，H-15）；13C-NMR （CDCl3，150 MHz）δ：151.9 （C-4），105.1 （C-11），72.8（C-12），50.1 （C-7），49.8 （C-5），41.5 （C-9），40.7 （C-1），37.2 （C-3），36.5 （C-10），27.5（C-14），27.1 （C-13），25.4 （C-6），23.8 （C-2），22.9 （C-8），16.8 （C-15）。以上数据与文献［7］ 报道基本一致，故鉴定为β-桉叶醇。

化合物 2：白色粉末，HR-ESI-MSm／z：257.137 6 ［M+Na］+，分子式C14H18O3。1H-NMR（CDCl3，600 MHz）δ：7.34 （2H，d，J＝8.6 Hz，H-3'，5'），6.88 （2H，d，J＝8.6 Hz，H-2'，6'），6.55 （1H，d，J＝16.8 Hz，H-1″），6.26（1H，dt，J＝16.8，6.0 Hz，H-2″），5.79 （1H，t，J＝6.8 Hz，H-3），4.58 （2H，d，J＝6.8 Hz，H-4），4.34 （2H，d，J＝6.0 Hz，H-3″），4.04（2H，s，H-1），1.78 （3H，s，H-5）；13C-NMR（CDCl3，150 MHz）δ：160.3 （C-1'），140.3 （C-2），131.5 （C-1″），130.1 （C-4'），128.2 （C-3'，5'），127.1 （C-2″），120.5 （C-3），114.9 （C-2'，6'），68.3 （C-1），64.4 （C-4），64.1 （C-3″），14.5 （C-5）。以上数据与文献［8］ 报道基本一致，故鉴定为integrifoliodiol。

化合物3：淡黄色粉末，HR-ESI-MSm／z：281.271 5 ［M+Na］+，分子式C15H14O4。1H-NMR（CDCl3，600 MHz）δ：7.92 （1H，d，J＝9.2 Hz，H-4），6.68 （1H，d，J＝9.6 Hz，H-4'），6.33（1H，s，H-8），6.12 （1H，d，J＝9.2 Hz，H-3），5.52 （1H，d，J＝9.6 Hz，H-3'），3.89 （3H，s，7-OCH3），1.32 （6H，s，5'，6'-OCH3）；13C-NMR （CDCl3，150 MHz）δ：161.8 （C-2），158.8 （C-7），156.2 （C-9），150.0 （C-5），138.9 （C-4），128.0 （C-3'），116.5 （C-4'），111.1 （C-3），106.9 （C-6），103.2 （C-10），91.5 （C-8），77.9 （C-2'），56.4 （7-OCH3），28.3 （C-5'，6'）。以上数据与文献［9］ 报道基本一致，故鉴定为alloxanthoxyletin。

化合物4：淡黄色粉末，HR-ESI-MSm／z：281.112 6 ［M+ Na］+，分子式C15H14O4。1H-NMR（CDCl3，600 MHz）δ：7.98 （1H，d，J＝9.6 Hz，H-4），6.74 （1H，d，J＝10.2 Hz，H-4'），6.24（1H，s，H-6），6.11 （1H，d，J＝9.6 Hz，H-3），5.62 （1H，d，J＝10.2 Hz，H-3'），3.88 （3H，s，5-OCH3），1.51 （6H，s，5'，6'-CH3）；13C-NMR （CDCl3，150 MHz）δ：161.5 （C-2），157.0 （C-7），156.9 （C-5），150.5 （C-9），139.2 （C-4），127.6 （C-3'），114.3 （C-4'），110.5 （C-3），103.6 （C-10），102.3 （C-8），95.5 （C-6），77.6 （C-2'），55.8 （-OCH3），28.3（5'，6'-CH3）。以上数据与文献［10］ 报道基本一致，故鉴定为5-methoxyseselin。

化合物5：棕黄色针晶（甲醇），HR-ESI-MSm／z：351.413 9 ［M+Na］+，分子式C20H24O4。1HNMR （CDCl3，600 MHz）δ：7.64 （1H，d，J＝9.6 Hz，H-4），6.88 （1H，s，H-5），6.83 （1H，s，H-8），6.31 （1H，d，J＝9.6 Hz，H-3），5.48（1H，t，J＝6.4 Hz，H-2'），5.09 （1H，t，J＝6.4 Hz，H-6'），4.66 （2H，d，J＝6.4 Hz，H-1'），3.91 （3H，s，6-OCH3），1.74 （3H，s，8'-CH3），1.65 （3H，s，9'-CH3），1.55 （3H，s，10'-CH3）；13C-NMR （CDCl3，150 MHz）δ：162.1（C-2），151.9 （C-7），150.5 （C-9），146.6 （C-6），143.2 （C-4），142.3 （C-3'），131.7 （C-7'），123.0 （C-6'），118.5 （C-2'），113.7 （C-3），111.5 （C-10），107.6 （C-5），101.5 （C-8），66.8 （C-1'），56.7 （6-OCH3），39.6 （C-4'），26.3 （C-5'），25.7 （8'-CH3），17.9 （10'-CH3），16.6 （9'-CH3）。以上数据与文献［11］ 报道基本一致，故鉴定为7-香叶氧基-6-甲氧基香豆素。

化合物6：白色油状物，HR-ESI-MSm／z：303.249 3 ［M+Na］+，分子式C18H32O2。1H-NMR（CDCl3，600 MHz）δ：7.23 （1H，s，1-OH），5.36～5.38 （4H，m，H-9～10，12～13），2.84（2H，t，J＝6.6 Hz，H-11），2.25 （2H，t，J＝6.8 Hz，H-2），0.86 （3H，t，J＝7.8 Hz，18-CH3）；13C-NMR （CDCl3，150 MHz）δ：172.0（C-1），129.1 （C-13），128.4 （C-9），127.7 （C-12），127.4 （C-10），33.8 （C-2），31.0 （C-16），29.6 （C-7），29.4 （C-15），29.1 （C-6），29.0（C-5），28.7 （C-4），26.7 （C-8），26.6 （C-14），25.0 （C-11），24.2 （C-3），23.2 （C-17），14.5（C-18）。以上数据与文献［12］ 报道基本一致，故鉴定为亚油酸。

化合物7：淡黄色粉末，HR-ESI-MSm／z：217.206 3 ［M+Na］+，分子式C10H10O4。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.52 （1H，d，J＝16.0 Hz，H-7），7.06 （1H，d，J＝1.6 Hz，H-2），6.88 （1H，dd，J＝8.0，1.6 Hz，H-6），6.68（1H，d，J＝8.0 Hz，H-5），6.21 （1H，d，J＝16.0 Hz，H-8），3.68 （3H，s，-OCH3）；13C-NMR （CD3OD，150 MHz）δ：166.8 （C-9），147.2 （C-4），145.4 （C-3），143.7 （C-7），128.2 （C-1），122.7 （C-6），115.8 （C-5），115.0 （C-2），113.4 （C-8），50.6 （-OCH3）。以上数据与文献［13］ 报道基本一致，故鉴定为咖啡酸甲酯。

化合物8：淡黄色油状物，HR-ESI-MSm／z：247.215 3 ［M+Na］+，分子式C13H20O3。1H-NMR（CDCl3，600 MHz）δ：5.93 （1H，d，J＝1.2 Hz，H-4），5.84 （1H，dd，J＝16.2，5.6 Hz，H-8），5.76 （1H，d，J＝16.2 Hz，H-7），4.54 （1H，dq，J＝6.6，5.6 Hz，H-9），2.28 （1H，d，J＝16.8 Hz，H-2a），2.26 （1H，d，J＝16.8 Hz，H-2b），1.93 （3H，d，J＝1.2 Hz，H-13），1.32（3H，d，J＝6.6 Hz，H-10），1.09 （3H，s，H-11），0.98 （3H，s，H-12）；13C-NMR （CDCl3，150 MHz）δ：200.1 （C-3），162.8 （C-5），135.2（C-8），128.8 （C-7），126.5 （C-4），78.7 （C-6），68.2 （C-9），49.6 （C-2），40.8 （C-1），24.2 （C-11），23.8 （C-12），22.5 （C-10），19.4 （C-13）。以上数据与文献［14］ 报道基本一致，故鉴定为吐叶醇。

化合物9：白色针晶 （甲醇），HR-ESI-MSm／z：221.173 2 ［M+Na］+，分子式C9H10O5。1HNMR （CD3OD，600 MHz）δ：7.23 （2H，s，H-2，6），3.84 （6H，s，3，5-OCH3）；13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：168.5 （-COOH），147.4（C-3，5），140.2 （C-4），120.1 （C-1），107.5（C-2，6），55.9 （3，5-OCH3）。以上数据与文献［15］ 报道基本一致，故鉴定为丁香酸。

化合物 10：白色粉末，HR-EI-MSm／z：191.423 5 ［M + H］+，分子式C8H8O4。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.58 （1H，dd，J＝8.4，1.8 Hz，H-6），7.52 （1H，d，J＝1.8 Hz，H-2），6.81 （1H，d，J＝8.2 Hz，H-5），3.85 （3H，s，4-OCH3）；13C-NMR （CD3OD，150 MHz）δ：170.5 （-COOH），153.2 （C-4），148.3 （C-3），125.7 （C-1），123.2 （C-6），116.6 （C-2），113.7 （C-5），56.9 （4-OCH3）。以上数据与文献［5］ 报道基本一致，故鉴定为异香草酸。

化合物11：白色无定形粉末，HR-ESI-MSm／z：231.238 1 ［M+Na］+，分子式C11H12O4。1H-NMR（DMSO-d6，600 MHz）δ：7.47 （1H，d，J＝16.4 Hz，H-7），7.05 （1H，d，J＝2.1 Hz，H-2），7.01 （1H，d，J＝8.8 Hz，H-5），6.79 （1H，dd，J＝8.8，2.1 Hz，H-6），6.34 （1H，d，J＝16.4 Hz，H-8），4.22 （3H，s，4-OCH3），3.69 （3H，s，9-OCH3）；13C-NMR （DMSO-d6，150 MHz）δ：167.5 （C-9），150.2 （C-6），148.3 （C-1），145.6 （C-7），122.2 （C-3），121.1 （C-4），117.4 （C-8），115.2 （C-5），114.1 （C-2），60.3（4-OCH3），51.3 （9-OCH3）。以上数据与文献［16］ 报道基本一致，故鉴定为异阿魏酸甲酯。

化合物12：无色针晶（甲醇），Liebermann-Burchard 反应呈阳性，HR-ESI-MSm／z：479.671 1［M+Na］+，分子式C30H48O3。1H-NMR （CD3OD，600 MHz）δ：5.22 （1H，t，J＝3.4 Hz，H-12），3.23 （1H，dd，J＝4.5，11.1 Hz，H-3），2.84（1H，dd，J＝3.8，13.6 Hz，H-18），1.17 （3H，s，H-27），0.95 （3H，s，H-23），0.91 （3H，s，H-29），0.90 （3H，s，H-24），0.93 （3H，s，H-30），0.81 （3H，s，H-25），0.74 （3H，s，H-26）；13C-NMR （CDCl3，150 MHz）δ：183.2 （28-COOH），143.3 （C-13），122.9 （C-12），78.8（C-3），55.4 （C-5），47.7 （C-9），46.2 （C-19），45.5 （C-17），41.8 （C-14），41.1 （C-18），39.1（C-8），38.9 （C-4），38.5 （C-1），37.4 （C-10），34.1 （C-21），32.9 （C-30），32.5 （C-22），32.2（C-7），30.8 （C-20），28.4 （C-23），27.5 （C-15），27.1 （C-2），26.2 （C-27），23.7 （C-29），23.2 （C-16），22.8 （C-11），18.0 （C-6），17.3（C-26），15.4 （C-25），15.1 （C-24）。以上数据与文献［17］ 报道基本一致，故鉴定为齐墩果酸。

化合物13：白色针晶（氯仿），Liebermann-Burchard 反应为阳性，HR-EI-MSm／z：437.721 4［M+Na］+，分子式C29H50O。1H-NMR （CDCl3，600 MHz）δ：5.34 （1H，d，J＝5.2 Hz，H-6），1.07（3H，s，H-19），0.91 （3H，d，J＝6.8 Hz，H-2），0.92 （3H，d，J＝7.2 Hz，H-21），0.82（3H，d，J＝6.8 Hz，H-26），0.71 （3H，s，H-18）；13C-NMR （CDCl3，150 MHz）δ：140.8 （C-5），122.1 （C-6），71.6 （C-3），57.1 （C-14），56.5 （C-17），49.7 （C-9），45.4 （C-24），42.8（C-4），42.6 （C-13），39.6 （C-12），37.5 （C-1），36.5 （C-10），36.4 （C-20），32.3 （C-7），31.5 （C-22），31.4 （C-8），29.9 （C-25），28.3（C-23），28.2 （C-16），26.5 （C-2），24.0 （C-15），23.3 （C-28），21.1 （C-11），19.7 （C-27），19.6 （C-18），18.9 （C-29），18.5 （C-21），12.5（C-26），11.5 （C-19）。以上数据与文献［18］ 报道基本一致，故鉴定为β-谷甾醇。

化合物14：白色粉末，Liebermann-Burchard反应阳性，5% 硫酸乙醇溶液显紫红色，HR-ESIMSm／z：599.842 1 ［M+Na］+，表明其相对分子质量为576。采用TLC 法，与胡萝卜苷对照品Rf值及显色行为一致，故鉴定为胡萝卜苷。

4 讨论

本实验从核桃青皮中分离得到14 个化合物，包括3 个萜类、3 个苯丙素类、4 个酚酸类、3 个其他类，其中化合物1～7 为首次从核桃青皮中分离得到，进一步丰富了核桃青皮的化学成分，为今后开展核桃青皮抗肿瘤活性研究提供重要的药效物质基础。