结肠癌组织中THBS2、SLC11A1基因表达及与TANs浸润的关系

侯建彬　李新宇　陈琦玮　柳燕　贾静

【摘要】  目的    分析結肠癌组织中血小板反应蛋白2（THBS2）、溶质载体家族11成员1（SLC11A1）表达及与肿瘤相关性中性粒细胞（TANs）浸润的关系。方法    选取2020年1月—2022年4月在泉州市第一医院进行手术切除的120例结肠癌患者的肿瘤组织及癌旁组织，用免疫组化法检测结肠癌组织及癌旁组织中THBS2、SLC11A1表达，收集患者临床病理特征，分析THBS2、SLC11A1表达与结肠癌患者临床病理特征的关系，分析THBS2、SLC11A1与TANs浸润密度的相关性。结果    THBS2在结肠癌组织中主要表达于细胞质，SLC11A1在结肠癌组织中主要表达于细胞膜中，染色均呈现棕黄色；相较于癌旁正常组织，结肠癌组织中THBS2表达明显降低，SLC11A1表达明显升高。结肠癌组织THBS2表达与分化程度、淋巴结转移、TNM分期、血管浸润具有明显相关性（P<0.05）；结肠癌组织SLC11A1表达与淋巴结转移、肿瘤浸润深度、病理分型、TNM分期、血管浸润具有明显相关性（P<0.05）。结肠癌组织中THBS2表达与TANs浸润密度呈负相关（r=-0.444，P<0.05），SLC11A1表达与TANs浸润密度呈正相关（r=0.355，P<0.05）。结论    在结肠癌组织中THBS2、SLC11A1均呈现异常表达，与TANs浸润相互作用共同促进结肠癌的恶性进程，推测两指标可作为潜在的结肠癌临床预后因子。

【关键词】  结肠癌； THBS2； SLC11A1； TANs浸润； 相关性

Expression of THBS2， SLC11A1 genes and their relationship with TANs invasion in colon cancer

Hou Jianbin，Li Xinyu， Chen Qiwei et al. The First Hospital of Quanzhou City，Quanzhou，Fujian   362000

【Abstract】 Objective    To analyze the expression of platelet reactive protein 2（THBS2），solute vector family 11 member 1（SLC11A1）and their relationship with tumor associated neutrophil（THBS）infiltration in colon cancer. Methods    The tumor tissues and paracancerous tissues of 120 patients with colon cancer who underwent surgical resection in our hospital from January 2020 to April 2022 were selected.The expression of THBS2 and SLC11A1 in colon cancer tissues and paracancerous tissues was detected by immunohistochemical method.The clinicopathological features of patients were collected，and the relationship between the expression of THBS2 and SLC11A1 and the clinicopathological features of colon cancer patients was analyzed；Pearson correlation analysis was used to analyze the correlation between THBS2，SLC11A1 and THBS infiltration density. Results    THBS2 was mainly expressed in the cytoplasm and SLC11A1 was mainly expressed in the cell membrane in colon cancer tissues.The staining of THBS2 and SLC11A1 was brownish yellow；Compared with normal adjacent tissues，THBS2 expression was significantly decreased and SLC11A1 expression was significantly increased in colon cancer tissues.THBS2 expression was significantly correlated with differentiation，lymph node metastasis，TNM stage and vascular invasion（P<0.05）；The expression of SLC11A1 in colon cancer was significantly correlated with lymph node metastasis，depth of tumor invasion，pathological classification，TNM stage and vascular invasion（P<0.05）.There was a negative correlation between THBS2 expression and THBS invasion density in colon cancer（r=-0.444，P<0.05），and a positive correlation between SLC11A1 expression and tans invasion density（r=0.355，P<0.05）.Conclusion    THBS2 and SLC11A1 are abnormally expressed in colon cancer tissue，and interact with THBS infiltration to promote the malignant process of colon cancer.It is speculated that the two indicators can be used as potential clinical prognostic factors of colon cancer.

【Key Words】  Colon cancer； THBS2； SLC11A1； THBS infiltration； Correlation

中图分类号：R735.3+5        文献标识码：A        文章编号：1672-1721（2023）19-0016-04

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.19.006

结肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，近年来，随着人们生活方式的改变，我国结肠癌的发病率和病死率明显升高，早发现、早诊断及综合治疗为提高结肠癌患者生存率的关键所在。寻找新的方法早期预测、诊断结肠癌已成为临床医师关注的重点。肿瘤复发和化疗药物耐药在结肠癌晚期非常常见，转移和复发是结肠癌患者的主要死因，与肿瘤相关性中性粒细胞（tumor associated neutrophils，TANs）浸润密切相关[1]。相关资料显示[2]，TANs与结肠癌的恶性生物学行为及不良预后呈明显正相关。血小板反应蛋白2（platelet reactive protein 2，THBS2）是一类细胞膜表面钙结合糖蛋白，近年来相关资料显示[3]，其在多种肿瘤组织中呈现异常表达，其表达下降与肿瘤新生血管的形成有关，被认为是一种“抑癌基因”。溶质载体家族11成员1（solute carrier family 11 member 1，SLC11A1）为一种促炎性因子，与多种炎症性疾病的发生密切相关。已有研究证实SLCILAL与感染、自身免疫和癌症有关，其转录抑制可导致细胞增殖和存活[4]。本研究旨在分析结肠癌组织中THBS2、SLC11A1基因表达及与TANs浸润的关系，报道如下。

1    资料与方法

1.1    一般资料    选取2020年1月—2022年4月在泉州市第一医院进行手术切除的120例结肠癌患者的肿瘤组织及癌旁组织，其中男47例，女73例，年龄28～80岁，平均年龄（62.33±8.15）岁。根据免疫组化染色结果分为THBS2阴性组（n=98例）、THBS2阳性组（n=22例）及SLC11A1阴性组（n=31例）、SLC11A1阳性组（n=89例）。

入组标准：（1）研究对象符合结肠癌的诊断标准[5]，且经病理学组织检查确诊；（2）患者术前未接受任何治疗；（3）有完整的临床资料和随访记录；（4）研究经过医学伦理委员会同意后进行。

排除标准：（1）合并其他恶性肿瘤；（2）患者重要器官存在严重功能障碍；（3）严重感染性疾病者；（4）对研究不能配合，依从性较差；（5）伴有精神疾病障碍。

1.2    免疫组化法    用免疫组化法检测结肠癌组织及癌旁组织中THBS2、SLC11A1表达。结肠癌组织及癌旁组织经石蜡包埋后以4 μm厚度连续切片，65 ℃烘烤2 h，然后进行脱蜡；将EDTA缓冲液滴加至修复盒中，加热后放入切片，进行组织抗原修复；自然冷却至室温，PBS缓冲液冲洗3遍，各3 min；3%H₂O₂处理阻断内源性过氧化酶活性；取用10%鼠抗人THBS2、SLC11A1抗体，在冰箱中4 ℃孵育；将盖子打开的湿盒放在37 ℃温箱复温30 min；在PBS缓冲液洗涤3次，每次5 min，甩掉表面液体；在每个切片中加入75 μL酶标记的山羊抗鼠/兔IgG聚合物，用抗体覆盖组织，37 ℃孵育30 min；用PBS冲洗切片3次，每次5 min；在每个切片中滴加20 μL 0.02%DAB溶液进行显色，纯水终止显色；苏木精复染3 min；1%盐酸酒精分化，切片置于无菌水中5 min，使其恢复蓝色；切片在梯度酒精中依次脱水5 min；二甲苯透明；切片采用中性树脂密封。

结果判定标准：根据染色强度评分，棕褐色3分、棕黄色2分、淡黄色1分、无色为0分。根据染色细胞占百分比评分，>75%为3分，51%～75%为2分，11%～50%为1分，≤10%为0分。将染色强度评分和染色范围评分相乘计算结果，0～2分为低表达，3分以上为高表达。

1.3    临床病理资料收集    收集患者临床病理资料，包括年龄（≤55岁、>55岁）、性别（男、女）、肿瘤大小（≤5 cm、>5 cm）、分化程度（低分化、中+高分化）、淋巴结转移（是、否）、血管浸润（是、否）、肿瘤浸润深度（T1+T2、T3+T4）、TNM分期（根据国际抗癌协会TNM分期方案[6]进行分期）及病理分型（肿块型、溃疡型、浸润型）。

1.4    统计学方法    使用SPSS 21.0统计学软件进行数据分析，計数资料以百分比表示，采用χ²检验，相关性检验采用Pearson相关分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2    结果

2.1    结肠癌组织中THBS2、SLC11A1表达情况    THBS2在结肠癌组织中主要表达于细胞质，SLC11A1在结肠癌组织中主要表达于细胞膜中，染色均呈现棕黄色；相较于癌旁正常组织，结肠癌组织中THBS2表达明显降低，SLC11A1表达明显升高（P<0.05），见图1。

2.2    结肠癌组织中THBS2、SLC11A1表达与临床病理特征的关系    结肠癌组织THBS2表达与分化程度、淋巴结转移、TNM分期、血管浸润具有明显相关性（P<0.05）；结肠癌组织SLC11A1表达与淋巴结转移、肿瘤浸润深度、病理分型、TNM分期、血管浸润具有明显相关性（P<0.05），见表1。

2.3    結肠癌组织THBS2、SLC11A1表达与TANs浸润的关系    结肠癌组织中THBS2表达与TANs浸润密度呈负相关（r=-0.444，P<0.05），SLC11A1表达与TANs浸润密度呈正相关（r=0.355，P<0.05），见图2。

3    讨论

结肠癌在全球恶性肿瘤死亡率中排名第三，尽管在结肠癌的诊断和治疗方面取得了显著进展，但转移性结肠癌的5年总生存率低于15%，早期诊断可提高5年生存率。限制结肠癌患者生存率和治愈率的主要因素是缺乏有效的转移瘤治疗策略，肿瘤及其与周围组织的浸润和转移是患者死亡的主要原因。经过根治性手术及术后辅助化疗后患者病死率明显降低，但仍有60%以上出现复发或转移。靶向药物的开发提高了晚期结肠癌患者的生存率和治愈率，寻找新方法早期预测、诊断和治疗已成为延长结肠癌患者生存期的主要研究方向[7]。

THBS2是基质细胞Ca2+结合糖蛋白家族成员之一，与生长因子、细胞受体和细胞外基质相互作用，被认为是一种强大的血管生成因子。其可通过与细胞表面结合发挥生物学功能，包括血管生成、细胞黏附、细胞凋亡和细胞运动等。近年来，有研究显示，THBS2在肿瘤中发挥重要作用。Wang等研究发现，THBS2在胃癌细胞中的表达与患者的生存呈时间依赖性相关，THBS2低表达可能会加速胃癌进展，导致预后不良，THBS2水平越低，胃癌的分化程度越差[8]。Qu报道[9]，THBS2在结直肠腺瘤和结直肠癌正常邻近组织中均表现出低甲基化。Xu等[10]发现结肠癌患者血浆中THBS2表达高于非癌症对照。Gimotty PA等[11]确定THBS2可用于开发高特异性的生物标志物，用于检测癌症侵袭和预测对新辅助治疗的反应，以及针对相应生物学机制的潜在多癌转移抑制治疗。本研究结果显示，在结肠癌组织中THBS2表达明显低于癌旁组织，且与患者分化程度、淋巴结转移、TNM分期、血管浸润明显相关，与TANs浸润密度呈负相关。由此可见，在结肠癌中THBS2呈现低表达时肿瘤转移及浸润恶性行为能力增强，可能促进肿瘤恶性进展。

SLC11A1在巨噬细胞的溶酶体区室和中性粒细胞的三级颗粒中表达，在对细胞内微生物感染的先天抵抗中起关键作用。SLC11A2是铁代谢的关键参与者，尤其是在近端十二指肠、未成熟的红细胞、脑、胎盘和肾脏中普遍表达。SLC11A2对巨噬细胞功能产生多效性影响，包括增强肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β、诱导型一氧化氮合酶表达，对于自身免疫和癌症的诱导和维持都很重要。相关资料显示[12]，SLC11A1 的转录抑制导致细胞增殖和存活，如果不加以控制，可能导致癌症和自身免疫。本研究结果显示，结肠癌组织中SLC11A1表达明显高于癌旁组织，与淋巴结转移、肿瘤浸润深度、病理分型、TNM分期、血管浸润明显相关，与TANs浸润密度呈正相关。由此可见，SLC11A1在结肠癌表达上调可调控肿瘤的转移和浸润等恶性行为，有望成为结肠癌预后标志物和佐剂靶点，为改善患者预后奠定基础。

综上所述，在结肠癌组织中THBS2、SLC11A1均呈现异常表达，与TANs浸润相互作用共同促进结肠癌的恶性进程，推测两指标可作为潜在的结肠癌临床预后因子。

参考文献

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（收稿日期：2023-04-12）