连翘的化学成分研究

聂承冬，沙冬梅，何晓勇，何 斌，田玉寒，刘 圆，李 莹，张绍山，冯景秋，李 娟，阎新佳，温 静

连翘的化学成分研究

聂承冬1, 2，沙冬梅1, 3, 4，何晓勇1, 3, 4，何 斌1, 3, 4，田玉寒1, 3, 4，刘 圆1, 3, 4，李 莹3, 4，张绍山1, 3, 4，冯景秋1, 3, 4，李 娟1, 3, 4，阎新佳1, 3, 4*，温 静2, 5*

1. 西南民族大学 青藏高原研究院，四川 成都 610041 2. 哈尔滨商业大学药学院，黑龙江 哈尔滨 150076 3. 四川省羌彝药用资源保护与利用技术工程实验室，四川 成都 610225 4. 青藏高原民族药用资源保护与利用国家民委重点实验室，四川 成都 610225 5. 四川中医药高等专科学校，四川 绵阳 621000

研究连翘的化学成分及其体外抗肿瘤活性。采用多种色谱技术进行分离纯化，通过理化性质和波谱学手段（NMR和MS）鉴定化合物结构，测试各化合物对HepG-2和MCF-7细胞的细胞毒性。从连翘75%乙醇提取物中共分离鉴定出26个化合物，分别为2-(4-羟基苯基)乙基-6[(4-羟基苯基)乙酰基]-β吡喃葡萄糖苷（1）、木通苯乙醇苷B（2）、2-(4-羟基苯基)乙基-6()-咖啡酰-β吡喃葡萄糖苷（3）、6香豆酰-1[2-(3,4-二羟基苯基)乙基]-β吡喃葡萄糖苷（4）、(＋)-松脂素（5）、8-羟基松脂素（6）、松脂素-4β吡喃葡萄糖苷（7）、(＋)-表松脂素（8）、(＋)-1-羟基-2-表松脂素（9）、连翘脂素（10）、(＋)-表松脂素-4β吡喃葡萄糖苷（11）、(＋)-落叶松脂素（12）、(−)-落叶松脂素（13）、-(7,8,8)-forsythialan C（14）、-(7,8,8)-forsythialan C（15）、(7,8,8)-异落叶松脂素（16）、罗汉松脂素（17）、罗汉松脂素-4β吡喃葡萄糖苷（18）、(−)-甘密树皮素B-β吡喃葡萄糖苷（19）、(7,7,8,8)-4,4-二羟基-3,3-二甲氧基-7,7-环氧木脂素-4β吡喃葡萄糖苷（20）、(7,7,8,8)-4,4-二羟基-3,3-二甲氧基-7,7-环氧木脂素-4β吡喃葡萄糖苷（21）、10β桃金娘烯醇苷（22）、neryl-βglucopyranoside（23）、α-松油醇-8β吡喃葡萄糖苷（24）、连翘环己醇酮（25）和阿魏酸甲酯（26）。化合物1、3、4和19～24、26为首次从连翘属植物中分离得到。在40 μmol/L浓度下化合物5～18对HepG-2和MCF-7细胞系具有一定的细胞毒性活性。

连翘；苯乙醇苷；单萜苷；木脂素；抗肿瘤活性；2-(4-羟基苯基)乙基-6()-咖啡酰-β吡喃葡萄糖苷；(＋)-松脂素；罗汉松脂素-4β吡喃葡萄糖苷；α-松油醇-8β吡喃葡萄糖苷

连翘(Thunb.) Vahl.为木犀科（Oleaceae）连翘属Vahl.植物，气微香，味苦，微寒。归小肠、心、肺经。古人称其为“疮家圣药”，主要用于清热解毒，消肿散结，主治痈疽瘰疬，乳痈丹毒等症[1-2]。目前国内外学者从连翘中发现多种化学成分（苯乙醇苷类、木脂素类、萜类黄酮类成分和其他类成分等）和多种药理活性（抗肿瘤、抗炎、抗病毒和抗氧化等）[3]。研究表明，连翘属植物具有较好的抗肿瘤活性，但研究对象主要局限于其提取物[4-8]，无法全面反映连翘属植物中各类化学成分的活性特点，导致活性成分不够明确，药效物质难以阐明。为进一步阐明中药连翘抗肿瘤的药效物质，深入挖掘连翘中抗肿瘤活性成分，本实验对连翘进行了系统的化学成分研究，利用液液萃取方法和多种色谱手段（硅胶柱色谱、开放ODS柱色谱和高效液相色谱等）对连翘75%乙醇提取物进行分离，基于理化性质和波谱学手段进行化学结构的鉴定。从连翘75%乙醇提取物中分离鉴定出26个化合物，分别为2-(4-羟基苯基)乙基-6[(4-羟基苯基)乙酰基]-β吡喃葡萄糖苷（2-(4- hydroxyphenyl)ethyl-6[(4-hydroxyphenyl) acetyl]- βglucopyranoside，1）、木通苯乙醇苷B（calceolarioside B，2）、2-(4-羟基苯基)乙基-6()-咖啡酰-β吡喃葡萄糖苷[2-(4-hydroxyphenyl) ethyl-6()-caffeoyl-βglucopyranoside，3]、6香豆酰-1[2-(3,4-二羟基苯基)乙基]-β吡喃葡萄糖苷（6coumaroyl-1[2-(3,4- dihydroxyphenyl) ethyl]-βglucopyranoside，4）、(＋)-松脂素[(＋)-pinoresinol，5]、8-羟基松脂素（8-hydroxypinoresinol，6）、松脂素-4β吡喃葡萄糖苷（pinoresinol-4βglucopyranoside，7）、(＋)-表松脂素 [(＋)-epipinoresinol，8）]、(＋)-1-羟基-2-表松脂素 [(＋)-1-hydroxy-2-epipinoresinol，9]、连翘脂素（phillygenin，10）、(＋)-表松脂素-4β吡喃葡萄糖苷 [(＋)-epipinoresinol-4βglucopyranoside，11]、(＋)-落叶松脂素[(＋)- lariciresino，12]、(−)-落叶松脂素[(−)-lariciresinol，13]、-(7,8,8)-forsythialan C（14）、- (7,8,8)-forsythialan C（15）、(7,8,8)-异落叶松脂素 [(7,8,8)-isolariciresinol，16]、罗汉松脂素（matairesinol，17）、罗汉松脂素-4β吡喃葡萄糖苷（martairesinol-4βglucopyranoside，18）、(−)-甘密树皮素B-β吡喃葡萄糖苷 [(−)- nectandrin B-βglucopyranoside，19]、(7,7,8, 8)-4,4-二羟基-3,3-二甲氧基-7,7-环氧木脂素- 4β吡喃葡萄糖苷 [(7,7′,8,8′)-4,4′- dihydroxy-3,3′-di-methoxy-7,7′-epoxylignan-4βglucopyranoside，20]、(7,7,8,8)-4,4-二羟基- 3,3-二甲氧基-7,7-环氧木脂素-4β吡喃葡萄糖苷[(7,7′,8,8′)-4,4′-dihydroxy-3,3′-dimethoxy- 7,7′-epoxylignan-4′βglucopyranoside，21]、10β桃金娘烯醇苷（myrtenylβglucopyranoside，22）、neryl-βglucopyranoside（23）、α-松油醇-8β吡喃葡萄糖苷（α-terpineol- 8βglucopyranoside，24）、连翘环己醇酮（rengyolone，25）和阿魏酸甲酯（methyl ferulate，26）。其中化合物1、3、4和19～24、26为首次从连翘属植物中分离得到。对分离得到的化合物进行了体外抗肿瘤活性测试，结果显示在40 μmol/L浓度下化合物5～18对HepG-2和MCF-7细胞系具有一定的细胞毒性活性。

1 仪器与材料

Waters 2487紫外检测器和Waters 515高效液相色谱仪（美国Waters公司），UPLC-Waters SYNG2SIHD TOF超高效液相-高分辨飞行时间质谱（美国Waters公司），Bruker avance Ⅲ600核磁共振波谱仪（德国Bruker公司）和P850型旋光仪（中国济南海能仪器股份有限公司）。

柱色谱硅胶（100～200、200～300目）和薄层硅胶GF254（青岛海洋化工有限公司），聚酰胺（60～90目，江苏长丰化工有限公司），MCI GEL CHP20P填料（日本三菱化学），开放柱ODS填料（日本三菱公司）和YMC-Pack ODS-A反相色谱柱（日本三菱公司）。

连翘药材采购于哈尔滨三棵树药材市场，经沈阳药科大学中药学院吕重宁副教授鉴定为木犀科连翘属植物连翘(Thunb.) Vahl的干燥果实。样品（FS-201909）保存于西南民族大学敬文园B栋221实验室。

2 提取与分离

75%乙醇水溶液超声提取连翘果实（11.8 kg），减压浓缩后，用水复溶，依次用氯仿、醋酸乙酯和正丁醇试剂按照1∶1的比例进行萃取，得到氯仿层（650.9 g）、醋酸乙酯层（213.2 g）和正丁醇层（700.3 g）。对醋酸乙酯萃取层采用HP20色谱柱进行分离，流动相为体积分数10%、30%、50%、70%、90%甲醇水以及纯甲醇梯度洗脱，得到7个流分（E-1～E-7）。E-2首先经硅胶柱色谱进行初步分离，二氯甲烷-甲醇（40∶1、20∶1、10∶1、8∶1、4∶1、0∶1）梯度洗脱，得到7个流分（E-2-1～E-2-7）。E-2-2经凝胶柱色谱分离，纯甲醇等度洗脱，得到8个流分（E-2-2-1～E-2-2-8），对E-2-2-7采用pHPLC进行等度洗脱，流动相为55%甲醇水，得到化合物22（E-2-2-7-2-1，R＝60 min，10.5 mg）、23（R＝62 min，7.2 mg）和24（R＝62 min，5.9 mg）；E-2-3经凝胶柱色谱分离，流动相依次为纯甲醇，洗脱7个保留体积，合并浓缩后得到5个流分（E-2-3-1～E-2-3-5），对E-2-3-4采用pHPLC进行等度洗脱，流动相为40%甲醇水，得到化合物1（R＝30 min，15.8 mg）。E-2-4经聚酰胺柱色谱分离，流动相二氯甲烷-甲醇（30∶1、25∶1、15∶1、10∶1、5∶1、0∶1）梯度洗脱，得到10个流分（E-2-4-1～E-2-4-10）。E-2-4-4经硅胶柱色谱分离，二氯甲烷-甲醇-水（15∶1∶0.05、8∶2∶0.2、7∶3∶0.5）进行洗脱，得到3个流分（E-2-4-4-1～E-2-4-4-3）。对E-2-4-4-2采用pHPLC进行等度洗脱，流动相为38%甲醇水，得到化合物7（R＝40 min，12.5 mg）、11（R＝45 min，25.1 mg）、18（R＝50 min，6.1 mg）。E-2-4-9，经硅胶柱色谱分离，流动相为二氯甲烷∶甲醇∶水＝15∶1∶0.05、8∶2∶0.2和7∶3∶0.5进行洗脱，得到4个流分（E-2-4-9-1～E-2-4-9-4），对E-2-4-9-3采用pHPLC进行等度洗脱，流动相为36%甲醇水，得到化合物3（R＝51 min，15.1 mg）、4（R＝52 min，10.2 mg）；E-2-5经聚酰胺柱色谱分离，流动相为二氯甲烷-甲醇（30∶1、25∶1、15∶1、10∶1、5∶1、0∶1）梯度洗脱，得到4个流分（E-2-5-1～E-2-5-4）。E-2-5-3经硅胶柱色谱分离，流动相二氯甲烷-甲醇-水（15∶1∶0.05、8∶2∶0.2、7∶3∶0.5）洗脱，得到6个流分（E-2-5-3-1～E-2-5-3-6）。对E-2-5-3-4采用pHPLC进行等度洗脱，流动相为29%甲醇水，得到化合物2（R＝37 min，13.4 mg）。E-7首先经硅胶柱色谱进行初步的分离，开放柱流动相依次为二氯甲烷-甲醇（40∶1、20∶1、10∶1、8∶1、4∶1、0∶1）梯度洗脱，得到5个流分（E-7-1～E-7-5）。E-7-4经聚酰胺柱色谱分离，流动相二氯甲烷-甲醇（30∶1、25∶1、15∶1、10∶1、5∶1、0∶1）梯度洗脱，得到6个流分（E-7-4-1～E-7-4-6）。E-7-4-5-6通过ODS开放柱色谱，以甲醇-水（40%～100%）为流动相梯度洗脱，得到6个流分（E-7-4-5-6-1～E-7-4-5-6-5）。E-7-4-5-6-4在经pHPLC进行等度洗脱，流动相为32%甲醇水，得到化合物19（R＝19 min，7.2 mg）、20（R＝23 min，15 mg）、21（R＝26 min，20 mg）。

对氯仿萃取层采用HP20色谱柱进行分离，流动相依次为体积分数为30%～90%甲醇水以及纯甲醇，进行梯度洗脱，得到7个流分（D-1～D-7）。D-3经硅胶柱色谱，流动相二氯甲烷-醋酸乙酯（40∶1、30∶1、20∶1、15∶1、10∶1、2∶1）梯度洗脱，得9个流分（D-3-1～D-3-9）。D-3-3通过Sephadex LH-20柱色谱分离，流动相为纯甲醇，得到5个流分（D-3-3-1～D-3-3-5），D-3-3-3通过pHPLC等度洗脱，流动相为45%甲醇水，得到化合物5（R＝17 min，15.4 mg）、17（R＝19 min，10.2 mg）、8（R＝22 min，9.1 mg）、12（R＝24 min，4.4 mg）和10（R＝36 min，11.6 mg）。D-3-5通过pHPLC等度洗脱，流动相为30%甲醇水，得到化合物9（R＝19 min，9 mg）、6（R＝26 min，16.9 mg）和13（R＝31 min，10 mg）。D-3-7通过ODS开放柱色谱，以甲醇-水（40%～100%）为流动相梯度洗脱，得到6个流分（D-3-7-1～D-3-7-6），D-3-7-2经pHPLC进行等度洗脱，流动相为35%甲醇水，得到化合物14（R＝17 min，6.2 mg）、15（R＝32 min，22.5 mg）和16（R＝38 min，5.6 mg）。D-6经硅胶柱色谱进行初步的分离，流动相二氯甲烷-醋酸乙酯（40∶1、30∶1、20∶1、15∶1、10∶1、2∶1）梯度洗脱，得到7个流分（D-6-1～D-6-7）。D-6-2通过ODS开放柱色谱，以甲醇-水（40%～100%）为流动相梯度洗脱，得到5个流分（D-6-2-1～D-6-2-5），D-6-2-3在经pHPLC进行等度洗脱，流动相为35%甲醇水，得到化合物26（R＝38 min，5.9 mg）。D-6-4经聚酰胺柱色谱分离，流动相二氯甲烷-甲醇（40∶1、25∶1、15∶1、10∶1、4∶1）梯度洗脱，得到6个流分（D-6-4-1～D-6-4-6），D-6-4-4通过ODS开放柱色谱，以甲醇-水（40%～100%）为流动相梯度洗脱，得到6个流分（D-6-4-4-1～D-6-4-4-6）。D-6-6经聚酰胺柱色谱，以二氯甲烷-甲醇（40∶1、30∶1、20∶1、15∶1、10∶1、4∶1）为流动相，梯度洗脱得到5个流分（D-6-6-1～D-6-6-5），D-6-6-2通过ODS开放柱色谱以甲醇-水（40%～100%）为流动相梯度洗脱，得到6个流分（D-6-6-2-1～D-6-6-2-6），D-6-6-2-4在经pHPLC进行等度洗脱，流动相为37%甲醇水，得到化合物25（R＝35 min，4.1 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：白色无定形粉末（氯仿-甲醇）。ESI-MS/457.146 8 [M＋Na]+(Calcd. 457.146 8, C22H26O9Na)，分子式为C22H26O9。1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 9.31 (1H, s, OH), 9.18 (1H, s, OH), 7.02 (2H, dd,= 9.0, 2.0 Hz, H-2), 6.67 (2H, dd,= 9.0, 2.0 Hz, H-3), 2.73 (2H, t,= 6.7 Hz, H-7), 3.78 (1H, td,= 9.8, 8.1, 6.7 Hz, H-8a), 3.58～3.56 (1H, m, H-8b), 4.19 (1H, d,= 7.8 Hz, H-1), 2.97 (1H, t,= 7.8 Hz, H-2), 3.18～3.13 (1H, m, H-3), 3.06 (1H, t,= 9.4 Hz, H-4), 3.33 (1H, dd,= 11.8, 6.9, 2.0 Hz, H-5), 4.31 (1H, dd,= 11.8, 2.0 Hz, H-6a), 4.05 (1H, dd,= 11.8, 6.9 Hz, H-6b), 7.04 (2H, dd,= 9.0, 2.0 Hz, H-2), 6.65 (2H, dd,= 9.0, 2.0 Hz, H-3), 3.52 (2H, d,= 2.5 Hz, H-7)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 129.1 (C-1), 130.2 (C-2), 115.6 (C-3), 156.1 (C-4), 115.6 (C-5), 130.2 (C-6), 35.3 (C-7), 70.5 (C-8), 103.3 (C-1′), 74.1 (C-2′), 76.9 (C-3′), 70.6 (C-4′), 73.8 (C-5′), 64.4 (C-6′), 124.8 (C-1′′),130.7 (C-2′′), 115.5 (C-3′′), 156.7 (C-4′′), 115.5 (C-5′′), 130.7 (C-6′′), 40.0 (C-7′′), 172.0 (C-8′′)。以上数据与文献对照[9]，鉴定化合物1为2-(4-hydroxyphenyl)ethyl-6[(4-hydroxyphenyl) acetyl]-βglucopyranoside。

化合物2：棕色无定形粉末（氯仿-甲醇）。ESI-MS/501.136 4 [M＋Na]+(Calcd. 501.137 3, C22H26O11Na)，分子式为C22H26O11。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 6.67 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2), 6.63 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5), 6.53 (1H, dd,= 8.0, 2.0 Hz, H-6), 2.79～2.77 (2H, m, H-7), 3.97～3.95 (1H, m, H-8a), 3.71～3.69 (1H, m, H-8b), 4.32 (1H, d,= 7.8, H-1′), 3.22 (1H, t,= 7.8 Hz, H-2′), 3.38～3.36 (1H, m, H-3′), 3.37～3.35 (1H, m, H-4′), 3.52～3.50 (1H, m, H-5′), 4.50 (1H, dd,= 11.9, 2.2 Hz, H-6′a), 4.32 (1H, dd,= 11.9, 6.0 Hz, H-6′b) , 7.03 (1H, d,= 2.1 Hz, H-2′′), 6.77 (1H, d,= 8.2 Hz, H-5′′), 6.88 (1H, dd,= 8.2, 2.1 Hz, H-6′′), 7.56 (1H, d,= 15.9 Hz, H-7′′), 6.28 (1H, d,= 15.9 Hz, H-8′′)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 130.0 (C-1), 115.7 (C-2), 144.7 (C-3), 143.3 (C-4), 115.0 (C-5), 119.9 (C-6), 35.3 (C-7), 71.0 (C-8), 103.2 (C-1′), 73.7 (C-2′), 76.5 (C-3′), 70.3 (C-4′), 74.1 (C-5′), 63.2 (C-6′), 126.3 (C-1′′), 113.6 (C-2′′), 145.8 (C-3′′), 148.3 (C-4′′), 115.1 (C-5′′), 121.8 (C-6′′), 145.4 (C-7′′), 113.4 (C-8′′), 167.8 (C-9′′)。以上数据与文献对照[10]，鉴定化合物2为calceolarioside B。

化合物3：淡黄色粉状物（氯仿-甲醇）。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 4.33 (1H, d,= 7.2 Hz, H-1), 3.24 (1H, t,= 8.2 Hz, H-2), 3.39～3.38 (1H, m, H-3), 3.37～3.36 (1H, m, H-4), 3.54 (1H, ddd,= 8.6, 6.1, 2.0 Hz, H-5), 4.50 (1H, dd,= 8.1, 2.0 Hz, H-6a), 4.34～4.32 (1H, m, H-6b), 7.04 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 6.78 (1H, d,= 8.4 Hz, H-5′), 6.90 (1H, dd,= 8.4, 2.0 Hz, H-6′), 7.57 (1H, d,= 15.9 Hz, H-7′ ), 6.30 (1H, d,= 15.9 Hz, H-8′), 7.03 (2H, d,= 8.0 Hz, H-2′′, 6′′), 6.66 (2H, d,= 8.0 Hz, H-3′′, 5′′), 2.84～2.82 (2H, m, H-7′′), 3.95～3.94 (1H, m, H-8′′a), 3.75～3.72 (1H, m, H-8′′b)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD):103.2 (C-1), 74.1 (C-2), 76.6 (C-3), 71.1 (C-4), 73.8 (C-5), 63.4 (C-6), 126.4 (C-1′), 115.2 (C-2′), 145.5 (C-3′), 148.4 (C-4′), 113.6 (C-5′), 121.9 (C-6′), 146.0 (C-7′), 113.8 (C-8′), 167.9 (C-9′), 129.3 (C-1′′), 114.9 (C-2′′), 129.5 (C-3′′), 155.5 (C-4′′), 129.6 (C-5′′), 114.9 (C-6′′), 35.2 (C-7′′), 70.5 (C-8′′)。以上数据与文献对照[11]，鉴定化合物3为2-(4-hydroxyphenyl)ethyl-6()-caffeoyl-βgluco- pyranoside。

化合物4：淡黄色粉状（氯仿-甲醇)。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 6.59 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2), 6.55 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5), 6.45 (1H, dd,= 8.0, 2.0 Hz, H-6), 2.70 (2H, t,= 7.6 Hz, H-7), 3.86 (1H, dt,= 9.9, 7.6 Hz, H-8a), 3.63～3.62 (1H, m, H-8b), 4.25 (1H, d,= 7.7 Hz, H-1′), 3.13 (1H, t,= 8.3 Hz, H-2′), 3.32～3.31(1H, m, H-3′), 3.27～3.26 (1H, m, H-4′), 3.43～3.42 (1H, m, H-5′), 4.42 (1H, dd,= 11.8, 2.2 Hz, H-6′a), 4.23～4.22 (1H, m, H-6′b), 7.31 (2H, d,= 8.5 Hz, H-2′′, 6′′), 6.71 (2H, d,= 8.5 Hz, H-3′′, 5′′), 7.53 (1H, d,= 15.9 Hz, H-7′′), 6.25 (1H, d,= 15.9 Hz, H-8′′)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 130.1 (C-1), 115.8 (C-2), 143.4 (C-3), 145.6 (C-4), 113.6 (C-5), 119.9 (C-6), 35.4 (C-7), 71.2 (C-8), 103.3 (C-1′), 73.8 (C-2′), 76.6 (C-3′), 70.5 (C-4′), 74.1 (C-5′), 63.4 (C-6′), 125.8 (C-1′′), 115.6 (C-2′′), 129.9 (C-3′′), 159.9 (C-4′′), 129.9 (C-5′′), 115.6 (C-6′′), 144.8 (C-7′′), 115.1 (C-8′′), 167.9 (C-9′′)。以上数据与文献对照[12]，鉴定化合物4为6′coumaroyl-1′[2-(3,4-dihydroxyphenyl)ethyl]-βglucopyranoside。

化合物6：黄色油状物（氯仿-甲醇），ESI-MS/373.129 6 [M－H]−(Calcd. 373.128 7, C20H21O7)，分子式为C20H22O7。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 7.05 (1H, d,= 8.0 Hz, H-2), 6.85 (1H, d,= 1.9 Hz, H-5), 6.86 (1H, dd,= 8.0, 1.9 Hz, H-6), 4.68 (1H, brs, H-7), 3.87 (1H, m, H-9a), 3.76 (2H, dd,= 9.1, 6.2 Hz, H-9b), 6.88 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 6.73 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5′), 6.79 (1H, dd,= 8.1, 2.0 Hz, H-6′), 4.87 (1H, d,= 5.2 Hz, H-7′), 4.04 (1H, d,= 9.3 Hz, H-9′a), 4.46 (1H, dd,= 9.3, 8.2 Hz, H-9′b), 3.02～3.05 (1H, m, H-8′), 3.87 (3H, s, -OCH3), 3.86 (3H, s, -OCH3)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 132.3 (C-1), 111.4 (C-2), 147.5 (C-3), 146.2 (C-4), 115.0 (C-5), 120.3 (C-6), 88.0 (C-7), 91.5 (C-8), 74.8 (C-9), 127.9 (C-1′), 110.0 (C-2′), 147.4 (C-3′), 146.1 (C-4′), 114.7 (C-5′), 119.2 (C-6′), 86.5 (C-7′), 61.1 (C-8′), 70.7 (C-9′), 55.1 (-OCH3), 55.0 (-OCH3)。以上数据与文献对照[14]，鉴定化合物6为8-hydroxypinoresinol。

化合物7：黄色胶体（氯仿-甲醇），ESI-MS/543.183 4 [M＋Na]+(Calcd. 543.184 2, C26H32O11Na)，分子式为C26H32O11。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 6.94 (1H, d,= 1.9 Hz, H-2), 6.76 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5), 6.80 (1H, dd,= 8.1, 1.9 Hz, H-6), 4.70 (1H, d,= 4.2 Hz, H-7), 3.14～3.12 (1H, m, H-8), 4.24～4.22 (1H, m, H-9a), 3.86～3.85 (1H, m, H-9b), 7.02 (1H, d,= 2.1 Hz, H-2′), 7.14 (1H, d,= 8.3 Hz, H-5′), 6.91 (1H, dd,= 8.3, 2.1 Hz, H-6′), 4.75 (1H, d,= 4.0 Hz, H-7′), 3.15～3.13 (1H, m, H-8′), 4.23～4.21 (1H, m, H-9′a), 3.85～3.84 (1H, m, H-9′b), 4.88 (1H, d,= 8.0 Hz, H-1′′), 3.40～3.38 (1H, m, H-2′′), 3.47～4.45 (1H, m, H-3′′), 3.39～3.37 (1H, m, H-4′′), 3.52～3.47 (1H, m, H-5′′), 3.34 (1H, m, H-6′′b), 3.68 (1H, dd,= 11.9, 3.6 Hz, H-6′′a), 3.86 (3H, s, -OCH3), 3.85 (3H, s, -OCH3)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 136.1 (C-1), 110.2 (C-2), 149.6 (C-3), 146.1 (C-4), 116.6 (C-5), 118.4 (C-6), 85.7 (C-7), 54.1 (C-8), 71.3 (C-9), 132.4 (C-1′), 109.6 (C-2′), 147.7 (C-3′), 145.9 (C-4′), 114.7 (C-5′), 118.7 (C-6′), 86.1 (C-7′), 54.0 (C-8′), 71.3 (C-9′),101.4 (C-1′′), 73.5 (C-2′′), 76.4 (C-3′′), 69.9 (C-4′′), 76.8 (C-5′′), 61.1 (C-6′′), 55.3 (-OCH3), 55.0 (-OCH3)。以上数据与文献对照[15]，鉴定化合物7为pinoresinol-4βglucopyranoside。

化合物10：无色针状结晶（氯仿-甲醇）。1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 3.77, 3.76, 3.75 (9H, s, 3, 3′, 4′-OCH3), 6.72～6.93 (6H, m, H-2, 2′, 5, 5′, 6, 6′), 4.32 (1H, d,= 7.0 Hz, H-7), 2.81～2.85 (m, 1H, H-8), 4.07 (1H, d,= 9.3 Hz, H-9a), 3.73 (1H, m, 1H, H-9b), 4.80 (1H, d,= 5.9 Hz, 1H, H-7′), 3.36～3.41 (1H, m, H-8′, 9a′), 3.73 (1H, m, H-9b′)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 132.9 (C-1), 110.8 (C-2), 148.1 (C-3), 148.1 (C-4), 115.7 (C-5), 119.2 (C-6), 87.6 (C-7), 54.5 (C-8), 69.4 (C-9), 131.8 (C-1′), 110.0 (C-2′), 149.0 (C-3′), 146.5 (C-4′), 112.1 (C-5′), 118.1 (C-6′), 81.8 (C-7′), 49.9 (C-8′), 70.9 (C-9′), 56.1 (-OCH3), 56.0 (-OCH3), 54.5 (-OCH3)。以上数据与文献对照[17]，鉴定化合物10为phillygenin。

化合物14：白色粉末（氯仿-甲醇），ESI-MS/357.134 7 [M－H]−(Calcd. 357.133 8, C20H21O6)，分子式为C20H22O6。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 7.52 (1H, d,= 2.1 Hz, H-2), 6.96 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5), 7.57 (1H, dd,= 8.1, 2.1 Hz, H-6), 4.46 (1H, d,= 8.4 Hz, H-8), 4.42 (1H, dd,= 9.0, 6.5 Hz, H-9a), 4.28 (1H, dd,= 6.5, 4.1 Hz, H-9b), 6.81 (1H, d,= 1.8 Hz, H-2′), 6.80 (1H, d,= 8.5 Hz, H-5′), 6.77 (1H, dd,= 8.5, 1.8 Hz, H-6′), 2.55～2.48 (1H, m, H-8′), 0.79 (3H, d,= 7.1 Hz, 9′-CH3), 3.88 (3H, s, -OCH3), 3.87 (3H, s, -OCH3)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 132.1 (C-1), 110.1 (C-2), 147.8 (C-3), 149.2 (C-4), 115.5 (C-5), 124.7 (C-6), 199.4 (C-7), 46.0 (C-8), 69.6 (C-9), 127.4 (C-1′), 109.7 (C-2′), 146.2 (C-3′), 145.1 (C-4′), 114.7 (C-5′), 119.2 (C-6′), 87.7 (C-7′), 48.6 (C-8′), 11.7 (C-9′), 55.1 (-OCH3), 54.9 (-OCH3)。以上数据与文献对照[21]，鉴定化合物14为-(7,8′,8)-forsythialan C。

化合物15：白色粉末（氯仿-甲醇），ESI-MS/357.134 9 [M－H]−(Calcd. 357.133 8, C20H21O6)，分子式为C20H22O6。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 7.58 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2), 6.96 (1H, d,= 8.3 Hz, H-5), 7.61 (1H, dd,= 8.3, 2.0 Hz, H-6), 3.84 (1H, dt,= 10.3, 9.0 Hz, H-8), 4.09 (1H, dd,= 8.4, 6.9 Hz, H-9a), 4.01 (1H, dd,= 9.0, 6.9 Hz, H-9b), 6.93 (1H, d,= 1.8 Hz, H-2′), 6.89 (1H, d,= 8.4 Hz, H-5′), 6.81 (1H, dd,= 8.4, 1.8 Hz, H-6′), 4.38 (1H, d,= 9.6 Hz, H-7′), 2.44～2.43 (1H, m, H-8′), 1.02 (3H, d,= 6.6 Hz, H-9′), 3.93 (3H, s, -OCH3), 3.88 (3H, s, -OCH3)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 131.5 (C-1), 110.8 (C-2), 146.4 (C-3), 149.3 (C-4), 114.8 (C-5), 124.0 (C-6), 198.8 (C-7), 53.6 (C-8), 70.2 (C-9), 132.5 (C-1′), 109.7 (C-2′), 147.9 (C-3′), 146.8 (C-4′), 114.6 (C-5′), 119.8 (C-6′), 89.1 (C-7′), 46.4 (C-8′), 13.8 (C-9′), 55.2 (-OCH3), 54.1 (-OCH3)。以上数据与文献对照[21]，鉴定化合物15为-(7,8′,8)-forsythialan C。

化合物16：黄色无定形粉末（氯仿-甲醇），ESI-MS/359.150 5 [M－H]−(Calcd. 359.149 5, C20H23O6)，分子式C20H24O6。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 6.66 (1H, s, H-2), 6.19 (1H, s, H-5), 2.78 (2H, d,= 7.8 Hz, H-7), 2.02～1.98 (m, 1H, H-8), 3.68～3.66 (1H, m, H-9a), 3.66～3.64 (1H, m, H-9b ), 6.68 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 6.75 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5′), 6.62 (1H, dd,= 8.0, 2.0 Hz, H-6′), 3.81～3.79 (1H, m, H-7′), 1.77～1.75 (1H, m, H-8′), 3.71 (1H, dd,= 11.3, 4.9 Hz, H-9′a), 3.40 (1H, dd,= 11.3, 4.1 Hz, H-9′b), 3.81 (3H, s, -OCH3), 3.78 (3H, s, -OCH3)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 138.8 (C-1′), 113.9 (C-2′), 149.2 (C-3′), 146.1 (C-4′), 115.9 (C-5′), 123.3 (C-6′), 48.2 (C-7′), 48.1 (C-8′), 62.3 (C-9′), 129.1 (C-1), 112.5 (C-2), 147.3 (C-3), 145.4 (C-4), 117.5 (C-5), 134.3 (C-6), 33.7 (C-7), 40.1 (C-8), 66.1 (C-9), 56.5 (-OCH3), 56.5 (-OCH3)。以上数据与文献对照[22]，鉴定化合物16为(7,8,8)- isolariciresinol。

化合物17：淡黄色油状物（氯仿-甲醇），ESI-MS/357.135 1 [M－H]−(Calcd. 357.133 8, C20H21O6)，分子式C20H22O6。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 6.57 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2), 6.53 (1H, d,= 7.6 Hz, H-5), 6.69 (1H, dd,= 7.6, 2.0 Hz, H-6), 2.82 (2H, d,= 7.0 Hz, H-7), 2.54～2.52 (1H, m, H-8), 4.18 (1H, d,= 7.4 Hz, H-9a), 4.16 (1H, d,= 7.4 Hz, H-9b), 6.70 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 6.51 (1H, d,= 7.0 Hz, 1H, H-5′), 6.59 (1H, dd,= 7.0, 2.0 Hz, H-6′), 2.90 (2H, dd,= 5.4, 2.0 Hz, H-7′), 2.68～2.66 (1H, m, H-8′), 3.80 (3H, s, -OCH3), 3.79 (3H, s, -OCH3)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 129.5 (C-1), 112.6 (C-2), 147.8 (C-3), 145.1 (C-4), 114.9 (C-5), 121.8 (C-6), 37.6 (C-7), 46.5 (C-8), 71.6 (C-9), 130.2 (C-1′), 112.0 (C-2′), 147.7 (C-3′), 144.9 (C-4′), 114.8 (C-5′), 120.9 (C-6′), 34.1 (C-7′), 41.2 (C-8′), 180.4 (C-9′), 55.0 (-OCH3), 55.0 (-OCH3)。以上数据与文献对照[23]，鉴定化合物17为matairesinol。

化合物18：黄色无定型粉末（氯仿-甲醇），ESI-MS/543.184 1 [M＋Na]+(Calcd. 543.184 2, C26H32O11Na)，分子式C26H32O11。1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 6.62 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2), 6.99 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5), 6.49 (1H, dd,= 8.0, 2.0 Hz, H-6), 2.42 (1H, d,= 5.4 Hz, H-8), 4.09 (1H, m, H-9a), 3.86 (1H, t,= 8.5 Hz, H-9b), 6.68 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 6.65 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5′), 6.78 (1H, dd,= 8.0, 2.0 Hz, H-6′), 2.43 (1H, d,= 9.0 Hz, H-7′a), 2.81～2.80 (1H, m, H-7′b), 2.73 (1H, dt,= 8.9, 6.0 Hz, H-8′), 4.84 (1H, d,= 7.2 Hz, H-1′′), 3.26～3.25 (1H, m, H-2′′), 3.27～3.26 (1H, m, H-3′′), 3.15～3.14 (1H, m, H-4′′), 3.23～3.22 (1H, m, H-5′′), 3.65 (1H, dd,= 11.7, 2.1 Hz, H-6′′a), 3.44 (1H, dd,= 11.7, 5.6 Hz, H-6′′b), 3.72 (3H, s, -OCH3), 3.71 (3H, s, -OCH3)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 132.2 (C-1), 113.1 (C-2), 149.1 (C-3), 145.4 (C-4), 115.5 (C-5), 121.2 (C-6), 37.3 (C-7), 41.3 (C-8), 71.2 (C-9), 130.0 (C-1′), 114.3 (C-2′), 148.0 (C-3′), 145.7 (C-4′), 115.8 (C-5′), 121.8 (C-6′), 33.9 (C-7′), 46.0 (C-8′), 178.9 (C-9′), 100.6 (C-1′′), 73.7 (C-2′′), 77.4 (C-3′′), 70.1 (C-4′′), 77.3 (C-5′′), 61.1 (C-6′′), 56.1 (-OCH3), 56.0 (-OCH3)。以上数据与文献对照[24]，鉴定化合物18为martairesinol-4βglucopyranoside。

化合物20：淡黄色油状物（氯仿-甲醇）。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 7.17 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2), 6.96 (1H, dd,= 8.1, 2.0 Hz, H-5), 7.22 (1H, d,= 8.1 Hz, H-6), 5.14 (2H, dd,= 12.1, 8.9 Hz, H-7), 1.83～1.81 (1H, m, H-8, 8′), 1.04 (6H, dd,= 8.3, 6.5 Hz, H-9, 9′), 7.07 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 6.83 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5′), 6.92 (1H, dd,= 8.0, 2.0 Hz, H-6′), 4.40 (2H, dd,= 12.4, 9.5 Hz, H-7′), 4.93 (1H, d,= 7.4 Hz, H-1′′), 3.71 (1H, dd,= 5.2, 2.2 Hz, H-2′′), 3.48～3.47 (1H, m, H-3′′), 3.43～3.42 (1H, m, H-4′′), 3.41～3.40 (1H, m, H-5′′), 3.72～3.70 (1H, m, H-6′′a), 3.70～3.69 (1H, m, H-6′′b), 3.90 (3H, s, -OCH3), 3.89 (3H, s, OCH3)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 132.5 (C-1), 112.4 (C-2), 149.6 (C-3), 146.0 (C-4), 116.7 (C-5), 119.4 (C-6), 87.8 (C-7), 45.3 (C-8), 14.0 (C-9), 136.0 (C-1′), 110.7 (C-2′), 147.8 (C-3′), 146.4 (C-4′), 114.9 (C-5′), 119.7 (C-6′), 87.3 (C-7′), 48.3 (C-8′), 13.9 (C-9′), 55.5 (OCH3), 55.4 (-OCH3), 101.5 (C-1′′), 73.6 (C-2′′), 76.6 (C-3′′), 70.1 (C-4′′), 76.9 (C-5′′), 61.2 (C-6′′)。以上数据与文献对照[25]，鉴定化合物20为(7,7′,8,8′)-4,4′-dihydroxy-3,3′-dimethoxy-7,7′- epoxylignan-4βglucopyranoside。

化合物21：淡黄色油状物（氯仿-甲醇）。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 6.81 (1H, d,= 1.8 Hz, H-2), 6.94 (1H, dd,= 8.1, 1.8 Hz, H-5), 6.80 (1H, d,= 8.1 Hz, H-6), 5.14 (2H, dd,= 12.1, 8.9 Hz, H-7), 1.77～1.75 (1H, m, H-8, 8′), 1.04 (6H, dd,= 8.3, 6.5 Hz, H-9, 9′), 7.02 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 7.18 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5′), 7.09 (1H, dd,= 8.0, 2.0 Hz, H-6′), 4.91 (2H, d,= 7.5 Hz, H-7′), 4.91 (1H, d,= 7.5 Hz, H-1′′), 3.41～3.40 (1H, m, H-2′′), 3.49～3.48 (1H, m, H-3′′), 3.43～3.42 (1H, m, H-4′′), 3.71 (1H, dd,= 5.2, 2.2 Hz, H-5′′), 3.72～3.71 (1H, m, H-6′′a), 3.48～3.47 (1H, m, H-6′′b), 3.86 (3H, s, -OCH3), 3.85 (3H, s, -OCH3)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 131.6 (C-1), 110.4 (C-2), 147.4 (C-3), 145.6 (C-4), 114.5 (C-5), 119.1 (C-6), 83.0 (C-7), 45.7 (C-8), 13.6 (C-9), 135.4 (C-1′), 111.0 (C-2′), 149.1 (C-3′), 146.3 (C-4′), 116.1 (C-5′), 119.6 (C-6′), 83.5 (C-7′), 48.1 (C-8′), 13.6 (C-9′), 55.2 (-OCH3), 55.1 (-OCH3), 101.5 (C-1′′), 73.6 (C-2′′), 76.6 (C-3′′), 70.1 (C-4′′), 76.6 (C-5′′), 61.2 (C-6′′)。以上数据与文献对照[25]，鉴定化合物21为(7,7′,8,8′)-4,4′- dihydroxy-3,3′-dimethoxy-7,7′-epoxylignan-4′βglucopyranoside。

化合物22：白色针状结晶（氯仿-甲醇），ESI-MS/337.161 9 [M＋Na]+(Calcd. 337.162 7, C16H26O6Na)，分子式C16H26O6。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 2.23 (1H, td,= 5.6, 1.4 Hz, H-1), 5.58～5.54 (1H, m, H-3), 2.29 (2H, dt,= 11.7, 2.5 Hz, H-4), 2.11～2.06 (1H, m, H-5), 2.42 (1H, m, H-6a), 1.19 (1H, d,= 8.6 Hz, H-6b), 1.30 (3H, s, H-8), 0.87 (3H, s, H-9), 4.23～4.21 (1H, m, H-10a), 4.02～4.00 (1H, m, H-10b), 4.27 (1H, d,= 7.8 Hz, H-1′), 3.33 (1H, d,= 8.9 Hz, H-2′), 3.28 (1H, dd,= 9.1, 8.9 Hz, H-3′), 3.22～3.20 (1H, m, H-4′), 3.19～3.17 (1H, m, H-5′), 3.85 (1H, dd,= 11.9, 2.3 Hz, H-6′a), 3.66 (1H, dd,= 11.9, 5.7 Hz, H-6′b)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 102.0 (C-1′), 73.7 (C-2′), 76.6 (C-3′), 71.2 (C-4′), 76.8 (C-5′), 61.4 (C-6′), 43.1 (C-1), 144.9 (C-2), 119.4 (C-3), 31.1 (C-4), 40.8 (C-5), 30.9 (C-6), 37.5 (C-7), 25.2 (C-8), 20.2 (C-9), 70.3 (C-10)。以上数据与文献对照[26-28]，鉴定化合物22为myrtenylβglucopyranoside。

化合物23：白色粉状物（氯仿-甲醇），1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 4.31～4.30 (1H, m, H-1), 5.40 (1H, m, H-2), 1.77～1.75 (3H, m, H-4), 2.15～2.12 (1H, m, H-5), 2.10 (1H, m, H-6), 5.12 (1H, m, H-7), 1.68 (3H, s, H-9), 1.62 (3H, s, H-10), 4.28 (1H, d,= 7.8 Hz, H-1′), 3.86 (1H, dd,= 8.1, 2.3 Hz, H-2′), 3.29 (1H, d,= 8.1 Hz, H-3′), 3.68 (1H, dd,= 11.9, 5.6 Hz, H-6′a), 3.34 (1H, m, H-6′b)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 64.9 (C-1), 121.3 (C-2), 140.5 (C-3), 16.5 (C-4), 31.8 (C-5), 26.4 (C-6), 123.7 (C-7), 131.5 (C-8), 22.4 (C-9), 24.6 (C-10), 101.6 (C-1′), 73.8 (C-2′), 76.6 (C-3′), 70.3 (C-4′), 76.8 (C-5′), 61.4 (C-6′)。以上数据与文献对照[29]，鉴定化合物23为neryl-βglucopyranoside。

化合物24：淡黄色无定形粉末（氯仿-甲醇）。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 1.70～1.69 ( 1H, m, H-1), 1.30 (1H, ddd,= 12,0, 9.5, 4.4 Hz, H-2), 2.01～1.99 (1H, m, H-3), 5.37 (1H, d,= 2.3 Hz, H-5), 2.17～2.16 (1H, m, H-6), 1.21～1.20 (3H, m, H-7), 0.90 (3H, s, H-9), 0.88 (3H, d,= 1.7 Hz, H-10), 4.25 (1H, d,= 7.8 Hz, H-1′),3.35～3.34 (1H, m, H-2′), 3.28 (1H, t,= 9.1 Hz, H-3′), 3.22 (1H, m, H-4′), 3.16 (1H, dd,= 9.1, 7.7 Hz, H-5′), 3.84 (1H, dd,= 11.8, 2.4 Hz, H-6′a), 3.67 (1H, td,= 11.8, 5.5 Hz, H-6′b)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 43.9 (C-1), 22.3 (C-2), 30.8 (C-3), 133.5 (C-4), 120.6 (C-5), 26.4 (C-6), 21.7 (C-7), 83.1 (C-8), 23.8 (C-9), 23.8 (C-10), 101.8 (C-1′), 74.0 (C-2′), 76.2 (C-3′), 70.4 (C-4′), 77.1 (C-5′), 61.6 (C-6′)。以上数据与文献对照[30]，鉴定化合物24为α-terpineol-8βglucopyranoside。

化合物25：淡黄色无定形粉末（氯仿-甲醇）。1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 4.46 (1H, dd,= 16.2, 8.4 Hz, H-2), 2.78 (1H, dd,= 16.2, 4.2 Hz, H-3a), 2.60 (1H, ddd,= 12.7, 3.0, 1.8 Hz, H-3b), 5.89 (1H, d,= 10.1 Hz, H-5), 6.77 (1H, dd,= 10.1, 1.7 Hz, H-6), 2.44 (1H, ddd,= 10.5, 4.7, 4.6 Hz, H-7a), 2.15 (1H, ddd,= 10.5, 2.2, 1.7, Hz, H-7b), 4.03 (1H, td,= 4.7, 1.7 Hz, H-8a), 3.86 (1H, ddd,= 4.7, 2.6, 1.7 Hz, H-8b)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 74.5 (C-1), 81.1 (C-2), 42.5 (C-3), 197.4 (C-4), 127.5 (C-5), 150.6 (C-6), 38.2 (C-7), 66.0 (C-8)。以上数据与文献对照[31]，鉴定化合物25为rengyolone。

化合物26：黄色无定形粉末（氯仿-甲醇）， ESI-MS/207.067 3 [M－H]−(Calcd. 207.065 7, C11H11O4)，分子式C11H12O4。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 7.18 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2), 6.80 (1H, d,= 8.2 Hz, H-3), 7.06 (1H, dd,= 8.2, 2.0 Hz, H-6), 7.61 (1H, d,= 15.9 Hz, H-7), 6.36 (1H, d,= 15.9 Hz, H-8), 3.89 (3H, s, H-10), 3.76 (3H, s, H-11)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 126.2 (C-1), 122.7 (C-2), 115.1 (C-3), 149.4 (C-4), 148.0 (C-5), 110.3 (C-6), 145.5 (C-7), 113.7 (C-8), 168.3 (C-9), 55.0 (C-10), 50.6 (C-11)。以上数据与文献对照[32]，鉴定化合物26为methyl ferulate。

4 体外抗肿瘤活性评价

取生长状态良好的细胞，加胰酶细胞消化液使贴壁细胞消化脱落，形成细胞混悬液，对细胞进行记数，并将细胞稀释到1×104个/mL。在96孔板上，每孔接种190 μL细胞悬液，置37 ℃、5% CO2的恒温箱中培养，培养12 h使细胞贴壁。倒掉培养液，每孔加入100 μL（含待测化合物浓度为40 μmol/L）DMEM高糖培养液，在恒温箱中培养48 h。吸去100 μL上清液，加入100 μL新鲜DMEM高糖培养液，再加入配制好的10 μL MTT溶液（5 mg/mL、0.5% MTT），继续在恒温箱中培养4 h。吸去100 μL上清液，每孔加入100 μL的甲䐶溶解液，置摇床上低速振荡10 min，在恒温箱中放置4 h左右。在酶联免疫检测仪570 nm处测量各个孔的吸光度（）值，按照公式计算抑制率。每组设定4个复孔，同时设置空白组（含有培养基和MTT）、对照组（含有细胞、培养液和MTT）和阳性对照组（含有细胞、培养液、5-氟尿嘧啶和MTT）。结果见表1。

抑制率＝[(对照－空白)－(给药－空白)]/(对照－空白)

5 讨论

本研究利用多种色谱分离手段对中药连翘进行了化学成分研究，分离鉴定了共26个化合物，其中10个属内首次分离的化合物，化合物1～4为苯乙醇苷类，5～21为木脂素及其苷类，22～24为单萜苷类，25为环己酮类，26为简单苯丙素类化合物。活性测定结果表明，在40 μmol/L下化合物5～18对HepG-2和MCF-7细胞具有一定的细胞毒活性。本研究丰富了连翘的化学成分，为连翘抗肿瘤作用的活性成分发现提供科学依据。

表1 化合物的抑制率

Table1 Inhibition rate of compounds

化合物抑制率/%HepG-2MCF-7 557.3±4.849.5±5.4 654.7±8.941.6±5.5 753.2±9.443.8±1.7 851.0±5.838.1±2.4 954.6±5.344.1±5.4 1055.3±9.341.7±2.2 1151.2±0.747.4±4.8 1256.2±3.544.1±3.5 1349.6±7.240.2±3.5 1447.4±7.842.5±5.1 1549.9±3.643.4±3.5 1647.9±4.339.1±4.9 1752.8±1.839.6±4.8 1851.1±4.451.7±3.4 阳性对照73.8±4.571.3±3.2

利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突

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Study on chemical constituents from

NIE Cheng-dong1, 2, SHA Dong-mei1, 3, 4, HE Xiao-yong1, 3, 4, HEBin1, 3, 4, TIAN Yu-han1, 3, 4, LIU Yuan1, 3, 4, LI Ying3, 4, ZHANG Shao-shan1, 3, 4, FENG Jing-qiu1, 3, 4, LI Juan1, 3, 4, YAN Xin-jia1, 3, 4, WEN Jing2, 5

1. Institute of Qinghai-Tibetan Plateau, Southwest Minzu University, Chengdu 610041, China 2. College of Pharmacy, Harbin University of Commerce, Harbin 150076, China 3. Sichuan Provincial Qiang-Yi Medicinal Resources Protection and Utilization Technology Engineering Laboratory, Chengdu 610225, China 4. Key Laboratory of Protection and Utilization of Ethnic Medicinal Resources in Qinghai-Tibet Plateau, State Ethnic Affairs Commission, Chengdu 610225, China 5. School of Pharmacy, Sichuan College of Traditional Chinese Medicine, Mianyang 621000, China

To study the chemical constituents from Lianqiao [(Thunb.) Vahl].The compounds were separated and purified by various chromatographic techniques, and their structures were identified by physical and chemical properties and spectroscopic methods (NMR and MS). The cytotoxicity of each compound on HepG-2 and MCF-7 cells was tested.A total of 26 compounds were isolated and identified as 2-(4-hydroxyphenyl)ethyl-6[(4-hydroxyphenyl)acetyl]-βglucopyranoside (1), calceolarioside B (2), 2-(4-hydroxyphenyl)ethyl-6()-caffeoyl-βglucopyranoside (3), 6coumaroyl-1[2-(3,4-dihydroxyphenyl) ethyl]-βglucopyranoside (4), (＋)-pinoresinol (5), 8-hydroxypinoresinol (6), pinoresinol-4βglucopyranoside (7), (＋)-epipinoresinol (8), (＋)-1-hydroxy-2-epipinoresinol (9), phillygenin (10), (＋)-epipinoresinol-4βglucopyranoside (11), (＋)-lariciresinol (12), (−)-lariciresinol (13),- (7,8′,8)-forsythialan C (14),-(7,8′,8)-forsythialan C (15), (7,8,8)-isolariciresinol (16), matairesinol (17), martairesinol-4βglucopyranoside (18), (−)-nectandrin B-βglucopyranoside (19), (7,7′,8,8′)-4,4′-dihydroxy-3,3′- dimethoxy-7,7′-epoxylignan-4βglucopyranoside (20), (7,7′,8,8′)-4,4′-dihydroxy-3,3′-dimethoxy-7,7′-epoxylignan-4′βglucopyranoside (21), myrtenylβglucopyranoside (22), neryl-βglucopyranoside (23), α-terpineol-8βglucopyranoside (24), rengyolone (25) and methyl ferulate (26).Compounds 1, 3, 4, 19—24 and 26 are separated from the genus offor the first time. All compounds are evaluated for cytotoxic activities against MCF-7 and HepG-2 cell lines by MTT assay, and the results showed that compounds 5-18 have potential inhibitory activity on MCF-7 and HepG-2 cell lines at 40 μmol/L.

(Thunb.) Vahl.; phenylethanol glycoside; monoterpene glycoside; lignan; antitumor activity; 2-(4- hydroxyphenyl)ethyl-6()-caffeoyl-βglucopyranoside; (＋)-pinoresinol; martairesinol-4βglucopyranoside; α-terpineol- 8βglucopyranoside

R284.1

A

0253 - 2670(2023)17 - 5487 - 11

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.17.003

2023-01-19

国家自然科学基金青年基金项目（81803696）；西南民族大学中央高校基本科研业务费专项资金项目资助（ZYN2023068）

聂承冬，男，硕士研究生，研究方向为中药药效物质基础研究。Tel: (028)89165778 E-mail: 13591776911@163.com

阎新佳，男，博士，教授，研究方向为中药药效物质基础研究。Tel: (028)89165778 E-mail: yanxinjia@yeah.net

温 静，女，博士，工程师，研究方向为中药药效物质基础研究。Tel: (028)89165778 E-mail: dachitu@yeah.net

[责任编辑 王文倩]