口炎清颗粒中麦冬掺伪情况考察

占丽琴，胡亮，毕武，丁野，孙辉，李文莉

湖南省药品检验检测研究院，湖南省药品质量评价工程技术研究中心，湖南 长沙 410001

口炎清颗粒处方包括天冬、麦冬、玄参、山银花和甘草5 味药材，功效为滋阴清热、解毒消肿［1］。口炎清颗粒的处方之一为麦冬ophiopogon japonicus（L.f）Ker-Gawl.的干燥块根，主产于浙江省、四川省。山麦冬来源包括湖北麦冬liriope spicata（Thunb.）Lour.var.proliferaY.T.Ma 或短葶山麦冬liriopemuscari（Decne.）Baily 的干燥块根，为麦冬的常见混伪品，主产于湖北省、福建省，市场流通广泛。麦冬与山麦冬均为百合科植物块根，二者性状相近、功效类似［2-7］。另经市场调研，麦冬的生长周期普遍较山麦冬长，市场需求也较山麦冬大，造成麦冬价格高于山麦冬。基于多种因素，一些生产企业存在未严格按照《药品生产质量管理规范》要求进行生产的可能，故本研究对口炎清颗粒中麦冬掺伪情况进行考察。

相关文献［8-14］显示,山麦冬皂苷B 和短亭山麦冬皂苷C 分别为湖北麦冬和短亭山麦冬的专属性成分。本研究以山麦冬皂苷B 作为掺杂湖北麦冬投料的研究指标，短葶山麦冬皂苷C 作为掺杂短葶山麦冬投料的研究指标，建立口炎清颗粒中麦冬掺伪检查方法，结果本次国抽样品68 批均未检出短葶山麦冬皂苷C，59 批次样品检出山麦冬皂苷B 成分。初步研究结果显示口炎清颗粒中麦冬的主要掺伪品为湖北麦冬，故对检出山麦冬皂苷B 的样品展开系统的方法学考察，为该药品安全生产和科学监管提供可靠依据。

1 材料与仪器

仪器：超高效液相色谱仪串联三重四极杆质谱系统（赛默飞TSQ Endura-UltiMate3000）；电子分析天平METTLER AE240，METTLER TOLEDO XSE205DU；超声波清洗仪KQ500DE。实验用有机试剂乙醇、甲酸、甲醇均为色谱级，水为怡宝水。对照物质均购自中国食品药品检定研究院，包括山麦冬皂苷B（批号：111907-201804）、短葶山麦冬皂苷C（批号：111908-201102）、麦冬对照药材（批号：121013-201711），山麦冬（湖北麦冬）（批号：121136-201803）。

口炎清颗粒所有样品均来自于2022 年国家药品抽检，总计68 批次。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Welch UHPLC Ultimate LP-C18 色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）；流动相：乙腈（A）-0.1%甲酸（B），梯度洗脱（见表1）；流速：0.2 mL/min；进样体积：3 μL；柱温：30 ℃。

表1 洗脱梯度表

2.2 质谱条件

采用质谱检测仪，ESI+模式，喷雾电压：3 100 V，鞘气：20 ARb，辅助气：10 ARb，离子传输管温度：350 ℃，蒸发温度：300 ℃，扫描方式：MRM。选择质核比（m/z）723.3→269.1 和723.3→251.1 作为山麦冬皂苷B 检测离子对，碰撞能量分别为24 V、27 V。

2.3 溶液的制备

2.3.1 对照品贮备溶液制备 精密称取山麦冬皂苷B对照品12.37 mg 置100 mL 量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得（浓度为123.7 µg/mL）。

2.3.2 供试品溶液制备 取样品适量，混匀，研细，取约4.0 g 或1.0 g（无蔗糖），精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理（功率500 W，频率40 kHz）30 min，取出，放冷，补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。

2.3.3 阴性制剂溶液、阳性制剂溶液及标准制剂溶液的制备 将缺麦冬阴性制剂、含湖北麦冬阳性制剂以及标准制剂，按“2.3.2”项下方法制备。

2.4 方法学考察

2.4.1 专属性试验 分别取缺麦冬阴性制剂溶液、含湖北麦冬阳性制剂溶液、标准制剂溶液及山麦冬皂苷B 对照品溶液按“2.1”和“2.2”项下条件测定。结果缺麦冬阴性制剂溶液、标准制剂溶液及麦冬药材在与山麦冬皂苷B 对照品相应的位置上均未出现色谱峰，湖北麦冬药材和阳性制剂在与山麦冬皂苷B 对照品相应的位置上均出现相应的谱峰。表明口炎清颗粒中的各药味对山麦冬皂苷B 的测定无干扰，专属性较好。结果见图1～6。

图1 山麦冬皂苷B对照品溶液MRM

图2 缺麦冬阴性制剂溶液MRM（未检出山麦冬皂苷B）

图3 麦冬对照药材溶液MRM（未检出山麦冬皂苷B）

图4 标准制剂溶液MRM（未检出山麦冬皂苷B）

图5 含湖北麦冬阳性制剂溶液MRM（检出山麦冬皂苷B）

图6 湖北麦冬溶液MRM（检出山麦冬皂苷B）

2.4.2 线性关系 精密量取“2.3.1”项下山麦冬皂苷B 贮备溶液（浓度为123.7 μg/mL）适量，逐级稀释得线性关系对照品溶液①～⑥（浓度分别为7.422 0、1.484 4、0.593 7、0.296 8、0.148 4、0.059 3 μg/mL）。按照“2.1”和“2.2”项下的方法进样测定，分别以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算山麦冬皂苷B 的回归方程为y=109 732x+12 299，r=0.999 0，表明浓度在0.059 3～7.422 0 μg/mL 范围内山麦冬皂苷B 具有较好的线性关系。结果见表2。

表2 山麦冬皂苷B对照品溶液线性关系考察

2.4.3 重复性试验 取适量口炎清颗粒内容物，研细，取约4.0 g，按“2.3.2”项下方法，制备六份平行样。按“2.1”和“2.2”项下方法进样，测定。结果山麦冬皂苷B 的平均值为11.26 μg/g，RSD 为4.82%，表明该方法具良好的重复性。

2.4.4 精密度试验 取已知山麦冬皂苷B 含量的供试品溶液，按“2.1”和“2.2”项下方法进样测定6 次，测定m/z723.3→269.1 离子流色谱的峰面积，离子色谱峰面积的RSD 为4.20%，说明该仪器具良好的精密度。

2.4.5 稳定性试验 取同一供试品溶液，于制备后0、2、4、8、12、24 h 按“2.1”和“2.2”项下方法进样，测定。结果m/z723.3→269.1 离子色谱峰峰面积RSD 为2.42%，说明供试品溶液24 h 内具较好稳定性。

2.4.6 回收率试验 称取已知山麦冬皂苷B 含量的样品适量，平行操作6 份，按100%加入山麦冬皂苷B 适量，按“2.3.2”项下方法制备回收率供试品溶液。再按“2.1”项下方法进样，测定。结果山麦冬皂苷B 的平均回收率为101.84%，RSD 为1.32%，表明该方法准确度良好。结果见表3。

表3 回收率试验结果

2.4.7 检测限试验 以m/z723.3→269.1 作为检测离子进行检测，取线性最低点（浓度0.059 3 μg/mL）进行适量稀释，按信噪比（S/N 约为20）进行折算，山麦冬皂苷B 仪器检测限为0.064 pg，方法检出限为0.000 13 μg/g。

2.4.8 耐用性试验 按上述拟定方法，采用不同品牌的液质联用色谱仪（TSQ Endura、安捷伦1290INfinityⅡ-6470），不同品牌的色谱柱［Welch UHPLC Ultimate LP-C18（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）、CAPCELL C18（2.1 mm×100 mm，2 µm）］对同一份口炎清颗粒样品溶液分别进行测定，结果均检出山麦冬皂苷B，表明方法耐用性较好。

2.5 限度拟定

一方面《中国药典》2020 年版规定：“药屑及杂质通常不得过3%”［1］，山麦冬（湖北麦冬）与麦冬来源为同属植物，性状相近；另一方面考虑到中药制剂生产转移率及检验成本，本研究将考察山麦冬（湖北麦冬）掺入比例为10%时口炎清颗粒中湖北麦冬的检出情况。

首先，取收集的10 批次山麦冬（湖北麦冬）分别以10%的量掺入麦冬，制成掺伪湖北麦冬10%的麦冬药材。再按照规定的处方量分别取自制掺伪湖北麦冬10%的麦冬、天冬、玄参、山银花、甘草药材按工艺自制湖北麦冬掺伪10%的模拟样品共计10 份。最后，供试品溶液按“2.3.2”项下方法制备，按“2.1”和“2.2”项下方法测定，结果10 份模拟样品溶液中山麦冬皂苷B检出浓度范围为0.077～0.32 μg/mL。暂拟定山麦冬皂苷B 检出浓度≥0.32 μg/mL作为判定样品中检出湖北麦冬的限度。

2.6 样品测定

按拟定的方法对本次国家药品抽检的68 批次口炎清颗粒进样测定，结果59 批次样品检出山麦冬（湖北麦冬）专属性成分山麦冬皂苷B，问题批次占全部批次的86.76%。提示生产企业存在掺山麦冬（湖北麦冬）或使用山麦冬（湖北麦冬）替代麦冬投料的可能。

3 讨论

实验前期，分别对不同的提取溶剂包括80%乙醇、30%甲醇、50%甲醇、80%甲醇、100%甲醇进行考察，对加入溶剂甲醇的不同体积10、25、50 mL 进行考察，结果表明25 mL 甲醇的提取效果较好。对山麦冬皂苷B 进行了正、负离子扫描进行考察，结果显示山麦冬皂苷B 在正离子模式下响应较好。对麦冬掺伪10%湖北麦冬进行考察，结果山麦冬皂苷B 的检出浓度范围较大，分析原因可能与湖北麦冬质量有关，故最后拟定检出限度为浓度的最高值0.32 μg/mL。

本次实验用样品来源于两个不同厂家，结果显示两个厂家生产的口炎清颗粒中山麦冬皂苷B 的检出率分别为96.9%、77.8%，均较高，分析原因可能生产企业质量控制主体意识不强，未严格按照《药品生产质量管理规范》进行生产。

本研究建立口炎清颗粒的麦冬掺伪检查方法，快速、高效，可以作为现行质量标准的补充，为口炎清颗粒的质量控制提供参考。