海南省某高校学生使用中的滴眼液微生物污染情况调查分析

宋心怡，徐淑慧，张楠，王彦双，孙晓玥，夏乾峰

海南医学院，海南 海口 571199

随着现代社会电子产品的普及以及人们用眼习惯的改变，各类眼部疾病的发病率显著增加，滴眼液成为人们日常生活中频繁使用的药物。据报道，滴眼液开启后的最高污染率可达96.46%[1]，与手术室及病房使用的滴眼液相比，患者在家使用的滴眼液污染率更高[2]。这与滴眼液的开封时间、日常使用频率、使用过程中是否与眼睑及周围环境的接触与污染等相关的危险因素密切相关[3-5]。滴眼液开封后常见的污染菌为金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌、变形杆菌等细菌，以及部分真菌[6-13]。

海南省气候温暖湿润，为微生物的繁殖生长提供了有利的气候条件。本研究首次收集海南省在校大学生使用中的滴眼液进行微生物培养，后使用全自动微生物质谱仪对分离出的微生物进行菌种鉴定，以全面评估我省高校在校学生滴眼液使用中的污染情况，为生活中滴眼液的安全使用和正确保存提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 于2022 年3～5 月在海南医学院学生公寓进行上门调查，随机抽取6栋学生公寓楼，共101 名在校大学生，共收集到学生正在使用的滴眼液101瓶。每瓶滴眼液选取3个部位进行采样，分别为瓶身、瓶口和残余液体，共计303份检测样本。这批志愿者中，男性35人，女性66人；年龄＜25岁者91人，年龄≥25岁者10人；本科74人，研究生27人。所采集的滴眼液包括抗视疲劳类、抗生素类、其他类(人工泪液、润滑液类、糖皮质激素类、抗组胺类、非甾体类)等类型。

1.2 培养基与试剂 营养琼脂(NA，海博生物技术有限公司)；牛肉浸膏(BEEF EXTRACT，广东环凯微生物科技有限公司)；氯化钠(NaCl，西陇科学)；蛋白胨(Tryptone，英国OXOID)；质谱系统样本处理基质溶液(中元汇吉)。

1.3 仪器与设备 EXS 2600 全自动微生物质谱仪及配套软件(中元汇吉公司)。

1.4 样本采集与培养 用无菌生理盐水润湿无菌采样棉拭子，在滴眼液的瓶身(距离瓶口0.5 cm处)、瓶口(滴眼液口)、剩余滴眼液(95%酒精消毒瓶口后，收集第二滴液体)三个部位进行采样。根据目前微生物实验室的常规操作步骤及流程,无菌采样棉拭子采样后放入营养肉汤培养基，37℃摇床培养24 h。取一次性无菌接种环，蘸取液体在营养琼脂培养基上进行三区划线，于37℃培养箱培养。24 h后观察培养基菌落生长情况，如有微生物生长，则使用全自动微生物质谱仪进行菌种鉴定。无菌落生长的培养基继续放至7 d，后无菌落生长则视为无微生物污染。

1.5 菌种鉴定 使用EXS 2600全自动微生物质谱仪，取待检单菌落均匀涂抹靶板，取1 μL 甲酸溶液覆盖靶点，加1 μL基质溶液，干燥后上机检测。

1.6 统计学方法 应用SPSS22.0 统计软件进行数据统计分析。计数资料采用χ2检验，采用二元Logistic回归分析滴眼液污染的独立影响因素。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 滴眼液不同部位的污染情况比较 根据所采集的滴眼液部位的不同，污染构成比分别为瓶口26.73%(27/101)、瓶身26.73%(27/101)、液体7.92%(8/101)，瓶口、瓶身的污染率明显高于液体，差异有统计学意义(χ2=14.641，P＜0.05)。

2.2 滴眼液使用者的特征、滴眼液类型和购买渠道比较 在101 瓶滴眼液(303 份检测样本)中有62 份存在不同程度的微生物污染。不同性别、年龄和教育水平使用者的滴眼液污染率比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。其中其他类型滴眼液污染的阳性率为27.2% (22/81)、抗视疲劳类型滴眼液阳性率为21.3%(39/183)、抗生素类型滴眼液阳性为2.6%(1/39)，抗生素类阳性率明显低于抗视疲劳类及其他类，差异据有统计学意义(P＜0.05)；开封时间≤28 d的滴眼液阳性率为12.1%(16/132)，＞28 d的滴眼液阳性率为26.9%(46/171)，开封时间＞28 d的滴眼液污染率明显高于开封时间≤28 d 的滴眼液，差异有统计学意义(P＜0.05)；电商平台组阳性率为25.2% (31/123)、药店组阳性率为21.9% (23/105)、医院组阳性率为10.7% (8/75)，电商平台购买的滴眼液污染率明显高于药店、医院购买，差异具有统计学意义(P＜0.05)；规范使用者的阳性率为13.9% (23/165)、未规范使用者的阳性率为28.3%(39/138)，规范使用者的滴眼液污染率明显低于未规范使用组，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 滴眼液使用者的特征、滴眼液类型和购买渠道比较Table 1 Comparison on characteristics of eye drop users,type of eye drop,and purchase channel

2.3 滴眼液微生物污染的种类和构成比 在62份被污染的滴眼液样本中检测出22种微生物污染，包括21 种细菌(96.8%)和1 种真菌(3.2%)。表皮葡萄球菌和黏质沙雷氏菌是最常见的细菌性污染，占污染总数的29.0%(18/62)。瓶身共分离出14种细菌的污染，其中污染率最高的为表皮葡萄球菌，共分离出7株，占瓶身部位污染菌总数的25.9%(7/27)。瓶口共分离出14种细菌和1种真菌的污染，以表皮葡萄球菌、黏质沙雷氏菌、爱媛类芽孢杆菌和土壤芽胞杆菌为主。残余液体的污染较少，分离出6种细菌和1种真菌的污染，见表2。

表2 滴眼液微生物污染的种类和构成比Table 2 The species and composition ratio of infecting microorgan isms

2.4 滴眼液污染的相关风险因素 将开封时间(≤28 d=1，＞28 d=2)、购买渠道(医院=1，药店=2，电商平台=3)、是否规范使用(是=1，否=2)、滴眼液类型(抗生素=1，其他=2，抗视疲劳=3)作为自变量，将是否污染(是=1，无=0)作为因变量进行二元Logistic 回归分析。结果显示，购买渠道、是否规范使用以及滴眼液的类型是滴眼液污染的独立影响因素(P＜0.05)，见表3。

表3 滴眼液污染相关风险因素的二元Logistic回归分析Table 3 Binary logistic regression analysis of the risk factors asso ciated with contamination of eye drops

3 讨论

本研究收集海南医学院在校大学生正在使用的滴眼液101瓶，通过对瓶口、瓶身和残余液体三个部位进行采样，共检测了303 份样本，其中62 份样本存在不同程度的微生物污染，总体污染率为20.5%。与其他研究相比，本研究滴眼液污染率更高[14-17]，可能因为海南医学院处于热带地区，气候炎热、气温高和环境潮湿,比较适合微生物生长[18]。从细菌分离部位来看，滴眼液的瓶口、瓶身和残余液体的微生物污染率分别为26.73%、26.73%和7.92%，瓶口和瓶身的污染率明显高于残余液体，该结果与其他研究数据保持一致[18-19]。

英国的一项研究结果表明，重复使用同一瓶滴眼液的交叉污染风险约为0.25%，如果重复使用超过6次，交叉污染风险高达1.25%[20]，随着使用次数的增多滴眼液的污染风险将显著上升。在眼部感染的病例报道中，从患者角膜分离培养的微生物与滴眼液常见污染菌高度一致，如铜绿假单胞菌、黏质沙雷菌和变性杆菌等，提示滴眼液中的微生物污染是导致感染性眼病的重要因素[21-22]。因此，多次不规范的使用滴眼液将增加微生物污染风险，最终导致严重的眼部疾病。

本研究结果显示，滴眼液的污染率在不同性别、年龄和教育水平的使用者之间无显著差异，可能因为该研究人群为医学生，相比普通群众有较高的文化水平和无菌意识。滴眼液的不同部位共分离出22 种条件致病菌，多数为人体皮肤和结膜寄生菌，最常见的污染菌为表皮葡萄球菌，提示滴眼液中培养出的微生物主要来源于皮肤和环境的正常菌群。滴眼液开封时间＞28 d、非抗生素类型、从网购和药店渠道购买以及未规范使用都极大提高了滴眼液污染风险，在滴眼液生产、储存或正常使用过程中，微生物可能被带入眼药水，随着使用时间增加，滴眼液本身的抑菌效果下降，引起微生物大量繁殖最终导致眼部疾病的发生[22-24]。

将滴眼液污染相关风险因素进行二元Logistic回归分析发现，滴眼液的使用时间非独立影响因素，可能与样本量局限性有关。既往研究并未对滴眼液污染进行购买渠道的分析，本研究根据购买渠道将滴眼分为电商平台、药店、医院三个不同组别进行统计学分析，结果表明从药店、电商平台渠道购买的滴眼液污染率是从医院购买的2.759倍和3.937倍，该结果可能与滴眼液的运输途中的保存、成分的理化性质以及储存条件相关，需要进一步的实验加以证实。在滴眼液的使用方面，不规范使用滴眼液的污染率是规范使用的3.154 倍。在滴眼液的类型方面，抗视疲劳和其他类型滴眼液的污染风险分别为抗生素类型滴眼液的12.452倍和16.908倍，可能和滴眼液中抗生素和防腐剂的潜在杀灭作用有关[25-26]。

本实验的滴眼液微生物污染率相对其他文献报道处于较高水平，考虑到在校大学生的滴眼液保存及使用受客观条件限制，建议使用者在滴眼液开启1 个月之内使用，使用前清洁手部，使用中遵循无菌原则，避免滴眼液瓶口与眼部和手部皮肤的直接接触，使用后密封放置于干净、阴凉处，过保质期后及时丢弃。同时，学校和社区应该在日常生活中积极开展正确使用和保存滴眼液的健康知识宣讲，提高学生的卫生健康意识。