微柱凝胶免疫检测技术在临床血型鉴定与输血中的应用分析

范雪明 林建 李丽红

输血治疗是目前临床治疗中的常用方法，在大出血、剖宫产、出血性休克等患者中应用较多，但输血前需进行血型鉴定和交叉配血试验，才能保证输血质量的安全性[1]。血型鉴定与交叉配血试验，可快速筛查出相同血型的人群，交叉配血能够预防血型不同导致的相互排斥现象。在传统输血治疗前，一般采用抗人球配血检验，进而筛查出不完全抗体，但这种方法操作复杂性高，容易出现假阴性情况[2]。因此临床急需探索一种新型的交叉配血及血型鉴定技术，提高不完全抗体检出率及交叉配血成功率。微柱凝胶检验技术是目前临床输血前的常用技术，可同时辅助检验血型和交叉配血，均以抗人球蛋白为基础展开检验，检验精确性较高，因此受到临床医师的欢迎。也有报道提示在血型鉴定和交叉配血过程中，需辅助应用聚凝胺法、盐水试管法等，可有效提升血型鉴定准确性和交叉配血成功率[3]。聚凝胺法可中和红细胞表面负电荷，缩短细胞间距，形成可逆性的红细胞凝聚现象，此方法可离心查看结果，为输血提供安全保障，集操作简便、快速等优点于一身。盐水试管法操作简便，但只能检出不配合的完全抗体。为进一步分析微柱凝胶检验技术的临床应用价值，本研究以2021年1月—2022年6月龙岩市第二医院输血科收治的60 例患者为对象，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究以2021年1月—2022年6月龙岩市第二医院输血科收治的60 例患者为对象，男性36 例，女性24 例；年龄19 ～62 岁，平均（42.50±3.26）岁；病程1 ～12 个月，平均（6.50±0.50）个月；体质量52 ～80 kg，平均（60.50±1.25）kg；身体质量指数（body mass index，BMI）18 ～28 kg/m2，平均（22.50±1.50）kg/m2；血型：A 型15 例，B 型20 例，AB 型20 例，O 型5 例。所有患者均采集静脉血进行微柱凝胶检验，资料齐全，可进行后续分析。研究经医院伦理委员会批准。

纳入标准：（1）患者知情同意。（2）精神状态正常，可配合医护工作的患者。（3）近期未服用药物的患者。（4）无先天性疾病的患者。（5）严重贫血、失血性休克，需输血治疗的患者。

排除标准：（1）合并肝肾功能不全的患者。（2）无法配合长期随访的患者。（3）输注其他血液制品。（4）沟通障碍的患者。

1.2 方法

血型鉴定：（1）微柱凝胶检验技术：取患者静脉血3 mL，采用全自动生化分析仪（济南爱来宝医疗科技公司，BK600）进行高速离心处理，分离血浆、红细胞。室温保存血型鉴定卡，制作5% 红细胞悬液，悬液制作完成后取10 μL 倒入微孔管进行正定型处理；反定型处理：准备10 μL 5%浓度A 型标准红细胞、B 型标准红细胞，与50 μL 血浆共同加入微孔板，离心处理后快速读取结果。（2）盐水试管法：所有血液样本离心处理，参照相应的国家标准进行血型鉴定。正定型处理：将2滴抗血清滴入5% 的红细胞悬液中，完全摇匀后高速离心处理15 s，设置转速3 000 r/min，处理完成后观察并记录结果。反定型处理：抽取2 滴血液样本血清，加入1 滴红细胞混悬液到血清中，完全摇匀后高速离心处理15 s，设置转速3 000 r/min，处理完成后观察并记录结果。设置阴性对照管，排除冷凝集。

交叉配血：（1）微柱凝胶检验技术：高速离心处理后分离血液样本的血浆、红细胞。血型鉴定卡静置一段时间达到室温，制备红细胞悬液（北京市斑珀斯技贸有限责任公司，血型分析用稀释液 DG Gel Sol，国械备20160416号），标记微柱孔主次。主侧孔试剂：供血者红细胞悬液（50 μL，1%）+血浆25 μL，均从供血者血液样本中提取；次测孔：受血者红细胞悬液（50 μL，1%）+供血者血浆25 μL，均从受血者血液样本中提取。高速离心处理后，读取并记录结果。（2）聚凝胺检验：A 管：受血者血浆2滴，供血者红细胞盐水悬液1 滴（3%）；B 管：供血者血浆2 滴+受血者红细胞盐水悬液1 滴（3%）。分别在受血者、供血者样本中加入0.8 mL 的低离子介质，充分混合均匀后放置2 min；分别在2 份混合液中加入1 滴凝聚胺，高速离心处理15 s，设置3 000 r/min 转速，倒出上清液后扣摇，可肉眼见到凝集状提示处理成功，在管底加1 滴重悬液，轻轻摇匀后，判定检测结果。判断标准：凝块在1 min 内消失，提示阴性，否则为阳性。

1.3 观察指标

（1）记录微柱凝胶法、盐水试管法的检测结果，包括正反定型不符合率和正反定型符合率。

（2）记录交叉配血成功率。

（3）统计两种血型鉴定结果的阳性检出率。

（4）计算不同血清鉴定方法的灵敏度、特异度、准确率、阳性预测值、阴性预测值。

1.4 统计学方法

数据录入采用Excel 表格，利用SPSS 24.0 统计学软件对数据进行处理。计量资料以（±s）表示，符合正态分布的计量资料采用t检验，不符合正态分布的计量资料，转化为正态分布后，采用t检验；计数资料以n（%）表示，组间比较采用χ2检验，多组或不符合两组检验标准的数据，采用校正χ2检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血型鉴定结果分析

两种方法鉴定血型结果相比，正反定型符合率差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 血型鉴定结果分析[例（%）]

2.2 交叉配血成功率

两种方法的交叉配血成功率相比，微柱凝胶法较高（P＜0.05）。见表2。

表2 交叉配血成功率[例（%）]

2.3 检验结果分析

盐水试管法、微柱凝胶法检验结果显示，微柱凝胶法的灵敏度、特异度、准确度均较高（P＜0.05）；微柱凝胶法阳性预测值和阴性预测值（100%、90.91%）均高于盐水试管法（81.63%、9.09%）（P＜0.05）。见表3 ～表4。

表3 检验结果分析[例（%）]

表4 灵敏度、特异度及准确度比较（%）

3 讨论

输血治疗是急救治疗中的常用方法，能够快速提升患者血容量，维持机体正常血液循环，避免机体血液流失过多，进而出现休克、昏迷、缺氧等症状。但输血需要保证供血者和受血者的血型相同，否则血型不符会导致输血排斥[4]。血型鉴定和交叉配血试验，是输血治疗前必须进行的准备工作，能够有效提升输血效率。

盐水试管法是传统的血型鉴定方法，也是最早最简单的鉴定方法，红细胞悬浮于盐水介质中，能够和相应抗体分子快速结合，形成凝集状，肉眼可见。1 min 内凝集状是否消散，是主要的鉴别标准。完全抗体用盐水试管法检验，具有较高的准确性，用于血型初次鉴定，不要求较高的仪器精准度，能够保证一定的检测准确度。但盐水试管法也有缺陷性，仪器无法检测大量血液标本，需要手工进行复杂操作，自动化程度低且无法保证检验结果的准确性，容易出现假凝集现象[5]。为降低假凝集发生率，必须保证试管清洗干净，时刻核查血清是否漏加，严格按照先后顺序加入血清和红细胞悬液，且整个检测过程需在光线充足环境下进行。盐水试管法离心处理必须保证转速和离心时间，检测后立即观察并记录结果，避免长时间放置导致检验结果准确性下降。但实际操作过程中，很难避免某些影响检测结果的因素，如加错试剂、顺序错误等，都会导致鉴定结果错误[6]。

本研究用60 例患者作为研究对象，分析微柱凝胶检验技术在血型鉴定和输血中的应用价值。研究结果显示，微柱凝胶法和盐水试管法鉴定血型结果相比，正反定型符合率差异不大；与聚凝胺法相比，微柱凝胶法的交叉配血成功率显著提高（P＜0.05）。提示微柱凝胶法能够准确检测血液中的不规则抗体，可有效提升交叉配血的成功率。患者对血型鉴定和交叉配血的结果都比较满意，微柱凝胶法在血型鉴定和交叉配血中都有应用，可见其在提高检验准确率中起到关键性作用。

微柱凝胶法目前在临床中的应用相当广泛，辅助完成血型鉴定、交叉配血试验的同时，快速协助医生进行输血治疗，临床疗效显著。微柱凝胶法可快速检出血液中的不规则抗体，有利于提升交叉配血的精确性[7]。高速离心处理过程中，凝胶颗粒滤网配合分子抗阻层析原理，迫使红细胞在胶表面或胶中大量聚集（这类红细胞能够与抗体发生反应），而在胶尖底位置的红细胞，不与抗体相互反应[8]。经过长期临床实践证实，微柱凝胶法使用的检测试剂量少，且操作简便，能够快速得到结果，检验人员容易判读检验结果。整个检验过程基本为仪器操作，大幅降低主观因素对检验结果的影响，反应结果图谱稳定，保存方便，因此可推荐在临床上应用[9]。此外，微柱凝胶检验还具有以下优势：结果清晰、稳定、易于判读，检测结果可拍照存盘以备查找；实验步骤标准化，自动化程度高；灵敏度高，特异性强，重复性好；结合条形码技术上机检测，可以减少标记，避免错误。

本研究还对盐水试管法、微柱凝胶法检验下的血型鉴定结果进行分析，结果显示，微柱凝胶法的灵敏度、特异度、准确度均较高（P＜0.05）。提示微柱凝胶法在血型鉴定中具有显著优势，可提高血型鉴定准确率，但该方法也存在局限性。本研究采用微柱凝胶检验技术，发现2 例患者的正反定型不符，导致正反定型不相符的可能原因为：离心不彻底，样本存在细菌污染，红细胞悬液新鲜程度低，都会导致检验结果失效，出现假阳性或假阴性的情况。为保证检验结果的准确性，有必要控制红细胞浓度和细胞悬液质量。对2 例正反定型不相符进一步分析发现，1 例患者存在凝血功能障碍，另1 例患者患有自身免疫性溶血性贫血。结合以往相关报道，说明血型鉴定中，自身疾病也会对微柱凝胶检验结果产生影响，因此检验前需严格查对患者有无疾病。

本研究交叉配血试验比较微柱凝胶检验和聚凝胺法的成功率，提示微柱凝胶法交叉配血符合率高，可见微柱凝胶检验技术在输血检验中具有明显优势。本研究聚凝胺检验中有8 例存在交叉配血不合情况，其中3 例交叉配血不合是由自身抗体导致的，反应为次侧（-），主侧（+），抗体筛选（+），直接抗球蛋白试验（direct antiglobulin test，DAT）（-）。分析可能原因是供血者和患者血清中的抗原抗体存在对立情况，患者血清抗体与提供血液的红细胞发生拮抗反应，经过复查ABO 血型（ABO blood group，ABO）及RH 血型（RH blood group，RH）（D）血型，纠正错误鉴定结果，并选择正确的血液输入治疗。3 例患者交叉配血不合适为自身存在免疫性疾病导致的，反应为次侧（+），主侧（-），DAT（+），自身（-），抗体筛选（-）。分析可能原因为供血者和患者血清中的抗原抗体拮抗，因此重新复查患者血型并排除亚型，输注主侧相合的血液。剩余2 例患者交叉配血不合的主要原因为长期使用抗生素，受青霉素、头孢菌素等药物的干扰，红细胞受膜状态改变，导致红细胞膜大量吸引蛋白，最终造成DAT 阳性[10]。这2 例患者有明确的药物使用史，无输血史和自身免疫性疾病史，同时血浆总蛋白正常，无纤维蛋白原增高和血球蛋白比例倒置，考虑为药物致敏。

与微柱凝胶检验技术相比，聚凝胺法的交叉配血不合格率较高，分析原因：聚凝胺法通过阴离子溶液、凝聚胺作用，会加快红细胞表面阳离子层电位剥离，加快红细胞、IgG 的结合，快速聚集红细胞，产生细胞凝集反应[11]。故配血结果可依据是否顺利散开进行判定，但在肝素、低浓度抗体等因素影响下，也会导致红细胞散开[12]。此外，聚凝胺检验技术受人为影响因素大，摇匀力度、解聚时间都会对检测结果产生影响，处理完成后需在1 min 内完成结果判读和记录，若凝集反应较弱，用力振摇会导致凝集状态消失，导致判定结果错误。因此临床血型鉴定和输血过程中，需应用微柱凝胶检验技术进行判别。为控制检验质量，需做好以下工作：做好患者的健康宣教，让患者清楚血型鉴定和交叉配血的重要性，从而配合相关工作；提高医护人员的综合能力，采血一次性成功，检验一次到位，避免二次采血给患者带来更大伤害；与患者做好沟通，及时解答患者疑惑，避免患者滋生焦虑、抑郁等不良情绪，提高患者检验工作的依从性。

综上所述，在临床患者血型鉴定与输血过程中，采用微柱凝胶检测技术能够有效提升交叉配血成功率，提高血型鉴定的敏感度、特异度和准确性，建议在临床上推广应用。