2型糖尿病牙周炎患者龈沟液瘦素水平与牙周临床指标的相关性研究

吴芷芸 姚玉胜

牙周病是人们日常生活中最为普遍的口腔健康疾患,其本质是某种感染所致的慢性疾病。2型糖尿病是最为常见的以葡萄糖值增高为特点的缓慢代谢型疾病。目前牙周病已被列为糖尿病的第六大临床并发症[1]。两种慢性疾病关系密切,互为因果,互相促进。临床上发现在控制糖尿病患者血糖后,牙周病的治疗效果更明显,或者治疗牙周病后,糖尿病症状有所改善。有研究显示,在糖尿病和牙周病的双向关联中或许是瘦素和炎症因子在起效应,但它们的相互作用机理还有待于深入探究[2]。龈沟液(GCF)为体液渗出液,其液体成分主要来源于血清成分,其浓度的变化在一定程度上能反应局部或者全身的炎症状态[3]。与血清相比,其具有操作简便、无创等特点。我国对龈沟液中瘦素水平与牙周炎关系的研究报道较少,对糖尿病牙周炎与瘦素水平的关系更是鲜有研究。本研究以2型糖尿病牙周炎患者为研究对象,探讨龈沟液中瘦素和炎症因子的水平及相关关系,可为糖尿病和牙周病的治疗开辟新途径。

1 资料与方法

1.1 研究对象

均来自2019 年1月～2021 年12 月在锦州医科大学附属第三医院体检中心、口腔科、内分泌科就诊且同意参加本研究的健康对照者(N,A组)、慢性牙周炎(CP,B组)、2型糖尿病伴牙周炎患者(C,DMCP组)各30 例(性别按入院时间的先后决定),年龄35～65 岁。各组在年龄性别比例上差异无显著性(P>0.05)。所有对象均为长期居住在辽宁地区的汉族人民。本研究经伦理委员会批准(批号:JYDSY-KXYJ-IEC-2021-004,JYDSY-KXYJ-IEC-2021-013)。

1.1.1 健康对照者纳入标准 无全身性系统性的疾病及其相关并发症,妇女未在妊娠期及哺乳期。

1.1.2 糖尿病患者纳入标准 WHO(1999)的诊断标准,中华医学会糖尿病学会推荐,被确诊为2型糖尿病至少超过6 个月,只采用口服降糖药物治疗,近期病情稳定,没有明显变化;无其他全身性系统性疾病及其并发症;3 个月前未使用抗生素治疗;6 个月前未接受过牙周基础治疗。妇女未妊娠及哺乳。

1.1.3 牙周病患者纳入标准 牙周炎按照2018 年国际牙周病分类,《牙周病学》诊断标准确诊为Ⅲ期、Ⅳ期牙周炎。PD≥6 mm;附着丧失≥5 mm;牙槽骨吸收延伸至根中1/3区及以上;余留牙齿≥15 颗。无全身性系统性疾病,无糖尿病;3 个月前未使用抗生素治疗;6 个月前未接受牙周基础治疗。妇女未在妊娠期及哺乳期。

1.1.4 排除标准 (1)侵袭性牙周炎;(2)风湿性关节炎;(3)吸烟,可被纳入,但要有记录;(4)肿瘤;(5)心脏病;(6)高血压;(7)恶性口腔疾病;(8)影响牙周炎的其他系统性疾病。

1.1.5 牙周检查 全部研究者要做口腔检查,检查者由同一位口腔专业医生完成。使用Williams牙周探针检查每颗牙齿的6 个位点(颊、舌侧的近中、中央、远中)的探诊深度(probing depth,PD)和牙周附着水平(attachment loss,AL),取平均值记录;根据SilnesSLöe 提出指数分级标准记录菌斑指数(plaque index,PLI),并记录探针出血(BOP),探针出血百分率=出血位点数/受检位点数×100%。

1.2 血清HbA1c检测

抽取受试者晨起空腹前臂肘静脉血5 mL,离心30 min(10 000 r/min,30 min),提取上清液500 μL,装于EP管中用于HbA1c的检测;受试者血清中HbA1c含量检测,用全自动糖化血红蛋白分析仪。

1.3 龈沟液的收集及其中LEP含量的测定

用棉花卷隔湿被检查的牙齿,用三用枪轻轻吹牙龈,将Whatman 3#滤纸条(2 mm× 20 mm)插入被检测牙齿的近中、远中、颊侧、舌(腭),其中一侧的牙周袋内,一般选择同一个部位收集龈沟液。避免检测部位被唾液血液污染。放置滤纸条30 s后取出,浸湿的面积用游标卡尺测量,并做好记录。将干燥的滤纸条减掉后,将湿润部分置于装有0.1%BS缓冲液的EP管离心,取上清液,并将其放置-80 ℃冰箱冷藏待检。为了确保LEP的生物学活性,每一批检测的样本的保存时间要 在2 个月内。检测时室温复融冷藏的龈沟液。采用双抗夹心ELISA法检测龈沟液中LEP含量,操作步骤严格按照ELISA试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司) 说明进行。

1.4 统计学分析

2 结 果

2.1 3 组牙周临床检测指标比较

B组与A组比较差别均有统计学意义(P<0.05);C组与A、B组比较差别均有统计学意义(P<0.05)(表1)。

表1 组牙周临床检测指标比较

2.2 血清中 HbA1c、龈沟液LEP水平比较

C组血清中HbA1c含量最高,其与A、B组比较差别均具有统计学意义(P<0.05);血清HbA1c含量A、B组相比较统计学无显著性差别(P>0.05)。C组龈沟液LEP含量最高,其次为B组,A组最低,各组间两两比较均有统计学意义(P<0.05)(表2)。

表2 3 组血清中 HbA1c、龈沟液LEP水平

2.3 龈沟液LEP与牙周临床指数相关性分析

对所有受试者LEP含量与牙周临床指数PD、AL、PLI、BOP进行相关性分析,结果分别呈正相关(表3,图1)。

图1 受试者组龈沟液LEP含量与牙周临床指数(PD、AL、BOP、PLI)的关系

表3 3 组LEP含量与PD、AL、PLI、BOP的相关性

3 讨 论

近一个多世纪以来,经过世界各国学者的努力,目前已认定牙周病是多原因病变,是人体口腔的常见病、多发病。其分为仅累及牙龈组织的牙龈病和波及深部牙周组织(牙周膜、牙槽骨、牙骨质)的牙周炎两大类病症。高血糖症为一种常见严重的慢性内分泌与代谢紊乱病,它引起的各种急、慢性病并发症已累及人体许多重要脏器,已经发展成为人类致残率、致死的比例已仅次于各种癌症疾病与各种心血管病的世界第三大病症,严重地影响了患者及家属的身心健康。瘦素(LEP)是一种由白色脂肪细胞合成分泌的非糖基化肽类激素,其含量的变化可能与糖尿病及其并发症慢性牙周炎的早期产生、发展过程和预后有关。龈沟液(GCF)是一种通过龈沟的上皮细胞与牙结合的上皮从周围牙齿结缔组织中渗入到龈沟内形成的液体[4]。龈沟液也并非完全是单纯的细胞渗出液,其中各种活性成份含量也和正常组液并不完全的一致,只是一种炎性细胞的渗出液。龈沟液所取处部位取样简便、无创、易操作,针对其中相关成分的研究十分可行。研究表明牙周炎患者可通过检测其龈沟液中的各类炎性因子来反映和监控其患牙周炎的严重程度[5]。

糖尿病患者的免疫细胞功能受损,会大大加重牙周组织破坏。国内外许多研究[6-8]发现,2型糖尿病合并牙周炎患者血清中瘦素水平升高,且牙周破坏越大,血清瘦素浓度越大。针对龈沟液中瘦素水平的相关研究相对较少。在本研究结果中,DMCP和CP组的龈沟液中瘦素水平明显高于健康对照组,且DMCP组龈沟液瘦素水平高于CP组,这与国内外很多学者的研究一致[9]。慢性牙周炎和肥胖型牙周炎患者比较其瘦素水平均高于对照组,且牙周基础治疗后其水平也降低[10]。慢性牙周炎与牙周健康患者龈沟液中瘦素水平比较有显著性差异[11]。但是林玉玲等[12]发现,T2MD合并牙周炎患者龈沟液中的瘦素水平降低。Selvarajan等[13]发现随着牙周组织炎症的加重,龈沟液中瘦素水平降低。段立荣等[4]发现,慢性牙周炎患者经基础治疗后龈沟液瘦素水平升高。针对这种研究在局部组织和循环系统水平出现的差异,可能原因是由于龈沟液中含有的瘦素主要是来自未滤过的牙周韧带组织内的毛细血管壁中的游离血清,以游离态的形式出现。牙周炎的患者龈沟液中的瘦素水平的下降很可能也是由于受慢性牙周炎的患者牙周压力的改变的影响,促进了瘦素细胞和在牙周间隙组织里存在的大量T淋巴细胞、上皮细胞等和周围分布的有瘦素接受器功能的正常组织结合,导致游离LEP含量减少;LEP引起宿主的感染和炎症反应与宿主产生的促炎性细胞因子和巨噬细胞的吞噬作用增强的反应有直接关系,同时还具有诱导炎症因子TNF-α和IL-6表达的作用,参与炎症反应[12,14-18]。在全部研究者中,龈沟液LEP含量与牙周临床指数PD、AL、PLI、BOP有相关性。。LEP水平升高,在牙周炎患者龈沟液中被检测出来,但其机制目前尚不完全明确,可能是因为研究者外周循环血液中炎症因子含量升高所引起。但是,龈沟液中LEP与牙周临床指标之间的相关性还需要进一步的研究证实,LEP可能为牙周炎的早期诊断及治疗提供客观指标[11]。

综上所述:2型糖尿病伴牙周炎患者,龈沟液中瘦素水平显著升高;龈沟液LEP水平与PD、AL、PLI、BOP指标呈正相关。结果表明在2型糖尿病与牙周炎双向关系中龈沟液瘦素水平可能起一定的作用,但其作用机制还有待进一步研究。