城市生活饮用水微生物检测方法研究

陈占霞，吴月云

（山东省潍坊市临朐县疾病预防控制中心，山东临朐 262600）

人们对饮用水的需求量在近十年一直呈现上升趋势，饮用水的供给质量要求也逐年提升，相关部门须做好居民饮用水的检测工作，保障居民生活用水安全。因此，建立城市生活饮用水微生物检测体系，严格规范饮用水的质量显得尤为重要，只有这样才能保障居民饮用水安全，提高居民饮用水品质。

1 城市生活饮用水微生物检测结果的影响因素

1.1 检测环境的影响

对城市生活饮用水的检测易受外部环境的影响，特别是对于环境因素较为敏感的微生物，在检测过程中可能会因环境变化而产生检测困难。相关的环境因素包括温度、湿度、空气中的含氧量以及微生物培养基中的营养成分构成等，均会对微生物检测结果有一定的影响。在环境因素影响加大的情况下，可能会引发水样中微生物的大量死亡，导致微生物检测技术无法正常、准确检测出各项指标含量。同时，微生物检测的操作环境也会影响检测结果，要保证检测操作在无菌条件下进行，防止外部环境菌群污染待检样本，给检测结果带来不确定性。

1.2 实验设备的影响

实验设备的精密度和灵活性也会给饮用水微生物检测结果带来影响，应定时对实验设备及仪器进行维护保养，并及时更换陈旧设备，保证设备的正常运转，避免因设备失灵导致微生物指标检测不准确。例如，微生物检测中常用到恒温箱，用于对水样样品的培养和保存，保持其内部温度稳定对检测结果有直接影响，若温度不符合标准就会导致样品中的菌落培养不到位，造成检测失误。相关人员应在样品放入之前对恒温箱内的温度进行严格细致的检测，确保每个角落的温度都在标准规定的范围之内，之后再放入样品进行培养，避免失误的发生。

1.3 人为因素的影响

水中微生物检测结果的准确性与实验操作过程中的人为因素也有很大关系，微生物检测内容复杂，细致烦琐，对每一步操作要求都较高，检测操作人员应严格按照检测标准，遵循技术规范进行操作，若操作不当或操作不符合标准规定，会造成检测结果不准确甚至误差较大。对培养后的待测样本应及时进行检测，确保检测的时效性，若检测人员未能及时对样本进行检测，则会因样本菌落变化甚至死亡而对检测结果产生不利影响。

2 城市生活饮用水微生物检测的主要内容

2.1 菌落总数

菌落总数能够表示水样的整体污染程度[1]。菌落总数是饮用水微生物检测的重要指标但不是唯一指标，因为培养环境的不同对于厌氧菌或微需氧菌等菌种的检测在菌落总数中无法体现，需根据菌种的特殊要求另行计算。

2.2 总大肠菌群

大肠菌群可以反映饮用水被人畜粪便污染的程度，可利用其与乳糖发酵生成酸液或气体的原理对其进行测定，在这一过程中需注意创设良好的反应条件。大肠菌群的测定标准为100 mL 水样中大肠菌群的最近似数，若数量超出饮用水微生物含量规定标准，则表明饮用水已被污染，存在安全隐患[2]。

2.3 耐热大肠菌群

耐热大肠菌群属大肠菌群的一种，又名粪大肠菌群，对其的测定是对总大肠菌群的补充，也是利用其与乳糖发酵并产生酸液或气体的原理进行测定，但需要注意的是对其的培养温度要比其他菌种温度更高，为44.0 ～44.5 ℃，培养时长为24 h[3]。由于大多数耐热大肠菌群直接源于人畜粪便，因此对其的检出更能说明饮用水源遭受了粪便污染，含有更大的肠道疾病致病可能性。测定耐热大肠菌群指标可对饮用水污染程度有更明晰的确认，在说明水源是否被人畜粪便污染方面有更明确的指示作用。

3 城市生活饮用水微生物检测水样采集规则及注意事项

3.1 采集原则

水样的采集需具有代表性，能明确代表水源区水质的整体情况，并在水样采集后确保水样不会受外部环境污染和其他任何因素的影响。因此，对饮用水水样的采集要有明确的规划，制定具体的实施细则，明确采样地点、采样数量和采样方法，并具体到每份样品的体积。对水样的保管和运输过程进行质量控制，保证样本质量。

3.2 采集容器

采样过程中采集容器的选择对样本质量也有很大影响，需结合具体地区的水样采集实际情况，选用符合标准且规格适宜的采样容器，尤其注意容器的材质、开口和体积等基本指标。特别关注容器内壁的构造，保证其对水样成分无吸收或吸附作用，还需特别注意采集容器的防震性能和适应性，以保证样本运输过程中的稳定性。选择大小合适、形状适宜、质量良好的采集容器能帮助采样人员快速准确地获取所需水样，顺利开展后续工作。

3.3 自来水水样采集原则

自来水水样采集需重点关注出厂水的采集和末梢水的采集两个方面。出厂水即经自来水厂处理后还未经城市居民使用的水，一般在自来水经处理后被送往城市各用水区域之前的一个点上进行采集。末梢水是经城市居民家中水龙头流出的水，对其的采集需进行时间控制，取经水龙头流出一定时间段之后的水作为样品，避免管道中的析出或附着物对检测结果产生影响。要对水龙头进行消毒处理，以免其中的微生物菌种落入待测水样，影响检测结果。

3.4 水源水水样采集原则

水源水是城市生活饮用水来源地的水，如某条河流、某个水库等。可通过采集汲水处的水对水源地水样进行采集。对于河流、湖泊等表层水源地的水，可直接用水桶等容器采集；对于水库等深度水源地的水可采用直立式取水器进行水样采集；对于泉水的水样采集分两种形式，自喷泉水可直接在泉水涌出口采集水样，非自喷泉水可使用与井水水样采集相同的方式，即采用抽水管等协助机制采集。

4 城市生活饮用水微生物检测中各项指标的测定方式

4.1 菌落总数测定方式

先将水样混合均匀，排除静止条件下微生物分布不均的情况后，再进行水样中菌落总数的测定。移取已混匀的待测样品至培养皿中，移取仪器和培养皿均需进行严格消毒和无菌处理。之后将准备好的培养基按照一定规格的量倒入培养皿中，使培养皿中的待测水样与培养基充分混合，可采用旋摇培养皿的方式帮助完成混合，切勿使用搅拌方式。最后，按照菌群的规定培养方式，对培养皿中水样和培养基混合物进行一定时长的培养，进行菌落总数的测定。

4.2 总大肠菌群测定方式

多管发酵法是进行总大肠菌群测定的主要方法。先进行水样和乳糖蛋白培养液的初步发酵，将二者充分混合并置入规定温度下培养一定时长，观察酸液或气体的产生情况。在有酸液或气体产生的情况下使用伊红亚甲蓝培养基对样品进行继续培养，以便观测总大肠菌群的菌落特征，初步判断菌落种类，再使用革兰氏染色和显微镜对观察结果进行进一步的确定。最后进行验证，重复以上步骤对检测结果进行再次验证，保证检出菌群确为大肠菌群。

4.3 耐热大肠菌群测定方式

可使用与测定总大肠菌群相似的测定方式进行耐热大肠菌群的测定，不同之处在于在初步发酵后，需进行耐热培养，即在检出大肠菌群的水样管中加入EC肉汤，在44.5 ℃培养24 h，之后观察产酸产气情况。最后进行产酸产气样品的平板培养以验证检测结果，将样品接种于伊红美蓝琼脂平板上培养24 h，培养温度为（36±1）℃[4]。培养后若有典型菌落检出，则根据MPN 表中菌落特征的具体信息，出具检测报告。

4.4 大肠埃希氏菌测定方式

采用EC-MUG 培养基对总大肠菌群检测中初步发酵后产酸产气的样品进行培养，可测定大肠埃希氏菌的存在情况。先将产酸产气样品倒入装有ECMUG 培养液的试管中，采用恒温箱或恒温浴在与培养耐热大肠杆菌相同的培养条件下进行培养，采用恒温浴模式时需将培养管中的液体完全淹没在水中。培养结束后借助紫外灯查看大肠埃希氏菌的生成情况。

5 城市生活饮用水微生物检测结果分析

经上述测定方式对城市饮用水中微生物菌落种类的数量进行检测后，采用统计学方法推算出水样中菌群平均数量，再根据国家对饮用水中微生物含量的相关标准，对检测结果进行分析，形成饮用水水质检测报告，对于检测结果显示为不合格的情况，需在报告中指明具体原因，标明具体污染物及污染等级[5]。规范检测报告中检测数据的录入模式，对于菌落数为1 ～100 CFU 时，可直接录入真实数据，大于100 CFU 时，取两位有效数字。若所测水样中不含总大肠菌群、耐热大肠菌群以及大肠埃希氏菌，菌落总数在100 CFU/100 mL 以内，则视为水质合格。

6 结语

微生物检测技术在城市生活饮用水水质检测中有重要作用，能为饮用水中是否含有致病菌提供数据参考，为城市居民的健康饮水提供技术保证。检测人员应规范水样采集操作，严格按照不同菌落的测定方式开展微生物检测工作，提升城市生活饮用水微生物检测工作质量和检出效果，促进提升城市生活饮用水水质，保障城市居民用水安全及身体健康。