甲状腺细针穿刺液基细胞学Ⅲ类患者CK19、Galectin-3、HBME-1、TPO抗体检测及其临床意义

张晓惠，曹晓云，文钰玲

西安宝石花长庆医院病理科1、妇产科2，陕西 西安 710201

甲状腺结节属于诸多原因引发的临床常见疾病，发生率为4%～7%。随着影像学技术的推广应用与体检的普及，甲状腺结节检出率达到20%～76%，其中恶性结节占比5%～15%[1]。相关文献显示，因甲状腺恶性肿瘤致死的人群在所有肿瘤死亡率中占比0.4%[2]。按照甲状腺细胞病理学Bethesda 报告系统分类，液基细胞学Ⅲ类患者存在甲状腺乳头状癌。相关文献也显示，经细胞学确诊为Ⅲ类的病患在综合评估之后有超过1/3被确诊为甲状腺乳头状癌。此类病患的处理方式大部分是细针重复穿刺及随访，这可能耽误病情，进而使肿瘤转移[3-4]。相比于传统涂片，液基细胞学制片核结构清晰、背景干净。虽然细胞学诊断进步较大，然而细胞学对Ⅲ类患者的确诊仍然是细胞诊断中的重难点，因此，如何正确筛查出Ⅲ类患者中的恶性结节就非常重要[5]。近几年，相关文献显示，细胞角蛋白19 (CK19)、半乳糖凝素-3 (Galectin-3)、间皮细胞(HBME-1)、甲状腺过氧化物酶(TPO)等标志物能够在甲状腺良性病变与甲状腺乳头状癌的鉴别诊断中发挥重要作用[6-8]。本研究主要探讨甲状腺细针穿刺液基细胞学Ⅲ类患者CK19、Galectin-3、HBME-1、TPO抗体水平及其临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2019 年1 月至2020年12 月西安宝石花长庆医院诊治的100 例甲状腺细针穿刺液基细胞学Ⅲ类患者的临床资料。纳入标准：(1)所有患者均经手术取得病理诊断结果；(2)选择液基细胞保存液对标本进行处置；(3)临床资料完整。排除标准：(1)伴有其他恶性肿瘤；(2)免疫调节性药物长时间使用；(3)合并结缔组织疾病；(4)合并风湿性疾病。依据病理诊断结果将患者分为良性组65 例和甲状腺乳头状癌组35 例。良性组患者中男性21 例，女性44 例；年龄25～65 岁，平均(47.02±4.63)岁。甲状腺乳头状癌组患者中男性15例，女性20例；年龄28～67岁，平均(47.50±4.46)岁。两组患者的性别和年龄比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。本研究经医院医学伦理委员会批准。

1.2 方法 (1)CK19、Galectin-3、HBME-1、TPO检测：把甲状腺穿刺液基细胞保存液置于试管中行梯度离心两次，第一次置入5 mL梯度离心液，1 080 r/min保持10 min，将上清液吸去后，置入缓冲液5 mL，第二次2 000 r/min保持10 min，将上清液吸去后，置入缓冲液1 mL，同时于震荡器上混合震荡30 s，放置混合液于全自动沉降式液基薄层细胞制片机，用制片机完成沉降、转移、巴氏染色、贴附等步骤，然后再制成细胞薄片(厚1.3 cm)。之后进行免疫组化检测(EnVision二步法)。(2)判定标准：CK19、Galectin-3、HBME-1、TPO 阳性部位分别位于细胞质、细胞质/细胞核、细胞质、细胞质。按照染色强度及其得分对结果进行判读染色强度：①0 分为无着色；②1 分为淡黄色；③2 分为棕黄色；④3 分为棕褐色；染色强度得分：①0 分为阴性；②1 分为弱阳性；③2 分为中度阳性；④3 分为强阳性。两者得分的乘积≥1分就为阳性。

1.3 统计学方法 应用SPSS23.0 统计软件进行数据分析。计量资料以均数±标准差(x-±s)表示，计数资料比较采用χ2检验。以P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者的CK19、Galectin-3、HBME-1、TPO 抗体阳性率比较 甲状腺乳头状癌组患者的CK19、Galectin-3、HBME-1 阳性率明显高于良性组，TPO 阳性率明显低于良性组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表1、图1～图3。

图1 Galectin-3阳性(10×/0.25)Figure 1 Galectin-3 positive(10×/0.25)

图2 HBME-1阳性(10×/0.25)Figure 2 HBME-1 positive(10×/0.25)

图3 CK19阳性(10×/0.25)Figure 3 CK19 positive(10×/0.25)

表1 两组患者的CK19、Galectin-3、HBME-1、TPO抗体阳性率比较[例(%)]Table 1 Comparison of positive rates of CK19,Galectin-3,HBME-1,and TPO antibodies between the two groups[n(%)]

2.2 CK19、Galectin-3、HBME-1、TPO 对甲状腺癌的诊断效能 CK19、Galectin-3、HBME-1、TPO 及四者联合诊断甲状腺乳头状癌的准确性、敏感性、特异性、阴性预测值、阳性预测值比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)，见表2。

表2 CK19、Galectin-3、HBME-1、TPO对甲状腺乳头状癌的诊断效能比较(%)Table 2 Comparison on the diagnostic efficacy of CK19,Galectin-3,HBME-1,and TPO in thyroid papillary carcinoma(%)

3 讨论

伴随甲状腺癌筛查工作的普及和影像技术的快速发展，甲状腺乳头状癌的确诊率不断增加。加之甲状腺解剖结构十分复杂，邻近气管颈部与喉下部，其附近神经、血管丰富，且有甲状旁腺(内分泌器官)，若出现恶性肿瘤极易引发严重后果。虽然大部分甲状腺乳头状癌有良好的预后，然而也存在甲状腺腺外侵犯的风险，发生概率介于5%～34%[9]。所以及时诊断及干预更有利于预后。近几年，液基细胞制片在甲状腺穿刺涂片内被广泛应用，相较于传统涂片，能够为细胞学诊断提供实质性的帮助。然而只是依据细胞学涂片进行诊断，存在一定局限性，若甲状腺结节合并钙化、纤维化或囊性变就会使穿刺标本内有诊断意义的细胞减少，使细胞不具备典型性，进而干扰诊断，且部分良性病变患者也会出现甲状腺乳头状癌病患的核特征，在细胞形态方面，难以辨别腺瘤性结节与癌[10]。

按照Bethesda报告系统(甲状腺细胞病理学)分类显示，V与Ⅵ类患者存在手术指征，可以及时干预，但是Ⅲ类患者为意义不明确非典型病变，其属于排除性诊断，且Ⅲ类患者的预期恶性率高于目前已知的病变率，针对这一类型的患者，医嘱多为随访且细针重复穿刺，这使临床工作被动，同时随访期间的多次检查会增加患者的经济支出及时间耗费，同时加重其心理压力，进而加剧病情。相关文献显示，细胞学确定为Ⅲ类的患者由于非典型性的核特征使漏诊率提升，此类型恶性结节往往隐藏于不典型病变内，这使如何准确筛查Ⅲ类患者中的隐藏恶性结节显得十分重要[11]。

CK19为低分子量细胞角蛋白之一，主要表达于单层上皮内，近年来，常被应用于甲状腺乳头状癌诊断中。本研究显示，CKl9在甲状腺乳头状癌诊断中敏感性最高，同冯凌飞等[12]的研究结果一致，CK19在甲状腺乳头状癌患者中的阳性率为97.14%，同时都属于弥漫强阳性，在良性病变患者中的阳性率为6.15%，且均为局部阳性，其阴性预测值为98.49%，同样为最高，所以相关文献认为CK19阴性基本能排除甲状腺乳头状癌[13]。

Galectin-3属于同β-半乳糖苷联合的一种内源性凝集素，在肿瘤组织中可广泛表达，同时参与细胞黏附、凋亡、生长与血管的形成，在肿瘤的发展中发挥重要作用。Galectin-3 在甲状腺乳头状癌内高表达，但是在良性病变内为弱阳性或阴性。所以，能够辅助鉴别、诊断甲状腺乳头状癌。本研究表明，Galectin-3在甲状腺乳头状癌内多为阳性，在良性病变内为局部阳性或阴性，同温琥玲等[14]的研究结果一致。Galectin-3在诊断甲状腺乳头状癌中的敏感性为91.43%。相关文献也显示，Galectin-3 同CK19 一样，为甲状腺乳头状癌诊断较为敏感的一种标记物[15]。

HBME-1属于单克隆抗体，为间皮细胞微绒毛表面极具特异性的一种标记物，在肿瘤的生长、形成、转移方面作用显著[16]。之前，被广泛应用于诊断间皮来源肿瘤，然而，近几年，常被用来诊断甲状腺乳头状癌。本研究显示，HBME-1在甲状腺乳头状癌患者中阳性率较高，在良性病变患者中为局部表达或不表达，其对甲状腺乳头状癌的敏感性、特异性分别为85.71%、92.31%。

TPO为糖基化血红素蛋白之一，主要表达在甲状腺滤泡细胞游离面，在合成甲状腺激素的通路中发挥重要作用，且可催化T4、T3 的合成[17]。本研究显示，TPO 于正常甲状腺组织内高表达，呈中等或强阳性，在甲状腺乳头状癌内呈弱阳性或阴性。相关文献显示，TPO 阴性表达为诊断甲状腺乳头状癌的可靠依据[18]。本研究中，TPO 在诊断甲状腺癌的敏感性及阴性预测值分别为94.29%、97.01%，均较高。

综上所述，甲状腺细针穿刺液基细胞学Ⅲ类患者CK19、Galectin-3、HBME-1、TPO 抗体检测可显著提升细胞学诊断效能，有较大的临床应用价值。