顶空GC法测定盐酸马普替林中6种残留溶剂

王瑞芬，康鹏伟

（1. 濮阳市食品药品检验检测中心，河南 濮阳 457000；2. 濮阳市食品监督所，河南 濮阳 457000）

盐酸马普替林（maprotiline hydrochloride）, 化学名N-甲基-9,10-桥亚乙基蒽-9（10H）-丙胺盐酸盐，其化学结构式见图1，为白色或类白色的结晶性粉末，无臭，味苦，微溶于水，易溶于甲醇或三氯甲烷，不溶于正庚烷，熔点230～232 ℃，属四环类抗抑郁新药，该药首先由Ciba-Geigy公司开发上市，适用于内因性、反应性、更年期等各种类型的抑郁性神经症，同时兼有抗焦虑、镇静、抗胆碱作用。由于其作用快，副作用小，疗效显著而作为广谱抗抑郁药。

图1 盐酸马普替林化学结构式

盐酸马普替林传统合成工艺[1-2]主要以蒽酮为起始原料，通过氰乙基化、水解、选择性还原、加成环合、酰胺化、还原等反应得到。董俊峰等[3]对传统合成工艺进行改良，直接以蒽为原料，经甲酰化反应、与乙烯基乙醚和甲酸三甲酯加成重排反应、“一锅煮”工艺（先与乙烯加成环合，然后与甲胺溶液生产亚胺，再经过氢化还原得到马普替林游离碱）、盐酸酸化最终得到盐酸马普替林产品。在上述生产合成过程中，可能会用到甲醇、乙醇、乙醚、异丙醇、叔丁醇和四氢呋喃等有机溶剂。根据人用药品注册技术要求国际协调理事会（ICH）指导原则和《中国药典》2020年版四部通则0861“残留溶剂测定法”中的有关规定，甲醇、四氢呋喃属于第二类应该限制使用的溶剂；乙醇、乙醚、异丙醇、叔丁醇是第三类药品GMP或其他质量要求限制使用的溶剂，所以在原料药的生产合成过程中需要严格控制原料药中这些有机溶剂的残留量在安全范围内，以确保药品的用药安全。目前，国内有关盐酸马普替林原料药中残留有机溶剂的研究文献有报道。本文参考相关文献[4-10]，采用顶空气相色谱法同时测定盐酸马普替林原料药中6种有机溶剂的残留量，以期为该原料药的质量控制提供参考依据。

1 仪器与试药

Agilent 7890B 型气相色谱仪，7697A顶空进样器、氢火焰离子化检测器（美国 Agilent 公司），METTLER TOLEDO XS205DU 电子分析天平（梅特勒-托利多）。

甲醇、乙醇、乙醚、叔丁醇和四氢呋喃（国药集团化学试剂公司，均为分析纯，含量≥99.5 %），异丙醇（上海麦克林生化，含量≥99.5 %，分析纯），二甲基亚砜（德国默克公司，含量≥99.9 %，色谱纯）。盐酸马普原料药（购自上海某公司，批号：RH243317，RH243319，RH243322）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Agilent DB-624毛细管柱（30 m×0.53 mm，3.0 μm)；进样口温度：220 ℃；氢火焰离子化检测器，检测器温度：260 ℃；升温程序：初始温度40 ℃（保持10 min）， 以10 ℃/min速率升温至160 ℃（保持3 min）；分流比：5:1；载气为高纯氮气，流速：2.5 ml/min；顶空进样量：1.0 ml，平衡温度：80 ℃，平衡时间：30 min。

2.2 溶液制备

精密称取甲醇191.2 mg、乙醇250.3 mg、乙醚250.2 mg、异丙醇252.5 mg、叔丁醇250.6 mg和四氢呋喃43.2 mg，置入50 ml量瓶，加适量二甲基亚砜溶剂溶解，稀释至刻度，摇匀，得混合对照品储备液。精密移取上述混合对照品储备液2 ml置入20 ml量瓶，加二甲基亚砜溶剂稀释并定容至刻度，摇匀，得混合对照品溶液，精密移取5 ml置入20 ml顶空瓶，压盖密封。取盐酸马普替林原料药约1.0 g，精密称定，置入10 ml量瓶，加适量二甲基亚砜溶剂，振摇使溶解，定容至刻度，摇匀，得供试品溶液，精密移取5 ml置入20 ml顶空瓶，压盖密封。

2.3 线性关系、检出限与定量限考察

精密吸取2.2项下混合对照品储备液0.1，0.2，0.5，1.0，2.0 ml，分别置10 ml量瓶中，加二甲基亚砜溶剂稀释并定容至刻度，摇匀，得系列浓度混合对照品溶液。取上述溶液适量，按2.1项下色谱条件分析测定，记录峰面积，以待测有机溶剂的质量浓度（μg/ml）X为横坐标，峰面积Y为纵坐标进行线性回归，得线性回归方程（结果见表1）。取混合对照品溶液逐级稀释后，顶空进样分析测定，记录不同浓度下色谱图。以信噪比（S/N）为3时的相应待测有机溶剂的浓度确定检测限（LOD），信噪比（S/N）为10时相应待测有机溶剂的浓度确定定量限（LOQ）（结果见表1）。

表1 6种成分的线性关系、检出限与定量限结果

2.4 系统适用性试验

分别取2.2项下混合对照品溶液、供试品溶液和二甲基亚砜溶剂各5 ml，置入20 ml顶空瓶，压盖密封，按1.1项下色谱条件分析测定，记录色谱图。结果表明，在该色谱条件下，各待测成分色谱峰均能达到基线分离，分离度均大于1.5，理论塔板数以乙醇峰计算大于30 000，二甲基亚砜溶剂对测定无干扰，溶剂峰和各待测成分色谱峰之间分离度良好（见图2）。

图2 混合对照品（A），供试品（B），空白溶剂（C）的气相色谱图

2.5 精密度试验

取5.0 ml混合对照品溶液置入20 ml顶空瓶，压盖密封，平行配制5份，按2.1项下色谱条件下进样测定，记录峰面积，测得甲醇、乙醇、乙醚、异丙醇、叔丁醇和四氢呋喃峰面积的RSD分别为1.19 %，1.26 %，1.12 %，1.80 %，0.46 %，0.15 %（n=5），表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验与中间精密度试验

取盐酸马普替林原料药（批号：RH243317），按2.2项下方法制备5份供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，甲醇、乙醇、叔丁醇和四氢呋喃未检出，乙醚、异丙醇残留量分别为0.019 %，0.23 %，RSD分别为2.04 %，1.57 %（n=5），表明该方法的重复性良好。

另取盐酸马普替林原料药（批号：RH243317），由2名分析人员在不同时间采用不同仪器，按2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件测定各溶剂残留量，分别平行测定5份，计算10份供试品溶液残留量的平均值。甲醇、乙醇、叔丁醇和四氢呋喃未检出，乙醚、异丙醇残留量分别为0.02 %，0.23 %，RSD分别为2.25 %，1.34 %（n=10），表明该方法的中间精密度良好。

2.7 回收率试验

取盐酸马普替林原料药（批号：RH243317）约0.5 g，共9份，置入20 ml顶空瓶，分别加入5 ml浓度为80 %，100 %，120 % 的混合标准溶液，各制备3份平行样。按2.1项下色谱条件进样测定，记录峰面积，计算加样回收率。结果甲醇、乙醇、乙醚、异丙醇、叔丁醇和四氢呋喃的平均加样回收率分别为97.96 %，98.93 %，100.13 %，98.20 %，97.45 %，99.86 %，RSD分别为2.08 %，2.25 %，1.56 %，2.38 %，1.87 %，1.92 %。表明该方法用于检测盐酸马普替林原料药中的残留溶剂准确度良好。

2.8 稳定性试验

取混合对照品溶液5 ml置入20 ml顶空瓶，制备5份平行样，分别于室温下放置0，2，4，8，12 h后，按2.1项下色谱条件依次分析测定，测得甲醇、乙醇、乙醚、异丙醇、叔丁醇和四氢呋喃峰面积的RSD分别为1.96 %，2.04 %，2.57 %，1.75 %，1.36 %，1.81 %（n=5），结果表明，溶液在室温下放置12 h内稳定性良好。

2.9 耐用性试验

取2.2项下混合对照品溶液，按2.1项下色谱条件分析测定，分别调整载气流速、柱温、进样口与检测器温度，程序升温的初始温度与升温速率，选用不同品牌的色谱柱，依法测定，考察各待测成分色谱峰的分离度。结果表明，测定条件的微小变动能满足系统适用性试验的要求，该方法稳定可靠，耐用性良好。

2.10 样品中残留有机溶剂的测定

取3批盐酸马普替林原料药（批号：RH243317，RH243319，RH243322），按2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件分析测定，记录峰面积，计算有机溶剂残留量，结果见表2。

表2 盐酸马普替林原料药残留溶剂测定结果

3 讨论

由于盐酸马普替林微溶于水，易溶于二甲基亚砜等有机溶剂，且在分析过程中，二甲基亚砜色谱峰与各待测溶剂色谱峰之间可实现完全分离，溶剂峰对原料药分析测定无干扰，本文选择二甲基亚砜为分析检测溶剂。

本文检测的6种有机溶剂中，甲醇、四氢呋喃为药典规定的第二类限制使用溶剂，限度分别为0.3 %，0.072 %；乙醇、乙醚、异丙醇和叔丁醇为药品GMP或其他质量要求限制使用溶剂，限度为0.5 %。本试验测得的3批原料药中乙醚、异丙醇的残留量均低于药典规定的限度要求，其余有机溶剂未检出，原料药残留溶剂检测项目结果符合中国药典2020年版四部通则“0861 残留溶剂测定法”标准规定。本文建立了一种气相色谱测定盐酸马普替林原料药中残留溶剂的新方法，具有高效、快捷、准确、便捷等优点，可满足现行药典对于残留溶剂项目检测的技术要求，同时为该原料药和相应制剂生产质量控制提供技术参考。