不同分子分型乳腺癌血清CYFRA21-1、HCY和CA15-3的表达差异及与术后复发、转移的关系*

张 维,龙松权,唐瑞骏

广西壮族自治区桂林市中医医院:1.检验科;2.病理科,广西桂林 541002

乳腺癌是全球最常见的癌症之一,GLOBOCAN 2020年最新统计数据显示,全球范围内约有230万乳腺癌新发病例,占新发癌症病例的11.7%,乳腺癌已经超过肺癌,成为全球发病率最高的癌症[1]。乳腺癌是一种具有高度异质性的肿瘤,根据激素受体表达情况的不同主要分为Luminal A型、Luminal B型、Her-2过表达型和Basal-like型4种分子亚型。有研究发现,不同分子分型乳腺癌患者的临床病理特征及预后存在差异[2]。目前,临床上乳腺癌治疗选择和预后评估主要基于不同的分子亚型,也推荐应用肿瘤标志物对乳腺癌的预后进行判断。然而,不同分子分型的乳腺癌患者血清肿瘤标志物的表达水平是否存在差异仍不清楚。因此,本研究探讨细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、同型半胱氨酸(HCY)和糖类抗原15-3(CA15-3)在不同分子亚型乳腺癌患者中的表达情况以及与术后复发、转移的关系。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2020年3月至2021年10月就诊于本院的186例乳腺癌患者为研究对象,均为女性。186例患者年龄30～68岁,平均(50.98±8.64)岁;浸润性导管癌149例,导管内原位癌31例,浸润性小叶癌6例;TNM分期Ⅰ期31例,Ⅱ期77例,Ⅲ期73例,Ⅳ期5例。纳入标准:(1)患者均接受乳腺癌根治术或改良根治术,经病理组织学检查确诊为乳腺癌;(2)术前未发生转移,无其他恶性肿瘤病史;(3)所有患者均定期在本院复查B超、CT、MRI和乳腺X线片检查等术后需查项目,复发、转移患者均有明确的影像学诊断与病理诊断依据,且有完整的病历资料。排除标准:(1)非原发性乳腺癌;(2)合并其他恶性肿瘤;(3)伴有其他严重内科疾病。本研究经本院医学伦理委员会审核批准。所有患者均知情同意。

1.2仪器与试剂 Roche Cobas E602全自动电化学发光分析仪及配套CYFRA21-1检测试剂盒(德国Roche公司);日立7600全自动生化分析仪及HCY检测试剂盒(北京九强生物技术股份有限公司);郑州安图Autolumo 2000 Plus全自动化学发光分析仪及配套CA15-3检测试剂盒;HE染色液(珠海贝索生物科技有限公司);免疫组化试剂盒(福州迈新生物技术开发有限公司)。

1.3方法

1.3.1血液标本采集检测 所有研究对象均清晨空腹抽取静脉血约5 mL置于无抗凝剂的离心管中,室温静置30 min后,4 000 r/min离心5 min,2 h内完成检测;如不能及时检测则分离血清置于-80 ℃冰箱保存备用。采用Roche Cobas E602全自动电化学发光分析仪检测CYFRA21-1,采用日立7600全自动生化分析仪检测HCY水平,采用郑州安图Autolumo 2000 Plus全自动化学发光分析仪检测CA15-3水平,具体操作严格按照操作规程进行。正常参考值范围:CYFRA21-1<3.3 ng/mL;HCY<15.00 μmol/L;CA15-3<25.0 U/mL。

1.3.2免疫组化染色 患者术中取组织标本,标本经中性甲醛固定,36 h内取材,石蜡包埋标本并制成2～4 μm厚的切片待用。组织学分级采用HE染色法,取组织石蜡切片常规HE染色。按照免疫组化试剂盒说明书进行操作,中性树胶封固,ER、PR阳性物质位于细胞核内,Her-2阳性物质位于细胞膜呈棕黄色颗粒,判定标准:ER、PR<1%为阴性,≥1%为阳性;Her-2-～+为阴性,+++为阳性,++则进行荧光原位杂交法检测验证;Ki-67≥20%为高表达,<20%为低表达。

1.3.3分子分型及随访 参照《中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范:2021年版》[3],将确立的研究对象术后病理标本作免疫组化染色,根据激素受体表达情况分型。根据《中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范:2021年版》[3]建议,所有乳腺癌患者均进行定期随访,术后或结束化疗后2年内每3个月随访一次,随访至2022年8月。

2 结 果

2.1不同分子分型患者检测指标比较 根据激素受体表达情况,186例患者中Luminal A型65例(34.95%),Luminal B型70例(37.63%),Her-2过表达型26例(13.98%),Basal-like型25例(13.44%)。不同分子分型乳腺癌患者CYFRA21-1和HCY水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),而CA15-3水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中Her-2过表达型患者CA15-3水平明显高于其他3种分型,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 不同分子分型乳腺癌患者各检测指标水平比较或M(P25,P75)]

2.2不同分子分型乳腺癌患者的临床病理参数及复发、转移情况 所有患者术后均进行化疗,确定无复发、转移145例,有复发、转移41例。不同分子分型患者间年龄、肿瘤最大径、有无淋巴结转移及Ki-67表达分布比较,差异均无统计学意义(P>0.05),见表2。4种分子分型的复发、转移率比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中Her-2过表达型复发、转移率最高(38.46%),Luminal A型与Her-2过表达型的复发、转移率差异有统计学意义(P<0.05),见表3。

表2 不同分子分型乳腺癌患者的临床病理参数(n)

表3 各分子分型患者复发、转移率比较

2.3术后复发、转移影响因素分析 随访期间,186例乳腺癌患者中无病生存率为77.96%。按是否复发、转移分组比较各项指标,结果显示,复发、转移组更容易发生淋巴结转移、CA15-3水平更高,差异均有统计学意义(P<0.05),见表4。以预后状态(复发、转移=1,未复发、转移=0)为因变量,以患者年龄(≥50岁=1,<50岁=0)、肿瘤最大径(≥2.0 cm=1,<2.0 cm=0)、淋巴结转移(是=1,否=0)、Ki-67表达(≥20%=1,<20%=0)、CYFRA21-1(≥3.3 ng/mL=1,<3.3 ng/mL=0)、CA15-3(≥25.0 U/mL=1,<25.0 U/mL=0)为协变量,进行Cox回归分析。结果显示,淋巴结转移和CA15-3≥25.0 U/mL是乳腺癌患者术后复发、转移的独立危险因素(P<0.05),见表5。

表4 复发、转移组和未复发、转移组各项指标比较或n或M(P25,P75)]

表5 乳腺癌患者复发、转移的Cox回归分析

3 讨 论

基于激素受体表达情况的不同,乳腺癌存在不同的分子亚型,不同亚型之间有不同的临床表现和病理特征[4-5]。乳腺癌分子分型的提出使乳腺癌的个体化治疗实现了由宏观到微观的转变,使乳腺癌治疗进入精准治疗时代[6]。本研究对纳入的186例乳腺癌患者进行分子分型,结果显示管腔型乳腺癌比例高于其他亚型乳腺癌,其中Luminal A型65例(34.95%)、Luminal B型70例(37.63%)、Her-2过表达型26例(13.98%)、Basal-like型25例(13.44%),与刘钟芬等[7]报道的结果相接近。CA15-3是乳腺上皮细胞分泌的一种糖蛋白抗原,是目前公认的对乳腺癌有较高特异度的肿瘤标志物[8]。本研究对乳腺癌4种分子分型间肿瘤标志物的分析结果显示,Her-2过表达型乳腺癌患者CA15-3水平明显高于其他分型,提示临床乳腺癌患者血清高水平CA15-3可能为Her-2过表达型的重要标志物,术前检测CA15-3有助于预测乳腺癌的分子分型和预后,为后期精准个体化治疗提供依据。

本研究中对乳腺癌患者的临床病理参数分析显示,年龄、肿瘤最大径、淋巴结转移及Ki-67表达在乳腺癌不同分子分型间的分布差异无统计学意义(P>0.05),与成祥君等[9]报道的结果一致。然而,亦有学者研究报道不同分子分型乳腺癌患者绝经状态、肿瘤最大径及组织学分级比较,差异有统计学意义(P<0.05)[10]。分析其原因可能是本次研究为单中心回顾性分析,入组病例数较少,混杂因素较多,从而造成各研究之间存在差异,需要后期联合多中心、大样本量进一步研究。4种分子分型的复发、转移率比较中,Her-2过表达型复发、转移率最高(38.46%),表明Her-2阳性乳腺癌患者侵袭性较高,更容易发生淋巴结转移,预后较差。因此,临床上对于Her-2过表达型乳腺癌患者应更加重视,加强随访、提高复查频率。通过多因素Cox回归分析发现,乳腺癌患者预后与淋巴结转移情况及血清CA15-3水平密切相关。乳腺癌患者血清CA15-3水平越高,越容易发生复发、转移,预后越差[11]。

总之,不同分子分型的乳腺癌具有异质性,患者血清肿瘤标志物表达不同;分子分型结合血清肿瘤标志物以及相关危险因素分析可为乳腺癌精准个体化治疗提供临床依据。