应用双层式虫卵过滤装置进行蛔虫卵检测的效果

杜艳红，李佳

九江市浔阳区疾病预防控制中心 （江西九江 332000）

寄生虫寄生于宿主或附着于体外，通过对被寄生动物造成损害的方式维持生存、发育或繁殖所需的营养，可能由此导致疾病传播或诱发各种并发症[1-2]。随着检测技术相关理论和方法的不断完善，以及实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction，qRT-PCR）检测、环介导等温扩增、酶联免疫检测等技术的创新应用，提升了寄生虫虫卵检测的灵敏度和特异度。但受限于仪器设备和操作要求，其不适于大范围推广应用，尤其经济相对落后的中西部地区，各级疾病预防控制中心依然应用传统的虫卵检测方法[3]。蛔虫是人体常见且呈世界性分布的寄生虫，具有感染性强、症状不典型、感染后表现隐匿等特征。其在卫生条件相对较差的地区更为流行，同时因主要寄生于小肠部位，可通过检测粪便样品中的虫卵而确诊。虽然检测流程和技术较为简单，但依然需要配合较为完善的样品前期处理，才能更好地提升检测效果[4]。面对较大样本量的处理和检测任务，传统操作较为烦琐。基于传统检测方式的不足，本研究特对虫卵过滤装置进行优化设计，使初步去除粪便杂质、收集虫卵过滤两步骤同时进行，增强使用的便捷性和适用范围。为进一步明确双层式虫卵过滤装置的实践效果，特进行如下对照试验研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2019年2月至2022年8月，对江西省某地948例确诊蛔虫感染患儿（男613 例、女335 例）粪便样品进行蛔虫卵检测，每例患儿均单独采集样品，共采集948 份粪便样品，一式两份。患儿家长均对研究内容知情同意。

诊断标准：参照《胆道蛔虫病的诊断和治疗（国内文献综述）》[5]，根据患者流行病学史、临床症状，结合实验室检查进行确诊。

纳入标准：均为学龄儿童（6～12 岁）蛔虫感染确诊患儿；采集粪便样品前6 个月未使用驱虫药物；取样前未合并其他感染性疾病；病情可控。排除标准：合并消化系统器质性疾病；合并其他寄生虫感染。

1.2 仪器和试剂

所用仪器主要包括光学显微镜（OLYMPUS 公司，SZX16 型），恒温水浴箱（沧州鸿浩杰科建筑仪器有限公司，HWY-30 型）。所用试剂主要包括氯化钠、醋酸，均为试剂纯，购自南昌明瑞化工有限公司。所用耗材主要包括149、88、44 μm规格尼龙纱布，塑料定量板，刮片，载玻片，盖玻片，滤纸等，均由九江市浔阳区疾病预防控制中心提供。

1.3 检测方法

蛔虫感染确诊患儿粪便样品一式两份根据采用不同的前期处理操作方法分为对对照组和实验组，但由相同的操作人员负责寄生虫样品的后期检测，检测虫卵均为蛔虫卵。具体实施之前，操作人员均完成操作流程培训、虫卵鉴别培训，能根据患儿排出虫体的形态进行鉴别。

对照组采用纱布烧杯过滤装置。手工制作简易过滤装置，将3 层纱布叠加置于烧杯上方，取2 g 待测粪便样品溶于0.9%氯化钠注射液（58 ml）制作悬浮浆液，倒入烧杯进行3 次过滤，分别使用的滤网规格为网眼直径149、88、44 μm；再使用0.9%氯化钠注射液对纱布进行3～5 次漂洗，冲洗液再次经滤纸过滤。检测方法为0.9%氯化钠注射液直接涂片法：用粗吸管收集表面液体并转移至载玻片，厚度以能隐约辨认玻片下方字迹为宜，将盖玻片盖于样本上并静置10 min，再将其置于显微镜载玻片上，使用低倍镜进行观察，每份样品重复进行3 张涂片镜检，镜检时浏览全片。

试验组采用双层式虫卵过滤装置，其结构特征和使用方法如下。（1）结构特征：矩形块状滤液箱顶部设有支架和过滤组件，滤筒底部设有出口、顶部可放置滤液瓶；滤管顶端均为相互贴合的半圆形设置，便于两个滤管匹配设置于滤筒的圆管；滤管底端分别连接过滤盒，过滤盒连接滤液箱顶部，滤液箱顶板上方的2 个过滤盒位置贯通设置一圆槽，过滤盒均通过圆槽连通于滤液箱；滤液箱底部平行设有2 个滑轨，滤液箱内通过滑轨设有一可抽拉滤液盒，滤液盒的顶部为空置结构；滤筒包括方柱筒和锥形筒，两者之间开设一贯通的圆管，方柱筒侧面向内水平开设第一矩形槽，第一矩形槽的两侧面均设有第一滑槽，第一矩形槽内通过第一滑槽设有一可抽拉第一过滤网[6]，见图1～2。（2）使用方法：操作前检查，确保双层式虫卵过滤装置滤筒和过滤组件之间密封性良好，冲刷滤筒、过滤盒、滤液箱，避免杂质影响操作过程，更新并检查滤网，确保正常使用。检验人员将待测样品溶于0.9%氯化钠注射液，制作成悬浮浆液，而后倒入过滤装置，样品流经第一过滤网时可通过孔径去除杂质，同时通过2 个滤管和第2 过滤网进行两份样品的收集；检验人员可通过滤液盒侧面设置把手进行过滤后样品的提取，重复使用0.9%氯化钠注射液对样品进行3～5 次漂洗；载玻片和盖玻片操作、低倍镜观察方法同对照组。

图1 双层式虫卵过滤装置结构示意图

图2 双层式虫卵过滤装置实物图

1.4 指标记录

研究团队组建3 人小组，负责采集研究效应指标相关数据。（1）蛔虫卵检出情况：检测948 例蛔虫感染确诊患儿粪便样品中蛔虫卵是否检出及具体计数，计数方法参照麦克马斯特计数法，每克粪便样品蛔虫卵计数=（左计数池内虫卵数+右计数池内虫卵数）/2×200[7]。（2）操作人员对操作过程满意程度：对20 名操作人员进行主观评定，评定内容包括3 个维度（样品前期处理效率、样品前期处理方便程度、样品前期处理卫生状况），每个维度均设置3 个选项（满意、一般、不满意）。

1.5 统计学处理

采用Epidata 3.0 软件建立数据库，采用SPSS 20.0 统计软件进行数据分析。计量资料以±s表示，采用t检验。计数资料以率表示，采用χ2检验。等级资料采用Z检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组样品蛔虫卵检出率与每克样品蛔虫卵计数比较

试验组阳性检出率高于对照组，每克粪便样品蛔虫卵计数大于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表1。

2.2 操作人员对操作过程满意程度比较

20 名操作人员对样品前期处理过程的3 个维度进行满意程度评价，结果显示，试验组3 个维度满意度均高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 操作人员对操作过程满意程度比较（例）

3 讨论

目前，临床对阿苯达唑、甲苯达唑、伊维菌素等药物的广泛应用，极大程度提升了蛔虫病的治愈率。但受蛔虫病传播途径广泛、居民卫生习惯欠佳、雌虫繁殖能力极强、虫体生存能力较强等因素的交互影响，蛔虫病的发病率依然居高不下，甚至在经济欠发达地区长期流行[8]。就寄生部位而言，通常情况下绝大多数蛔虫寄生于人体的小肠部位，发生胆内、肺部等位置转移的比例相对较小，因此检测重点人群粪便能有效、快速地判定蛔虫感染情况，而0.9%氯化钠注射液直接涂片法依然是当前最经济、便捷且广泛应用的检测技术。就检测结果而言，虽然蛔虫病患者通过粪便样品检测蛔虫卵的阳性率较高，但粪便样品前期处理的规范性依然会影响最终检测结果，尤其是影响蛔虫卵定量检测结果[9]。因此，持续加强粪便样品前期处理过程的规范性，尤其是通过装置设计优化样品前期处理过程，同时提升操作过程的便捷性，对于提升操作人员工作效率，并提高蛔虫卵定量检测结果至关重要。

本研究结果显示，试验组阳性检出率高于对照组，每克粪便样品蛔虫卵计数大于对照组，主要与试验组所用的装置极大程度优化了粪便样品的前期处理过程有关。其原因如下：（1）方柱筒和锥形筒内设有一贯通圆管，内设的第一过滤网、第二过滤网能快速实现粪便样品悬浮浆液的连续过滤，同时第一过滤网和第二过滤网具有不同的孔径，可根据实验检测要求去除杂质、收集虫卵等；（2）分别通过两个滤管和第二过滤网进行两份样品的收集，可同时对两份样品进行检查、比较和研究，大大提高了实验效率并丰富了实验内容；（3）双层式虫卵过滤装置还可根据实际需要调整滤网的网眼规格，以更好地进行粪便样品的前期处理，进而提升后期检测的准确率。两组粪便样品蛔虫卵计数存在差异的原因为，经过双层式虫卵过滤装置处理的粪便样品初步实现了蛔虫卵的富集，因此在使用0.9%氯化钠注射液直接涂片法进行样品检测时，蛔虫卵检出的数量相对更大[10]。

本研究结果显示，操作人员对试验组双层式虫卵过滤装置的使用满意度更高。其原因为，双层式虫卵过滤装置初步实现了粪便样品悬浮浆液的连贯性处理，不需要按照传统的样品前期处理方法（使用纱布进行过滤，并对纱布进行重复漂洗），极大提升了操作效率。同时，进行室外临时检测时也不同于传统方法（必须携带烧杯、尼龙滤网、相关支架等装置），仅凭借双层式虫卵过滤装置就能实现样品的快速处理。除此之外，面对多项时效性强的检测任务时，双层式虫卵过滤装置在完成单项样品前期处理后，就能使用0.9%氯化钠注射液对设置内壁进行快速冲洗，免去了后期处理的烦琐工作。试验组操作人员认为双层式虫卵过滤装置对样品前期处理更为卫生，其原因为，双层式虫卵过滤装置实现了粪便样品悬浮浆液的过滤，全部过程均在滤筒、滤液箱内部实现，即使因操作力度较大而产生空气悬浮物质，也不会对操作人员产生附加影响。

综上所述，双层式虫卵过滤装置用于蛔虫卵检测，能明显提升检测效果，操作人员对样品前期处理效率、方便程度、卫生状况也更为满意。本研究创新之处在于，通过双层式虫卵过滤装置初步实现了样品的连贯性处理，同时根据实际需要不断调整尼龙滤网规格，从而实现蛔虫卵的富集，利于提高蛔虫卵检出率及每克粪便样品的蛔虫卵计数。但本研究亦存在两点不足：一是检测对象均为蛔虫卵，是否适用于其他寄生虫虫卵相关样品的前期处理，后续研究有待确认；二是双层式虫卵过滤装置使用效果主要通过操作人员主观评价获得，客观指标尚需后续研究进一步采集分析。