UPLC同时测定黄酒中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸及山梨酸

陈芳　房新宇

安赛蜜、糖精钠是甜味剂，苯甲酸、山梨酸是防腐剂，都被广泛用于食品中，但这些物质过量摄入会对人体造成一定伤害。黄酒因香气浓郁、甘甜美味、风味醇厚而被人们喜欢，在黄酒生产过程中根据需要可以适量添加焦糖色素，但严禁添加安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸用于增加甜味和防腐。本文对利用超高效液相色谱法（UPLC）同时测定黄酒中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸的方法进行了探索。实验结果显示，此方法简单快速、准确可靠、灵敏度高，可用于同时测定黄酒中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸。

一、试验准备

1.仪器与试剂。Waters超高效液相色谱仪（Waters ACQUITY UPLC）系统，配有二极管整列检测器、自动进样器、色谱工作站、Waters ACQUITY BEH shield RP18色谱柱（2.1X100mm，1.7μm）。

分析天平，感量为0.001g和0.0001g；涡旋振荡器；离心机，转速>8000r/min；恒温水浴锅；超声波清洗器；真空抽滤器；匀浆机。

甲醇（色谱纯，Merk）；乙酸铵（分析纯）；亚铁氰化钾；乙酸锌；安赛蜜（GBW（E）082620，1000μg/mL，北京坛墨质检科技有限公司）；糖精钠（GBW（E）100008，1.00mg/mL，中国计量科学研究院）；苯甲酸（GBW（E）100006，1.00mg/mL，中国计量科学研究院）；山梨酸（GBW（E）100007，1.00mg/mL，中国计量科学研究院）。

2.试剂配制。亚铁氰化钾溶液（92g/L）：称取106g亚铁氰化钾，加入适量水溶解，用水定容至1000mL。乙酸锌溶液（183g/L）：称取220g乙酸锌溶于少量水中，加入30mL冰乙酸，用水定容至1000mL。0.02mol/L乙酸铵溶液：1.54g乙酸铵，用水定容至1000mL，0.22μm过滤。标准系列溶液配置：量取适量标准溶液，用水稀释配置成所需浓度混合标准溶液，构成浓度分别为1.0、5.0、10.0、25.0、50.0mg/L的标准使用液。

3.样品处理。准确称取约2g（精确到0.001g）试样于50mL具塞离心管中，加水约25mL，涡旋混匀，于50℃水浴超声20min，冷却至室温后加亚铁氰化钾溶液2mL和乙酸锌溶液2mL，混匀，8000r/min离心5min。将水相转移至50mL容量瓶中，残渣中加水20mL，涡旋混匀后超声5min，8000r/min离心5min。将水相转移到同一50mL容量瓶中，并加水定容至刻度，混匀。取适量上清液过0.22μm滤膜，待液相色谱测定。

4.液相色谱条件。色谱柱：Waters ACQUITY UPLC BEH shield RP18色谱柱（2.1X100mm，1.7μm）；流动相：0.02mol/L的乙酸铵一甲醇（96：4）；检测波长：230nm；光谱扫描范围：210nm-400nm；柱温：40℃；流速：0.3mL/min；进样量：10μL。

二、结果与分析

1.检测波长的确定。本实验对4种食品添加剂在210-400nm进行全波长扫描，所得光谱图见图1，安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸的最大吸收波长见表1。为兼顾各组分的灵敏度，本文选择的实验波长为230nm，在此波长下各组分均有较好的灵敏度。

2.流动相及流速的选择。把乙酸铵和甲醇水溶液作为流动相的比例分别设置为90：10和96：4和98：2，当甲醇：乙酸铵水溶液为96：4时，出峰时间较短，且分离效果理想。如果甲醇比例更低，安赛蜜和苯甲酸将出现重叠，分离效果差，因此二者的比例选择为96：4。

把甲醇和乙酸铵水溶液的比例设置为96：4，当流速为0.6mL/min时，虽然安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸能够很快分离，但是安赛蜜和苯甲酸的峰型不好，且保留时间太接近，分离不完全。将时间流速改为0.3mL/min时，不仅能完全分离且分离效果理想，故选择流速为0.3mL/min。在甲醇：乙酸铵水溶液为96：4、流速为0.3mL/min时，分离效果较好，5min内便可使4种组分完全分离，色谱图见图2。

3.线性范围及检出限。按所选择的色谱条件进样不同质量浓度的标准溶液10μL，获得不同质量浓度下各组分的峰面积，以质量浓度和峰面积绘制标准曲线。取標品逐级稀释进样10μL，按色谱仪最低响应值S（S=3N，N为仪器噪音水平）所对应的浓度为检出限。各组分的线性范围、线性方程、相关系数及检出限见表2。从表2可以看出各组分在线性范围内，线性关系良好。

4.回收率及精密度实验。配制一混合标准溶液，连续进样10次，做精密度实验。再准确称取黄酒样品2.00g，按线性范围加入一定量的混合标准品，按选定的条件进行分析，平行测定10次，结果如表3所示。结果显示，被测样品加标回收率在96.83%-105.68%，RSD小于1.93%，测定结果准确可靠。

5.样品的检测分析。使用优化后的色谱条件，对市售黄酒进行检测，样品色谱图见图3。经过对30件黄酒样品的检测，检测结果汇总见表4。由图3和表4可知，黄酒样品基质复杂，杂峰较多，且检测出微量苯甲酸，由于规定不得添加，故建议使用加入法和质谱法判别是否存在假阳性。

三、结论

本研究建立了超高效液相色谱法（UPLC）同时测定黄酒中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸的分析方法。此方法简单快速、准确可靠、灵敏度高，可为黄酒中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸的同时测定提供参考。

作者简介：陈芳（1993-），女，汉族，安徽桐城人，技师，大学本科，研究方向为食品理化检验。