非小细胞肺癌中Ki-67和Bcl-2、HMGB1表达的临床意义

黄美兴　罗卫民

【摘要】 目的：研究非小细胞肺癌（NSCLC）中增殖细胞核抗原-67（Ki-67）和B细胞淋巴瘤因子2蛋白（Bcl-2）、高迁移率族蛋白1（HMGB1）表达的临床意义。方法：选择2017年1月-2019年6月广州市中西医结合医院收治的84例NSCLC患者。采集所有患者NSCLC组织及癌旁正常组织，对比不同肺组织Ki-67、Bcl-2及HMGB1表达情况。分析Ki-67、Bcl-2及HMGB1表达与NSCLC患者临床病理特征及预后的关系。结果：NSCLC组织中Ki-67、Bcl-2及HMGB1阳性表达率分别为58.33%、45.24%、75.00%，相較于癌旁正常组织的9.52%、8.33%、13.10%更高（P<0.05）。临床分期Ⅲ、Ⅳ期和有淋巴结转移NSCLC患者中Ki-67阳性率相较于临床分期Ⅰ、Ⅱ期和无淋巴结转移患者更高（P<0.05）。有淋巴结转移和组织学分级Ⅲ级NSCLC患者的Bcl-2阳性率相较于无淋巴结转移和组织学分级Ⅰ、Ⅱ级患者更高（P<0.05）。有淋巴结转移、组织学分级Ⅲ级和临床分期Ⅲ、Ⅳ期NSCLC患者的HMGB1阳性率相较于无淋巴结转移、组织学分级Ⅰ、Ⅱ级和临床分期Ⅰ、Ⅱ期患者更高（P<0.05）。NSCLC死亡患者Ki-67、Bcl-2、HMGB1阳性率分别为85.71%、68.57%、94.29%，相较于存活组的38.78%、28.57%、61.22%均较高（P<0.05）。结论：NSCLC中Ki-67、Bcl-2及HMGB1均呈异常高表达，且均和预后密切相关。

【关键词】 非小细胞肺癌 Ki-67 Bcl-2 高迁移率族蛋白B1

Clinical Significance of Ki-67， Bcl-2 and HMGB1 Expression in Non-small Cell Lung Cancer/HUANG Meixing， LUO Weimin. //Medical Innovation of China， 2023， 20（10）： 0-057

[Abstract] Objective： To investigate the clinical significance of proliferating cell nuclear antigen 67 （Ki-67），

B-cell lymphoma factor 2 protein （Bcl-2） and high mobility group protein 1 （HMGB1） expression in non-small cell lung cancer （NSCLC）. Method： A total of 84 patients with NSCLC admitted to the Guangzhou Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine from January 2017 to June 2019 were selected. NSCLC tissues and adjacent normal tissues were collected from all patients， and the expressions of Ki-67， Bcl-2 and HMGB1 in different lung tissues were compared. The relationship between Ki-67， Bcl-2 and HMGB1 expression and clinicopathologic features and prognosis of NSCLC patients were analyzed. Result： The positive expression rates of Ki-67， Bcl-2 and HMGB1 in NSCLC tissues were 58.33%， 45.24% and 75.00%， which were higher than 9.52%， 8.33% and 13.10% in adjacent normal tissues （P<0.05）. The positive rate of Ki-67 in patients with stage Ⅲ， stage Ⅳ and NSCLC with lymph node metastasis were higher than those in patients with stage Ⅰ， stage Ⅱ and without lymph node metastasis （P<0.05）. The positive rate of Bcl-2 in NSCLC patients with lymph node metastasis and histological grade Ⅲ were higher than those in patients without lymph node metastasis and histological grade Ⅰ and Ⅱ （P<0.05）. The positive rate of HMGB1 in patients with lymph node metastasis， histological grade Ⅲ and clinical stage Ⅲ and Ⅳ were higher than those in patients without lymph node metastasis， histological grade Ⅰ and Ⅱ， and clinical stage Ⅰ and Ⅱ （P<0.05）. The positive rates of Ki-67， Bcl-2 and HMGB1 in dead NSCLC patients were 85.71%， 68.57% and 94.29%， respectively， which was higher than 38.78%， 28.57% and 61.22% in the survival group （P<0.05）. Conclusion： The expressions of Ki-67， Bcl-2 and HMGB1 are abnormally high in NSCLC， which are closely related to the prognosis.

[Key words] Non-small cell lung cancer Ki-67 Bcl-2 High mobility group B1

First-author's address： Guangzhou Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine， Guangzhou 510800， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2023.10.013

随着近年来人类生活环境的日益恶化及生活方式的不断转变，非小细胞肺癌（NSCLC）的发病率亦呈逐年攀升趨势，已成为严重威胁人类生命健康的重大疾病之一[1-3]。因此，对NSCLC进行积极有效的诊治显得尤为重要，亦是目前广大医务工作者共同关注的热点[4-5]。不少研究报道证实，NSCLC的发生、发展属于多基因调控过程，且细胞增殖失控及凋亡失控起着关键性作用，亦是影响患者预后转归的关键因素[6-7]。鉴于此，本文通过研究NSCLC中增殖细胞核抗原-67（Ki-67）和B细胞淋巴瘤因子2蛋白（Bcl-2）、高迁移率族蛋白1（HMGB1）表达的临床意义，以期为NSCLC的诊治提供新的思路和方向，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年1月-2019年6月广州市中西医结合医院收治的84例NSCLC患者。纳入标准：（1）所有入组人员均经病理检查确诊；（2）均为首次发病；（3）入组前并未接受任何抗肿瘤治疗。排除标准：（1）伴有其他恶性病变；（2）神志异常或伴有精神疾病；（3）无法完成定期随访。男52例，女32例；年龄：<55岁30例，≥55岁54例；病理类型：腺癌44例，鳞癌40例；临床分期：Ⅰ、Ⅱ期35例，Ⅲ、Ⅳ期49例；淋巴结转移33例，无淋巴结转移51例；组织学分级：Ⅰ、Ⅱ级55例，Ⅲ级29例。入组人员均已签同意书，医院医学伦理委员会已批准。

1.2 方法 （1）Ki-67、Bcl-2及HMGB1表达检测：通过免疫组化法实现，采集所有受试者NSCLC和癌旁正常组织标本，以4%中性甲醛进行固定。随后以梯度酒精脱水处理，石蜡包埋，制备成厚度为4 μm的连续切片，实施HE染色。免疫组化染色选择EnVision法，具体步骤遵循试剂盒说明书完成。相关抗体根据1∶400比例稀释，将已知阳性切片/PBS视作阳性/阴性对照。兔抗人多克隆抗体均购自美国Santa Cruz公司。DAB显色液及免疫组化试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司。（2）随访方式：对所有受试者均开展为期3年的随访观察，随访方式包括电话随访、来院复查等，随访频率为3个月/次，随访截止事件为患者死亡。

1.3 观察指标及判定标准 比较不同肺组织Ki-67、Bcl-2及HMGB1表达情况。分析Ki-67、Bcl-2及HMGB1表达与NSCLC患者临床病理特征和预后的关系。结果判定：Ki-67定位于细胞核，Bcl-2定位于细胞质，HMGB1定位于细胞质。根据染色强度及阳性细胞占比实施半定量积分法评估，每项评分0～3分。染色强度评分：无着色即为0分，浅着色即为1分，中度着色即为2分，深度着色即为3分。阳性细胞占比评分：随机选择10个高倍镜视野，各视野计数100个细胞。阳性细胞占比≤5%记作0分；6%～25%记作1分；26%～49%记作2分；≥50%记作3分。两项评分之和记作最终结果，0～1分为阴性，反之即为阳性[8-9]。

1.4 统计学处理 以SPSS 21.0软件实现数据处理，计数资料以率（%）表示，行字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同肺组织Ki-67、Bcl-2及HMGB1表达对

比 NSCLC组织中Ki-67、Bcl-2及HMGB1阳性表达率均高于癌旁正常组织，差异均有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2 NSCLC患者中Ki-67表达与病理特征的关系 临床分期Ⅲ、Ⅳ期和有淋巴结转移NSCLC患者的Ki-67阳性率相较于临床分期Ⅰ、Ⅱ期和无淋巴结转移患者更高，差异均有统计学意义（P<0.05），见表2。

2.3 NSCLC患者中Bcl-2表达与病理特征的关系分析 有淋巴结转移和组织学分级Ⅲ级NSCLC患者的Bcl-2阳性率相较于无淋巴结转移和组织学分级Ⅰ、Ⅱ级患者更高，差异均有统计学意义（P<0.05），见表3。

2.4 NSCLC患者中HMGB1表达与病理特征的关系 有淋巴结转移、组织学分级Ⅲ级和临床分期Ⅲ、Ⅳ期NSCLC患者的HMGB1阳性率相较于无淋巴结转移、组织学分级Ⅰ、Ⅱ级和临床分期Ⅰ、Ⅱ期患者更高，差异均有统计学意义（P<0.05），见表4。

2.5 NSCLC患者中Ki-67、Bcl-2、HMGB1表达与预后的关系 84例患者死亡35例，存活49例，其中NSCLC死亡患者Ki-67、Bcl-2、HMGB1阳性率相较于存活组均较高，差异均有统计学意义（P<0.05），见表5。

3 讨论

Ki-67介导了细胞有丝分裂及细胞增殖过程，更是调控细胞周期的重要因子，和NSCLC恶性生物学行为及预后息息相关，是目前临床应用较为广泛的增殖细胞生物学标志物之一。Bcl-2基因是当前国内外研究相对广泛的凋亡相关基因之一，其参与了细胞中程序性细胞凋亡过程，进而诱发恶性病变，可作为肿瘤分子标志物[10-12]。HMGB1是一种具有诱导炎症反应的非组蛋白，其广泛分布在真核细胞核内，在肿瘤细胞增殖分化的促进及血管内皮细胞功能的调控等生物学过程中起着至关重要的作用。

本研究结果显示：NSCLC组织中Ki-67、Bcl-2及HMGB1阳性表达率均较癌旁正常组织高。提示了NSCLC组织中Ki-67、Bcl-2及HMGB1均呈异常高表达。分析原因，可能是Ki-67表达的升高往往反映了细胞周期的失控；而Bcl-2表达的升高可能引起凋亡失衡；HMGB1表达升高可能导致其调控细胞增殖分化的作用异常。而上述作用均在NSCLC的发生过程中扮演着至关重要的角色。此外，临床分期Ⅲ、Ⅳ期和有淋巴结转移NSCLC患者的Ki-67阳性率相较于临床分期Ⅰ、Ⅱ期和无淋巴结转移患者更高（P<0.05）。且NSCLC死亡患者Ki-67阳性率相较于存活组高。说明了Ki-67与NSCLC患者病情进展、淋巴结转移及预后密切相关。这与姜峰等[13]的研究报道相吻合，说明了随着Ki-67的表达升高会导致肿瘤细胞的异常增殖分化，提高其侵袭能力，并直接影响预后转归。然而，马礼鸿等[14]的研究报道发现，NSCLC中Ki-67表达和临床分期无关，这和本研究结果存在明显的差异，而导致上述差异的主要原因可能与研究样本量不同有关。另外，有淋巴结转移和组织学分级Ⅲ级NSCLC患者的Bcl-2阳性率相较于无淋巴结转移和组织学分级Ⅰ、Ⅱ级患者更高（P<0.05）。且NSCLC死亡患者Bcl-2阳性率相较于存活组更高。反映了Bcl-2表达与NSCLC患者淋巴结转移及预后息息相关。究其原因，Bcl-2异常高表达会对肿瘤细胞的凋亡产生一定的抑制作用，肿瘤细胞存活周期延长，进而使得其细胞增殖减少[15-16]。本文结果还显示了有淋巴结转移、组织学分级Ⅲ级和临床分期Ⅲ、Ⅳ期NSCLC患者的HMGB1阳性率相较于无淋巴结转移、组织学分级Ⅰ、Ⅱ级和临床分期Ⅰ、Ⅱ期患者更高（P<0.05）。且NSCLC死亡患者HMGB1阳性率相较于存活组高。充分证实了HMGB1表达和NSCLC患者病情、淋巴结转移、组织学分级以及预后密切相关。考虑原因，HMGB1可通过和DNA相结合，进一步介导DNA转录、修饰等过程，间接参与了NSCLC发生、发展过程[17-18]；同时，HMGB1可通过和特异性细胞膜受体相结合，从而介导肿瘤细胞增殖、浸润及转移等过程，最终影响预后转归[19-20]。

综上所述，NSCLC中Ki-67、Bcl-2及HMGB1均呈异常高表达，且均和患者病情进展及预后密切相关，可作为临床诊治NSCLC的可靠生物学标志物。

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（收稿日期：2022-11-02） （本文编辑：张明澜）