紫外-可见分光光度法与酸碱滴定法联合测定桂利嗪纯度的效果评定

敦 康，郭永辉，付 莉，隋思强，柴倩雯，王若琳

（1.河北省药品审评中心，河北 石家庄 050091；2.河北省药品医疗器械检验研究院，河北 石家庄 050071；3.河北省药品职业化检查员总队，河北 石家庄 050091；4.河北科技大学材料科学与工程学院，河北 石家庄 050018）

桂利嗪（Cinnarizine）是一种哌嗪类化合物（其分子结构如图1 所示）。此药属于钙通道阻滞剂。其作用机理为阻止血管平滑肌中的细胞膜钙离子（Ca2+）向膜内流动，促使血管扩张，从而改善脑部供血状况。近几十年，此药在临床上多用于治疗缺血性脑血管病，包括脑血栓形成、脑动脉硬化等；还可以用于预防和治疗如晕车、眩晕等运动病，缓解由梅尼埃病或前庭系统疾病造成的眩晕、耳鸣等症状。此药是抗眩晕治疗的一线药物[1-2]。此外，临床上还使用桂利嗪联合其他药物进行皮肤瘙痒、荨麻疹等过敏性皮肤病的治疗[3-4]。最新研究表明，桂利嗪在抗曼氏血吸虫[5]、治疗COVID-19 相关冻疮样病变[6]等领域具有显著的应用效果。桂利嗪原料药为《中国药典》2020版收载品种，药典对其性状、检查、鉴别含量测定等方面均有规范说明。本文参考《中国药典》及其他相关文献[7-17]，采用紫外- 可见分光光度法与酸碱滴定法分别测定桂利嗪的纯度，比较分析测定结果。依据标准物质技术规范及国家相关计量法规的要求，分析上述测定过程的不确定度。在本文中，笔者主要是分析紫外- 可见分光光度法与酸碱滴定法联合测定桂利嗪纯度的效果。

图1 桂利嗪结构式

1 仪器与试药

卡尔费休氏滴定仪V30，由瑞士Mettler Toledo公司生产；UV-2550 型紫外- 可见分光光度仪，由日本Shimadzu 仪器公司生产；箱式电阻炉SX2.5-10，由上海百典仪器设备有限公司生产；精密电子天平XPR226DR，由梅特勒托利多科技（中国）有限公司生产；Agilent 7896 气相色谱仪，由美国安捷伦科技公司生产。卡尔费休试液，由上海市国药化学试剂有限公司生产，批号：532069 ；水为实验室自制去离子水；分析纯乙酸酐、冰乙酸、结晶紫，由天津化学试剂公司生产；桂利嗪样品，批号：180119061。

2 方法与结果

2.1 紫外-可见分光光度法

2.1.1 供试品溶液的配置 取桂利嗪原料，精密称取适量，用盐酸溶液（9 →1000）配置成含桂利嗪7.5 μg•mL-1的溶液，即为供试品溶液。

2.1.2 试验条件 选取253 nm 波长为特征吸收峰，测定该波长处的吸光度，以吸收系数（）为575来计算，测定供试品的纯度。

2.1.3 方法学研究

2.1.3.1 线性关系考察 精密称取50.00 mg 桂利嗪置于50 mL 量瓶中，用盐酸溶液（9 →1000）溶解并定容至刻度，摇晃均匀，配置成1000 μg·mL-1浓度的溶液作为贮备液。分别精密移取0.01 mL、0.02 mL、0.04 mL、0.08 mL、0.15 mL 至10 mL 量瓶中，用上述盐酸溶液稀释定容至刻度，摇晃均匀。按“2.1.2”项下检测方法进行测定，记录吸光度值。以样品浓度(X，μg·mL-1) 为横坐标，以吸光度(Y) 为纵坐标，绘制标准曲线，回归线性方程为Y=6 698.8X+1.556 2，r=0.999 9。结果表明，桂利嗪试样溶液在1 ～100 μg·mL-1浓度范围内，溶液吸光度与浓度具有良好的线性关系。

2.1.3.2 仪器精密度 取供试品溶液按照“2.1.2”项下试验方法，连续重复测试6 次，记录吸光度的相对标准偏差为0.13%(n=6)，结果表明测试仪器的精密度良好。

2.1.3.3 方法精密度 平行配制6 份桂利嗪供试品溶液，按“2.1.2”项下试验方法，每份桂利嗪供试品溶液重复测试3 次，6 份桂利嗪供试品溶液的吸光度相对标准偏差为0.41% (n=6)，结果表明测试方法的精密度良好。

2.1.4 紫外- 可见分光光度法纯度标准值 数学模型的建立。采用紫外- 可见分光光度法进行纯度测定，根据计算公式，确定桂利嗪纯度的计算数学模型为:W紫外-可见分光光度法=A/×（1/100）/C。式中:W紫外-可见分光光度法为相对纯度，A 为桂利嗪吸光度值，C 为桂利嗪浓度。

纯度的测定方法：制备10 份桂利嗪供试品溶液，按“2.1.2”项下试验方法每份溶液重复测试3 次。桂利嗪溶液浓度（μg•mL-1）分别为0.007 495、0.007 503、0.007 473、0.007 438、0.007 470、0.007 445、0.007 513、0.007 523、0.007 478、0.007 478，桂利嗪溶液吸光度测试结果见表1。

表1 桂利嗪溶液吸光度

格拉布斯（Grubbs）检验：格拉布斯检验可以用来剔除可疑值。对10 组检测数据进行格拉布斯检验，剔除测试中出现的可疑值。计算平均值x和标准偏差s。计算偏离值：平均值与最小值之差记为a1；最大值与平均值之差记为a2。a1和a2两个值中最大者为可疑值。平均值为99.61%，s=0.079 74。经计算，G=1.785，查阅格拉布斯临界值表可知：G0.95(10)=2.176。G ＜G0.95(10)，因此可知在两组数据中不存在可疑值。

确定标准值：由桂利嗪的纯度测量数据确定桂利嗪紫外-可见分光光度法纯度值为99.61%，s=0.079 74。

2.1.5 其他杂质测定 受限于紫外-可见分光光度定量分析方法学的特点，样品中的水分、炽灼残渣和溶剂残留在紫外- 可见分光光度法系统中难以检测，因此在利用紫外- 可见分光光度法测定纯度时需要去掉水分、炽灼残渣和溶剂残留对数值的影响。

2.1.5.1 水分 采用卡尔费休方法测定桂利嗪中的水分含量。用无水甲醇作为溶剂，溶解精密称取的供试品，然后将溶液迅速放置于水分测定仪中进行测试，重复测试10 次后取平均数据，得到平均值为0.142%，标准偏差为0.010%(n=10)。

2.1.5.2 炽灼残渣 桂利嗪中的炽灼残渣按照《中国药典》2020 版炽灼残渣检查项下要求测定。炽灼残渣测定重复10 次，取平均值为0.037 9%，标准偏差为0.003 3%(n=10)。

2.1.5.3 溶剂残留 桂利嗪中的溶剂残留使用气相色谱法测定。测定条件为：色谱柱C P 9 210-w ax（30 m×320 μm×1.8 μm）载气：氮气；流速：2 mL/min ；分流比：20:1 ；检测器：FID 检测器；检测器温度：250℃；进样口温度：200℃；进样方式：顶空；顶空平衡时间：30 分钟；顶空加热温度：100℃；定量环温度：105℃；传输线温度：110℃；程序升温：起始温度为35℃，维持5 分钟，以每分钟3℃的速率升温至50℃，维持2 分钟，再以每分钟20℃的速率升温至200℃，维持7 分钟。结果桂利嗪中的溶剂残留测定数据结果平均值为0，标准偏差为0 (n=10)。测定结果：桂利嗪中的水分为0.142%，炽灼残渣为0.0379%，溶剂残留为0，总计0.180%。桂利嗪标准值为99.61%×(100%-0.180%)=99.43%。

2.1.6 紫外- 可见分光光度法的不确定度评估 根据“2.1.4”项下的数学模型可知，紫外- 可见分光光度法不确定度来自吸光度，包括由容量瓶、温度、移液管、天平以及仪器本身示值等影响因素的综合作用，所以桂利嗪溶液吸光度的不确定度计算公式为

2.2 酸碱滴定法

2.2.1 测定方法 取桂利嗪约0.15 g，精密称定质量，加冰乙酸20 mL 与乙酸酐4 mL 溶解后，加结晶紫指示液1 滴，用高氯酸（HClO4）滴定液（0.1 mol/L）滴定至溶液呈绿色，并将滴定的结果用空白试验进行校正。每l mL 的高氯酸滴定液（0.1 mol/L）相当于18.43 mg 的桂利嗪。空白液的制备：取冰乙酸20 mL，乙酸酐4 mL，加结晶紫指示液1 滴与高氯酸滴定液（0.5 mol•L-1）0.05 mL，摇匀即得。

2.2.2 计算公式 桂利嗪含量计算公式：A=C×(VV0)×18.43/0.1/m×100%。式中：A 为以无水物计算所得桂利嗪的质量分数(%) ；C 为盐酸滴定液的浓度(mol•L-1) ；V 为供试品消耗的盐酸滴定液体积(mL) ；V0为空白试验消耗盐酸滴定液的体积，即0.05 mL；m为供试品的称样量(g)。

2.2.3 纯度测定 酸碱滴定法测定桂利嗪纯度的结果见表2。

表2 桂利嗪酸碱滴定法测定结果

由表2 可知，酸碱滴定法测定的桂利嗪化学纯度值为99.47%，在桂利嗪紫外- 可见分光光度法纯度值不确定度范围之内，表明上述桂利嗪的纯度值及不确定度真实准确。经计算，采用紫外- 可见分光光度法与酸碱滴定法相结合的方式来测定桂利嗪纯度的标准值及其不确定度为99.56%±0.08% (k=2，P=0.93)。

3 讨论

本论文对桂利嗪紫外- 可见分光光度法定值方法进行了系统考察，对紫外- 可见分光光度法测试条件进行了优化。本文采用紫外- 可见分光光度法和酸碱滴定法两种不同的分析方法综合测定桂利嗪的纯度值，其中采用紫外- 可见分光光度法定值方法分别平行测定10 次，纯度标准值及不确定度为99.43%±0.08%(k=2，P=0.95) ；酸碱滴定法测定桂利嗪化学纯度值为99.47%。两种不同方法的结果相互印证，有效地避免了单一方法带来的分析原理误差，使纯度结果更加准确可靠。

紫外- 可见分光光度法和酸碱滴定法作为测定桂利嗪纯度的经典方法，具有操作简便、可靠、快速的特点，对其进行不确定度评估十分重要。本研究为以桂利嗪作为主要成分的药剂等提供了有效物质含量测定方法的参考，同时也为桂利嗪纯度标准物质的研制和申报工作提供了科学依据。本文中建立的不确定度评估数学模型和定值方法也为其他药物进行纯度测量和不确定度评估提供了科学参考。