多管发酵法在生活饮用水微生物检验中的应用效果

周伟伟，高 敏，张 宁，刘 迎

（阳谷县疾病预防控制中心，山东聊城 252300）

水是生命的本源，在人们的日常生活中具有无可替代的作用[1]。但近年来随着社会经济的发展，工农业、生活污染越来越严重，导致水质受到了一定程度的影响[2]。因此，对生活饮用水的水质进行检验非常必要。微生物检验是检验水质的重要手段，在认真遵照相关标准进行检验操作的前提下，可较为准确地检验出水中的菌落数量[3-4]。相关研究报道也指出，微生物检验能对生活饮用水的性质进行查验，可及时找到病原菌，且有利于了解生物性有害物质的污染情况，能为水质的监测提供重要的参考依据，对提高水质有积极作用[5-7]。但不同检验方法的检验结果存在一定的差异性，因此探讨一种更为有效的检验方法非常有必要。鉴于此，对2021 年4 个季度的800 份生活饮用水样本进行微生物检验，并对比多管发酵法与滤膜法的检验结果。

1 材料与方法

1.1 样品

采集2021 年4 个季度的生活饮用水样本800 份，对样本进行微生物检验，根据不同检验方法将样本分为多管发酵组、滤膜组，每组样本400 份。两组样本均包括丰水期、枯水期的生活饮用水样本各200份。同时为了确保样本的均衡性，采集点的选择采用随机抽样法。所有样本采集后，均放在一次性无菌袋内储存，并尽快送至实验室进行检验。

1.2 仪器与试剂

培养箱（天津市莱玻特瑞仪器设备有限公司）；过滤仪（上海山姆环保设备有限公司）；培养基（北京百因诺生物科技有限公司）；显微镜（BXJ602，宁波舜宇仪器有限公司）；培养皿（沧州维康食品药品包装有限公司）；载玻片（江苏世泰实验器材有限公司）；分度吸管（苏州市联统仪器仪表试剂有限公司）；无菌镊子（扬州亚申医疗科技有限公司）。

1.3 实验方法

全部样本在送至实验室后4 h 内进行检验，以防出现样本污染，造成检验结果的偏差。检验过程中，严格根据有关规定执行操作，微生物检验项目包括总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希菌和杂菌。

1.3.1 多管发酵法

将1 mL 水样接种到10 mL 双料乳糖蛋白胨培养液中，将1 mL 水样接种到10 mL 单料乳糖蛋白胨培养液中，另将1 mL 水样注入10 mL 灭菌生理盐水中，各接种5 管，充分混匀，置于培养箱内，培养箱温度设置（36±1）℃，培养时间（24±2）h。如所有培养管不出现产酸产气，视为样本中总大肠菌群阴性；若有产酸产气，挑取产酸产气发酵管中的菌落接种于伊红美蓝琼脂板上，并置于培养箱，培养箱温度设置36 ℃左右，培养时间18～24 h，定时观察琼脂板状况。对符合以下特征菌落进行革兰氏染色、镜检和证实试验，①呈淡紫红色，中心较深；②呈紫褐色；③深紫黑色，有金属光泽。

1.3.2 滤膜法

对滤膜进行杀菌，使用无菌镊子将微孔滤膜（0.45 μm）放在装有蒸馏水的烧杯中，蒸馏水煮至沸腾，共3 次，每次15 min，除去前两次的沸水，以免有残留物残存，确保滤膜无菌。使用无菌镊子夹取滤膜置于无菌滤床上，滤膜粗糙一面处于上方，加固过滤器，将100 mL 样本置于过滤器中，开启闸门，气压设定为0.05 mmHg，进行抽滤。将过滤后的滤膜取出，用无菌镊子夹取滤膜边缘将滤膜置于含有品红硫酸钠的培养基上，滤膜平整置于培养基，以免出现气泡，培养基倒置放在恒定37 ℃的培养箱中，培养48 h。

1.4 判定标准

参照《生活饮用水卫生标准》（GB 5749—2006）相关规定，样本中均未检验出总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希菌和杂菌，视为样本质量合格；若其中任何一项指标未达到规定，则视为样本质量不合格。

1.5 观察指标

①对比两组微生物检验的合格率，包括总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希菌和杂菌的合格率与总合格率。②对比不同时期生活饮用水微生物检验的总合格率。

1.6 数据分析

应用SPSS 22.0 软件对数据分析，计数资料以%表示，进行χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果与分析

2.1 两种方法生活饮用水微生物检验结果对比

多管发酵组总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希菌和杂菌的合格率与总合格率低于滤膜组，P均＜0.05。见表1。

表1 两种方法的微生物检验结果

2.2 两种方法不同时期生活饮用水微生物检验结果对比

多管发酵组丰水期、枯水期生活饮用水微生物检验的总合格率均低于滤膜组，P均＜0.05。见表2。

表2 不同时期生活饮用水微生物检验结果

3 结论与讨论

水是人们生活的必需品，水质会直接影响人们的身体健康，甚至会对生命安全造成威胁[8]。但水质问题长期存在，特别是农村地区，水质不合格情况较为常见[9]。对生活饮用水进行微生物检验，有利于发现影响水质的影响因素，为政府部门强化水质管理提供参考，从而采取管理举措，促进水质提升[10-11]。

病原微生物侵入人体，可诱发感染，常使患者出现肠道系统症状[12]。总大肠杆菌主要用于评定水质的卫生质量，对肠道疾病的传播控制有一定的指导作用[13-14]。耐热大肠菌群主要来自人和温血动物的粪便，是评估水质的重要参考依据。

多管发酵组总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希菌、杂菌的合格率与总合格率均低于滤膜组，提示多管发酵法对生活饮用水微生物检出率较高，便于检出总大肠菌群、大肠埃希氏菌、耐热大肠菌群，可科学判断生活饮用水水质。多管发酵组丰水期、枯水期生活饮用水微生物检验的总合格率均低于滤膜组，进一步验证了多管发酵法在生活饮用水微生物检验中的应用优势。丰水期生活饮用水微生物检验的总合格率高于枯水期，提示丰水期的水质更好。

从以上分析发现，生活饮用水存在质量不合格的现象，应引起重视，加强监管控制。政府及相关部门应不断提高生活饮用水管理，定期检验水质，以提高饮用水安全性。建议措施如下：①加强对水源地的保护，严禁在水源地邻近区域进行排污、排放废气，严禁使用对水质有危害性的化肥；②加速对供水管网的改造，合理设定水价，号召居民使用政府统一供应的自来水；③加强水质监测，确保其质量符合国家卫生标准；④加强对居民安全用水的知识宣教，告知水污染的严重性、饮用不合格水的危害性；⑤加强对生活饮用水的安全管理，明确各管理人员的工作任务与职能，尤其应明确管理人员的编制，并给予相应的管理经费，以充分发挥管理者的作用，继而提高管理效果，切实提高居民生活饮用水的管理水平；⑥对于财政支付承担的自来水工程，应由政府代理予以监管，并由财政、审计等职能部门行使权力，明确水厂的产权，以防出现资产流失；⑦由物价部门对居民的饮用水进行成本核算，合理对饮用水进行定价，包括供水水价与入户费，并统一自来水初装与水费标准，以减轻居民的用水压力；⑧成立以社区为单位的水质检测中心，对居民的饮用水进行免费水质检测；⑨由政府拨付资金，建立基金制度，从居民水费中拨出一部分资金作为维护基金，助力居民饮用水供应的长久稳定。