变黄黑文衣, 中国黑文衣属地衣一新记录种

陈乐雯，何宣宣，贾涛，贾泽峰

变黄黑文衣, 中国黑文衣属地衣一新记录种

陈乐雯，何宣宣，贾涛，贾泽峰*

(聊城大学生命科学学院，山东 聊城 252059)

通过对文字衣科黑文衣属形态学、解剖学、化学与分子生物学的研究，发现中国新记录种1种，即变黄黑文衣(Dal-Forno & Eliasaro)，该种主要特征为地衣体壳状，表面浅黄绿色，无光泽，光滑；子囊盘弯曲,多分支，聚生于假子座中；盘缘黑色，相邻线盘之间有小缝隙，盘面较平坦，黑色，覆有白色粉霜；子囊层无色透明，侧丝顶端分支；子囊含8个子囊孢子；子囊孢子褐色，横隔透镜型，(4～)6胞室，大小19～25.5m×6～7m，I+紫红色。该种分布于云南和福建，该研究丰富了对中国黑文衣属物种组成与分布的认知。

厚顶盘目；文字衣科；地衣型真菌；分类学

1882年，Müller Arg.综合运用显微技术与化学分析方法，基于孢子褐色且细胞横向排列的特征,以(Ach.) Müll. Arg.作为模式种建立黑文衣属(Müll. Arg.)。Staiger结合分子生物学方法，对Müller Arg.的分类系统进行修正，承认并重新定义黑文衣属[1]。

该属为泛热带分布，隶属于真菌界(Fungi)子囊菌门(Ascomycota)茶渍纲(Lecanoromycetes)厚顶盘亚纲(Ostropomycetidae)厚顶盘目(Ostropales)文字衣科(Graphidaceae)[2]。该属主要特征为地衣体壳状，表面蜡质或粗糙；子囊盘伸长为线状，弯曲或具有分支，少数聚生为类似子座结构；盘唇张开, 大多覆有白色粉霜；盘被不炭化至轻微炭化；子囊含8个孢子；子囊孢子褐色，横隔凸透镜型或砖壁型；共生藻为橘色藻属(sp.)[3–4]。

目前世界范围内报道黑文衣属约230种，中国仅报道25种[5–10]。因此，有必要对我国黑文衣属类群进行进一步研究，为我国地衣型真菌物种资源开发及利用提供基础资料。

1 材料和方法

1.1 材料

本研究标本采自福建、云南，现馆藏于聊城大学生命科学学院地衣标本室(LCUF)。

1.2 表型分析

使用体视显微镜OLYMPUS SZX16观察地衣体外部形态特征，光学显微镜OLYMPUS BX53观察解剖特征。通过滴加10% KOH溶液、NaClO饱和水溶液、P溶液(将对苯二胺溶于无水乙醇，配成5%乙醇溶液)、碘液观察颜色反应，薄层层析法(TLC)对地衣化学物质进行鉴定[11–12]。

1.3 基因型分析

DNA提取、PCR扩增、测序 使用Sigma- Aldrich REDExtract-N-AmpTM植物PCR试剂盒从子囊盘中提取基因组DNA，并采用引物mtSSU1与mtSSU3R对线粒体小亚基片段进行扩增[13]。PCR体系总体积为50L：2×PCR master mix 25L，ddH2O 19L，引物各2L，基因组DNA 2L；扩增程序为：95 ℃预变性5 min；然后94 ℃变性45 s，50 ℃退火1 min，72 ℃延伸90 s，共35个循环; 最后72 ℃延伸10 min。PCR完成后，用1%琼脂糖凝胶电泳检测目的产物，并由铂尚生物技术(上海)有限公司测序。序列信息见表1。

表1 系统发育分析所用标本信息和GenBank登录号

*: 新测序列。下同

*：New sequence. The same below

构建系统发育树 通过SeqMan对原始序列进行拼接处理，选择与黑文衣属亲缘关系较近的灰线衣属为外类群，在NCBI网站上下载所需的23条相关序列。将上述序列在BioEdit v. 7.0.5中利用最大似然法(Maximum-likelihood, ML)进行多序列比对及优化[14–15]，在Cipres Science Gateway (http://www.phylo.org)使用RAxML-HPC BlackBox v. 8.2.12构建系统发育树[16–17]，对各节点进行1 000次重复以评价自展支持值，获得的系统发育树文件在FigTree v. 1.4.2中查看和编辑(图1)。

图1 基于SSU序列构建的黑文衣属系统发育树

2 结果和讨论

变黄黑文衣 图2

Dal-Forno & Eliasaro, Mycotaxon 112: 16(2010)

Type: Brazil, Paraná: Pontal do Paraná. Pontal do Sul, 28. II. 2008, M. Dal-Forno 433 (Holotype UPCB).

地衣体壳状，树皮生，表面浅黄绿色，无光泽，光滑。

子囊盘弯曲，多分支，长0.5～1 mm，宽0.4～ 0.5 mm，聚生于假子座中，假子座圆形至不规则卵圆形；盘缘黑色，相邻线盘之间有小缝隙；盘唇不明显，张开；盘面较宽，平坦，黑褐色，覆有白色粉霜；盘被未炭化，褐色，厚8～18m；囊层被黑色，厚15～20m；子囊层无色，清晰状，厚80～90m;囊层基黄色，厚30～38m；侧丝具有横隔，顶端分支，宽1.0～1.5m；子囊棒状，含8个子囊孢子;子囊孢子褐色，卵圆形，横隔透镜型，(4～)6胞室,大小19～25.5m×6～7m，I+紫红色。

化学反应：K+浅黄色，C–，KC+浅黄色，P–；含有斑点酸 (TLC)。

基物：树皮。

图2 Phaeographis flavescens (L.W. Chen FJ211760)。A: 地衣体和子囊器; B: 子囊盘横切面; C: 子囊; D: 子囊孢子。标尺: A=1.0 mm; B=200 μm; C=20 μm; D=20 μm

研究标本：云南：西双版纳，勐海县，哈尼文化园，海拔1 190 m，2015年12月14日，贾泽峰YN15061 (LCUF)。福建：武夷山，桐木村，三港，海拔720 m，2021年10月22日，贾泽峰FJ211286 (LCUF)；武夷山国家公园科技楼附近，海拔700 m，2021年10月24日，贾泽峰FJ211741 (LCUF)，陈乐雯，FJ211759、FJ211760、FJ211761、FJ211763、FJ211764、FJ211765、FJ211766 (LCUF)。

世界分布：巴西[18]；中国福建、云南。

讨论：根据分子数据分析，该种与属其他物种明显分开，且与聚为一独立分支，支持值高达98%，综合以上特征鉴定为。本研究标本与模式标本(Brazil)特征基本一致，但假子座颜色相对更浅，呈白色；另外，本研究只检测出斑点酸，而模式标本描述中还含有其他微量未知酸。其分类特征类似于Redinger.，后者子囊盘灰白色，弯曲，不规则分支，聚集为星状，孢子4～6室，但地衣化学物质不同, 含有新三锥酸[19]。该种形态学特征与(Nyl.) Müll. Arg.相似，不同之处在于后者子囊盘呈放射状或大量不规则分支，线盘较细长, 盘面在发育后期常发生汇合，从而形成较宽的中部区域；I+红褐色，含降斑点酸[20–21]。该种与Redinger.也较相似，不同之处在于后者子囊孢子较小，(12～)15～18m[22]。

[1] STAIGER B, KALB K, GRUBE M. Phylogeny and phenotypic variation in the lichen family Graphidaceae (Ostropomycetidae, Asco- mycota) [J]. Mycol Res, 2006, 110(7): 765–772.doi: 10.1016/j.mycres. 2006.05.003.

[2] WIJAYAWARDENE N N, HYDE K D, RAJESHKUMAR K C, et al. Notes for genera: Ascomycota [J]. Fung Diver, 2017, 86: 1–594. doi: 10.1007/s13225-017-0386-0.

[3] STAIGER B. Die flechten familie Graphidaceae studien in richtungeiner natürlicheren gliederung [J]. Bibliotheca Lichenol, 2002, 85: 1–526.

[4] LÜCKING R. Foliicolous Lichenized Fungi: Flora Neotropica Monograph 103 [M]. New York: The New York Botanical Garden Press, 2008: 1–867.

[5] WANG X H, SHI G B, JIA Z F., a new species of lichen [J]. Mycosystema, 2013, 32(1): 128–130. [王晓华，师广波，贾泽峰. 黑文衣属地衣一新种——福建黑文衣[J]. 菌物学报，2013，32(1): 128–130. doi: 10.13346/j.mycosystema.2013.01.016.]

[6] LI J, MIAO X L, JIA Z F. Additional materials for the genusfrom China [J]. J Fungal Res, 2014, 12(2): 79–82.doi: 10. 13341/j.jfr.2014.2008.

[7] JIA Z F, WEI J C. Flora lichenum Sinicorum, Vol. 13 Ostropales (I) Graphidaceae (1) [M]. Beijing: Science Press, 2016: 1–210. [贾泽峰, 魏江春. 中国地衣志, 第13卷厚顶盘目(I) 文字衣科(1) [M]．北京: 科学出版社, 2016: 1–210.]

[8] JIA Z F, LÜCKING R. Resolving the genusMüll. Arg. in China [J]. MycoKeys, 2017, 21: 13–32. doi: org/10.3897/mycokeys. 21.11986.

[9] JIA Z F, LÜCKING R. Resolving the species of the lichen genusMüll. Arg. in China, with some new combinations [J]. MycoKeys, 2017, 25: 13–29. doi: org/10.3897/mycokeys.25.13154.

[10] WEI J C. An enumeration of lichens in China [M]. Beijing: China Forestry Publishing House, 2020: 1-606.

[11] CULBERSON C F. Improved conditions and new data for identifi- cation of lichen products by standardized thin-layer chromatographic method [J]. J Chromatogr A, 1972, 72(1): 113–125. doi: 10.1016/0021- 9673(72)80013-X.

[12] ORANGE A, JAMES P W, WHITE F J. Microchemical methods for the identification of lichens [J]. British Lichen Soc, London, 2001: 1–101.

[13] ZOLLER S, SCHEIDEGGER C, SPERISEN C. PCR primers for the amplification of mitochondrial small subunit ribosomal DNA of lichen- forming ascomycetes [J]. Lichenologist, 1999, 31(5): 511–516.

[14] THOMPSON J D, HIGGINS D G, GIBSON T J. CLUSTAL W: Improving the sensitivity of progressive multiple sequence alignment through sequence weighting, position specific gap penalties and weight matrix choice [J]. Nucl Acid Res, 1994, 22(22): 1673–1680. doi: 10. 1093/nar/22.22.4673.

[15] HALL T A. BioEdit: A user-friendly biological sequence alignment editor and analysis program for Windows 95/98/NT [J]. Nucl Acid Sym, 1999, 41(2): 95–98. doi: 10.1021/bk-1999-0734.ch008.

[16] MILLER M A, PFEIFFER W, SCHWARTZ T. Creating the CIPRES Science Gateway for inference of large phylogenetic trees [C]// Proceedings of the Gateway Computing Environments Workshop (GCE), LA: New Orleans, 2010: 1–8.

[17] STAMATAKIS A. RAxML version 8: A tool for phylogenetic analysis and post-analysis of large phylogenies [J]. Bioinformatics, 2014, 30(9): 1312–1313. doi: 10.1093/bioinformatics/btu033.

[18] DAL-FORNO M, ELIASARO S. Two new species of Graphidaceae (lichenized Ascomycota) from Brazil [J]. Mycotaxon, 2010, 112(1): 15–20. doi: 10.5248/112.15.

[19] REDINGER K. Die Graphidineen der ersten Regnell’schen Expedition nach Brasilien 1892–94. Ⅲ.und, nebst einem Nachtrage Zu[J]. Ark. Bot, 1935, 27A (3): 1–103.

[20] BUNGARTZ F, LÜCKING R, APTROOT A. The family Graphidaceae (Ostropales, Lecanoromycetes) in the Galapagos Islands [J]. Nova Hed- wig, 2010, 90(1/2): 1–44. doi: 10.1127/0029-5035/2010/0090-0001.

[21] ARCHER A W. The lichen genera,,,,,and(Graphidaceae) in Australia [J]. Telopea, 2004, 10(2): 589–605.

[22] REDINGER K. Die Graphidineen der ersten Regnell’schen Expedition nach Brasilien 1892–94. I.,und[J]. Ark Bot, 1933, 25A(13): 1–20.

, A New Record of the Lichen Genusin China

CHEN Lewen, HE Xuanxuan, JIA Tao, JIA Zefeng*

(College of Life Sciences, Liaocheng University,Liaocheng 252059, Shandong, China)

Based on the methods of morphology, anatomy, chemistry and molecular,Dal-Forno & Eliasaro (Graphidaceae) is recorded as new to China. It is characterized by crustose thallus, surface pale yellowish green, dull, smooth; ascomata flexuose, branched, immersed in pseudostromata; the lirellae have a narrow, brown-black edge, with small lateral cracks; disc flat, black, with white pruina; hymenium colorless, paraphyses with branched tips; ascospores 8 per ascus, brown, with transverse septa, (4–)6 locular, 19–25.5m× 6–7m, I+ wine-red. The species is found in Yunnan and Fujian provinces, and the study enriches our understanding of thecomposition and distribution in China.

Ostropales; Graphidaceae; Lichenized fungi; Taxonomy

10.11926/jtsb.4625

2022–02–24

2022–03–09

国家自然科学基金项目(31750001)资助

This work was supported by the National Natural Science Foundation of China (Grant No. 31750001).

陈乐雯(1997年生)，女，硕士研究生，研究方向为地衣生物学，E-mail: 978064405@qq.com

. E-mail: zfjia2008@163.com