50%腈吡螨酯·联苯肼酯悬浮剂高效液相色谱分析方法研究

张 强，王莹莹，吴 培

(山东省农药科学研究院，山东 济南 250100)

1 前言

腈吡螨酯(Cyenopyrafen，CAS号：560121-52-0，分子式：C24H31N3O2)[1-2]是日产化学研发的吡唑类杀螨剂，2008年首次获得登记。腈吡螨酯通过代谢转化成羟基化合物，其可进而作用于呼吸系统的电子传递链，通过扰乱琥珀酸脱氢酶的作用，从而抑制线粒体正常的功效，达到防治的效果。腈吡螨酯具有低毒、高效、杀螨谱广的优点，可用于防治果树、茶树、蔬菜上的各种害螨。

联苯肼酯(Bifenazate，CAS号：149877-41-8，分子式：C17H20N2O3)，其属于非内吸性杀螨剂，作用于螨类中枢神经传导系统γ-氨基丁酸受体，主要是触杀作用。防治植食性螨类，主要用于果树、观赏植物及棉花和玉米田[3]。

科学合理混用农药具有延缓病虫抗药性产生、扩大防治范围、降低成本、提升防治效果、减少劳动成本等优点，农药混配剂的研究实际上是农药应用技术的延伸[4]。实际生产中经常把不同作用机制的农药混配在一起使用来提高防治效果。

目前国内有关联苯肼酯[5-8]及腈吡螨酯[9]的分析方法已有报道，但有关腈吡螨酯·联苯肼酯复配制剂的分析方法未见报道。本文采用高效液相色谱法，对50%腈吡螨酯·联苯肼酯悬浮剂中有效成分同时进行定量分析。该方法操作简便、快速、准确，分离效果好，准确度和精密度均能达到定量分析的要求。

2 试验部分

2.1 试剂和溶液 乙腈(色谱纯)；超纯水(电阻率18.2 MΩ·cm，25℃，现配现制)；腈吡螨酯标样(质量分数97.3%)，联苯肼酯标样(质量分数99.3%)；50%腈吡螨酯·联苯肼酯悬浮剂。

2.2 主要仪器 高效液相色谱仪：岛津LC-20AT型，具有二极管阵列检测器和自动进样器，岛津色谱工作站；超纯水制备系统：青岛富勒姆超纯水机；色谱柱：250 mm×4.6 mm(id)不锈钢柱，内装Eclipse XDB-C185μm填充物；电子天平：奥豪斯DV215CD型，精确至0.000 01 g。

2.3 液相色谱操作条件 流动相：ψ(乙腈∶水)=68∶32；流量：1.0 mL/min；柱温：40℃；检测波长：280 nm；进样体积：5 μL；保留时间：腈吡螨酯约25.2 min、联苯肼酯约6.6 min。

腈吡螨酯及联苯肼酯标样和50%腈吡螨酯·联苯肼酯悬浮剂的高效液相色谱图(图1、2)。

2.4 测定步骤

2.4.1 标样溶液的配制 称取腈吡螨酯标样0.02 g(精确至0.000 01 g)，联苯肼酯标样0.03 g(精确至0.000 01 g)，置于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀。

2.4.2 试样溶液的配制 称取含腈吡螨酯0.02 g的试样(精确至0.000 01 g)，置于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀。

图1 腈吡螨酯·联苯肼酯标样高效液相色谱图

图2 50%腈吡螨酯·联苯肼酯悬浮剂高效液相色谱图

2.4.3 测定 在上述操作条件下，待色谱仪基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2针标样溶液的响应值相对变化<1.5%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

2.4.4 计算 试样中腈吡螨酯(联苯肼酯)的质量分数ω(%)，按式(1)计算：

(1)

式中：

A1──标样溶液中腈吡螨酯(联苯肼酯)峰面积的平均值；

A2──试样溶液中腈吡螨酯(联苯肼酯)峰面积的平均值；

m1──腈吡螨酯(联苯肼酯)标样的质量，g；

m2──试样的质量，g；

P──标样中腈吡螨酯(联苯肼酯)的质量分数，%。

3 结果与讨论

3.1 色谱条件的选择 通过高效液相色谱仪的光谱数据采集功能，获得腈吡螨酯、联苯肼酯的紫外波长扫描图(图3、4)。综合考虑助剂、溶剂的波长干扰及腈吡螨酯、联苯肼酯的响应值，经过对照实验，选择280 nm波长时，两者均有较理想的吸收，且吸收比例恰当，溶剂干扰弱，各种杂质不影响主成分的测定。因此，综合考虑各种因素，将检测波长定为280 nm。

色谱柱选择常规的Eclipse XDB- C18反相柱。依据腈吡螨酯、联苯肼酯物化性质，用乙腈作为溶剂溶解样品，并选择乙腈和水作为流动相。将流动相按不同比例在色谱柱上进行试验，最终确定流动相为ψ(乙腈∶水)=68∶32，在流速1.0 mL/min时，有效成分与杂质能得到很好的分离，峰形对称，基线平稳，能在短时间能得到满意的分析结果，提高了工作效率。

图3 腈吡螨酯紫外吸收图谱

图4 联苯肼酯紫外吸收图谱

3.2 分析方法的特异性鉴定 按照2.4.1和2.4.2中的方法分别配制标样溶液和试样溶液，按照方法对腈吡螨酯和联苯肼酯进行峰纯度分析。结果表明结果显示腈吡螨酯特异性-标样溶液中未检测到不纯物，标样溶液中最小峰纯度相似度为1.000 000；联苯肼酯特异性-标样溶液中未检测到不纯物，标样溶液中最小峰纯度相似度为1.000 000；腈吡螨酯特异性-试样溶液中未检测到不纯物，试样溶液中最小峰纯度相似度为1.000 000，联苯肼酯特异性-试样溶液中未检测到不纯物，试样溶液中最小峰纯度相似度为1.000 000，表明特异性符合要求。

图5 标样溶液峰纯度图谱

3.3 分析方法的线性相关性试验 称取0.020 45 g腈吡螨酯、0.031 91 g联苯肼酯标样置于25 mL容量瓶中，使用乙腈溶解至刻度，为标样母液。分别移取1.0 mL、3.0 mL、5.0 mL、7.0 mL标样母液分别至10 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度作为线性相关前4个点，标样母液作为线性相关第5个点。以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制校正曲线。试验测得腈吡螨酯线性方程为Y=1 054 039X-23 313，相关系数为1.000 0；联苯肼酯线性方程为Y=854 030X+62 567，相关系数为0.999 8。结果表明腈吡螨酯、联苯肼酯在测试的质量浓度范围内线性关系良好。

图6 试样溶液峰纯度图谱

3.4 分析方法的精密度试验 从同一产品中准确称取5个试样，在上述色谱操作条件下进行分析，测得腈吡螨酯和联苯肼酯的标准偏差分别为0.10和0.14，变异系数分别为0.50%和0.48%(表1)。可见该方法的精密度能满足定量分析要求。

表1 分析方法的精密度试验结果

3.5 分析方法的准确度试验 从50%腈吡螨酯·联苯肼酯悬浮剂中制剂空白称取5个试样，分别加入一定量的腈吡螨酯(97.3%)和联苯肼酯标样(99.3%)，在上述色谱操作条件下进行分析，测得腈吡螨酯和联苯肼酯的平均回收率分别为100.98%和100.67%(表2)。

表2 分析方法的准确度试验结果

4 结论

试验建立了高效液相色谱法检测50%腈吡螨酯·联苯肼酯悬浮剂中有效成分的分析方法。试验结果表明，腈吡螨酯、联苯肼酯在测试浓度范围内线性关系良好，方法准确度和精密度较高，具有操作简便、快速的特点，适用于产品质量控制。