甲状腺乳头状癌中IFI6的表达与临床意义

韦 芳 陈 罡 蒋洪棉 肖小月

1.广西医科大学第一附属医院病理科，广西南宁 530000；2.南宁市第一人民医院病理科，广西南宁 530000

甲状腺癌是人类内分泌系统常见恶性肿瘤，以甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）为主，占85%～90%，其发病率居全球第9 位，好发于青少年女性，且易复发，易转移[1]。近年来，我国PTC 发病率呈明显上升趋势，且患者五年总体生存率（84.3%）与美国仍存在较大差距（98.4%）[2]。因此，需要进一步研究与PTC 相关的分子标志物，探寻特异性的诊疗及预后评估分子标志物。干扰素诱导蛋白6（interferon-inducible protein 6，IFI6）定位于线粒体，是最早鉴定出的干扰素刺激基因（interferon-stimulated genes，ISGs）之 一。IFI6 编码的蛋白质在抗凋亡、抗病毒等方面起重要作用[3]。GEPIA 和Oncomine 数据库显示IFI6 mRNA 在多种肿瘤疾病中表达明显上调，如胃癌、宫颈癌、乳腺癌等。然而，与PTC 相关的研究较少。本研究旨在通过免疫组化法检测IFI6 蛋白在PTC 组织中的表达，并探讨其表达与预后的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2018 年8 月至2020 年8 月在南宁市第一人民医院病理科确诊为PTC 的77 例组织标本及其对应癌旁组织。其中男17 例，女60 例；年龄20 ～82 岁，平均（46.70±13.20）岁。根据美国癌症联合委员会（American Joint Committeeon Cancer，AJCC）第8 版癌症分期手册中分化型甲状腺癌的分期标准[4]，将患者分为≥55 岁和＜55 两组；病理分期I 期69 例，Ⅱ期7 例，无Ⅲ、Ⅳ期病例，1 例淋巴结转移情况记录不详，无法分期；经典型PTC 37 例，微小型34 例，滤泡亚型5 例，透明型1 例。所有病例的HE 切片均经两位高年资病理科医师复诊。本研究已通过医院医学伦理委员会批准（伦理号：2021-063-01）。

纳入标准：初发患者；原发肿瘤；术前未进行放化疗和内分泌治疗的患者；术后病理诊断为PTC的患者；临床资料完整的患者；切片大小满足本实验要求的患者。排除标准：复发患者；转移癌；其他类型PTC 患者。

1.2 材料与方法

1.2.1 主要试剂 IFI6 兔抗多克隆抗体（Biorbyt公司，批号：orb247291）；即用型快捷免疫组化MaxVisionTM3HRP 试剂盒（福州迈新生物技术开发有限公司，批号：2008175220G）。

1.2.2 方法 3 μm 薄切石蜡切片经65℃恒温箱烤片2 h，脱蜡至水。免疫组化染色采用SP 两步法，严格按照试剂盒说明书操作。用已知阳性组织作为阳性对照，以PBS 缓冲液代替一抗作为阴性对照。

1.2.3 结果判读 胞浆中出现浅黄色至棕褐色颗粒为IFI6 蛋白表达阳性。由两名高年资病理科医师进行双盲阅片，并对阳性细胞百分比和染色强度进行评分。阳性细胞百分比评分：无表达、＜10%、10%～35%、36%～75%、＞75%各计0、1、2、3、4 分。染色强度评分：胞质无着色或基本无着色、浅黄色、棕黄色、棕褐色各计0、1、2、3 分[5]。两者乘积为总分；若两人最终评分不一致，则取其平均分。总分0 ～3 分为低表达，4 ～12 分为高表达。

1.3 Kaplan-Meier plotter在线分析

利用Kaplan-Meier plotter 分 析IFI6 mRNA 表达水平与甲状腺癌患者预后的关系。检索条件：①IFI6；②auto select best cutoff；③OS 和RFS；④thyroid carcinoma。

1.4 统计学方法

应用SPSS 19.0 统计学软件进行数据处理，采用秩和检验比较IFI6 蛋白在PTC 与癌旁组织中的表达差异；采用χ2检验和Fisher 精确概率法分析IFI6 蛋白表达与患者临床特征的关系；采用GraphPad Prism v7 绘图软件进行作图。所有结果均采用双侧检验，以P＜ 0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 IFI6蛋白在PTC及癌旁组织中的表达

IFI6 蛋白阳性物质定位于细胞质，呈浅黄至棕褐色颗粒染色，主要表达于PTC 组织中，部分表达于乳头样增生甲状腺组织、淋巴滤泡及嗜酸性粒细胞内。IFI6 蛋白在PTC 组织中的表达显著高于癌旁组织[77 例PTC：4.5（3.0，8.0）；77 例癌旁：1.0（0.0，3.0），Z=7.236，P=0.000]，见图1。

图1 IFI6 蛋白在PTC 与癌旁组织中的表达（免疫组化SP 法，100×）

2.2 IFI6蛋白表达与PTC患者临床特征单因素分析

IFI6 蛋白表达与PTC 患者年龄有关，＜55 岁者表达显著高于≥55 岁者（P＜ 0.05）。IFI6 蛋白表达与性别、合并桥本氏甲状腺炎（HT）、肿瘤直径、病灶位置、病灶数目、淋巴结转移、PTC 亚型及病理分期均无关（P＞ 0.05），见表1。

表1 IFI6蛋白表达与PTC患者临床特征单因素分析

2.3 IFI6与PTC患者预后的关系

Kaplan-Meier plotter 在线分析结果显示，IFI6mRNA 高表达者预后较好，其中总生存期的HR为0.358（logrankP=0.035），无复发生存期的HR为0.316（logrankP=0.002），见图2。

图2 PTC 组织中IFI6 mRNA 表达的预后价值

3 讨论

IFI6 是一种ISGs，可被α 和β 干扰素高度诱导[3]。IFI6 在胃癌、乳腺癌、黑色素瘤、食管鳞状细胞癌等多种肿瘤中表达升高，且可诱导肿瘤细胞对他莫昔芬、顺铂、紫杉醇耐药[6-7]。有研究表明，降低IFI6 表达，可抑制舌鳞状细胞癌的生长与转移[8]、减少胰腺癌小鼠肺和肝脏转移结节的数量和面积[9]；这揭示IFI6 用于靶向治疗的潜力。这些研究表明IFI6可能是影响肿瘤形成与发展的关键癌基因。IFI6在肿瘤与正常组织中的差异表达，提示其可能对肿瘤性疾病有一定的区分能力。

目前，尚无文献报道IFI6 蛋白在PTC 组织中的表达情况，其生物学特性也未知。本研究通过免疫组化方法，显示IFI6 蛋白在PTC 组织中表达显著上调，提示IFI6 可能参与PTC 的形成。此外，IFI6 高表达与年龄显著相关。青少年和散发性结肠癌患者IFI6 表达水平显著高于健康成人[10]。＜55 岁的PTC 患者IFI6 蛋白表达水平显著高于≥55 岁者。AJCC 将PTC 分期的诊断年龄分界点由45 岁提至55 岁，主要是因为诊断年龄与预后息息相关。研究表明诊断年龄是PTC 预后的独立危险因素，≥55 岁的PTC 患者预后更差[11]。这与本研究结果相符。PTC 已成为美国青少年发病率最高的恶性肿瘤。与老年PTC 患者相比，青少年患者更易发生局部区域淋巴结转移、远处转移则少见、预后较好[12]。Kaplan-Meier 生存率分析表明IFI6 mRNA 高表达的PTC 患者生存期更长。本研究证据提示IFI6 高表达可能促进PTC 的发生，在肿瘤初期发挥促癌的作用，但随着肿瘤的演进，PTC 细胞可能出现时间上异质性，IFI6 高表达者反而获得更好的预后。其具体作用机制尚待进一步研究。

PTC 的病因至今未明，电离辐射是目前唯一一致认可的危险因素，它可导致DNA 单链断裂或双链断裂[13]。DNA 损伤可引起基因毒性应激，并通过环GMP-AMP 合酶-STING 信号轴激活Ⅰ型干扰素的JAK/STAT 信号通路，诱导IFI6 表达上调[14-15]。上调IFI6 可减少辐射后细胞凋亡和活性氧的产生，从而促进细胞存活与增殖[16]。IFI6 通过下调活性氧，促进癌细胞增殖与转移[5]。一项HT 和PTC 合并HT 的差异基因分析报告显示IFI6 与免疫和炎症功能、氧化应激和活性氧、DNA 损伤和修复、细胞周期和细胞凋亡有关[17]。综上，推测IFI6 可能通过Ⅰ型干扰素信号通路被激活，下调活性氧，促进PTC 的形成与发展。

然而，本文尚存在不足之处。本文样本量有限，IFI6 过表达趋势仍有待大样本、多中心研究证实。IFI6 在PTC 进展中的潜在作用及其机制亦有待深入探究。

综上所述，IFI6 蛋白在PTC 中表达显著升高，可能参与PTC 的发生、发展，有望成为PTC 潜在的诊疗和预后指标。