光激化学发光法检测儿童乙型肝炎核心抗体最佳临界值探讨

张嘉懿 郭文伟 沈永明 娜 仁 崔小健 司 萍

（天津市儿童医院检验科，天津 300134）

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）引起的传染病，主要经母婴、血液和性接触途径传播。儿童是HBV的易感人群，围生期感染和儿童感染是我国慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B，CHB）新增病例的主要来源[1]。乙型肝炎核心抗体（hepatitis B core antibody，HBcAb）是判定HBV既往感染的血清学指标[2]。目前，化学发光微粒子免疫测定法（chemiluminescence microparticle immunoassay，CMIA）和电化学发光法（electrochemiluminescence immunoassay，ECLIA）作为乙型肝炎血清标志物的常规检测方法已广泛应用于临床[3]，而光激化学发光法（light-initiated chemiluminescence assay，LiCA）是较新的检测方法。在实际工作中，我们发现用LiCA筛查儿童HBcAb假阳性结果较多。初筛试剂通常敏感性较高，会有一定比例的假阳性结果，但传染病项目出现假阳性结果可能会导致临床误判。在疾病流行率不同或免疫状态不同的人群中，传染病项目初筛结果阳性预测值>95%的临界值往往不同[4]。本研究拟探讨LiCA检测儿童HBcAb的最佳临界值，以针对不同S/CO值区间的检测结果进行确证试验。

1 材料和方法

1.1 研究对象

收集2019年1—3月天津市儿童医院、上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院、常州市儿童医院和上海市第一妇婴保健院检测后剩余的儿童静脉血血清样本448例，入组儿童中男313例、女135例，年龄9个月～15岁。

1.2 仪器与试剂

LiCA 500自动光激化学发光检测仪（嘉兴凯实生物科技股份有限公司），试剂（LiCA）和校准品购自博阳生物科技（上海）有限公司。ARCHITECT i2000全自动免疫分析仪（美国雅培公司）及配套试剂（CMIA）、校准品。cobas e602电化学发光免疫分析仪（瑞士罗氏公司）及配套试剂（ECLIA）、校准品。3个检测系统的检测结果均按照试剂盒说明书进行判定，阳性判定标准为：LiCA S/CO值≤1，CMIA S/CO值>1，ECLIA S/CO值≤1。

1.3 方法

同时采用LiCA和CMIA检测所有样本。LiCA和CMIA检测结果均阳性判定为阳性，均阴性判定为阴性，阴性、阳性不一致则采用ECLIA复测。CMIA和ECLIA检测结果均阳性判定为阳性，均阴性判定为阴性，阴性、阳性不一致则剔除。当ECLIA与CMIA检测结果一致时，以CMIA作为参考方法。

1.4 统计学方法

采用SPSS 23.0软件和GraphPad Prism 7软件进行统计分析和作图。采用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线评估LiCA检测HBcAb的最佳临界值、敏感性和特异性。采用Kappa一致性检验评价LiCA采用最佳临界值时HBcAb检测结果与参考方法的一致性。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 LiCA检测HBcAb结果及与参考方法的比较

448例样本中，LiCA、CMIA均阳性的样本有237例，均阴性的样本有184例，阴性、阳性不一致的样本有27例（LiCA单阳性23例、CMIA单阳性4例）。27例结果不一致样本用ECLIA复测，其中24例检测结果与CMIA结果一致，3例检测结果不一致的样本被剔除。

445例样本中，LiCA阳性258例，其中假阳性21例，阳性预测值为91.86%；阴性187例，其中假阴性3例，阴性预测值98.40%。以S/CO值=1作为临界值时，敏感性为98.75%，特异性为89.76%。LiCA和参考方法的阴、阳性例数以及LiCA的S/CO值分布见表1。

表1 不同S/CO值下LiCA和参考方法的阴性、阳性例数 例

2.2 LiCA不同临界值的阳性预测值

计算LiCA检测HBcAb不同临界值（S/CO值）下的阳性预测值。当S/CO值≤0.77时，LiCA检测HBcAb的阳性预测值>95%。见表2。

表2 不同临界值下LiCA 检测HBcAb的阳性预测值

2.3 LiCA的分析性能

ROC曲线分析结果显示，以参考方法为标准，LiCA检测HBcAb的曲线下面积（95%可信区间）为0.994（0.990～0.998），最佳临界值（S/CO值）为0.65，敏感性为95.42%，特异性为97.07%，Youden指数为0.924 9。见表3、图1。

图1 LiCA检测HBcAb的ROC曲线

2.4 采用最佳临界值时LiCA检测HBcAb的结果及其与参考方法的一致性

当采用最佳临界值（S/CO值=0.65）判定结果时，LiCA与参考方法的一致性极好[Kappa值（95%可信区间）为0.923（0.887～0.959），P<0.01]。用S/CO值=0.65重新评估LiCA的检测结果，共检出阳性235例，其中假阳性6例，阳性预测值为97.45%；检出阴性210例，其中假阴性11例，阴性预测值为94.76%。采用最佳临界值判断阴、阳性例数及S/CO值分布见表4。

表4 采用最佳临界值重新判定后LiCA和参考方法的阴性、阳性例数 例

3 讨论

乙型肝炎是全球性的公共卫生问题，我国HBV感染者约有7 000万例，儿童时期HBV感染更易发展为CHB，约有90%～95%的围生期感染和20%～30%的儿童期感染会发展成CHB[1]。HBcAb是判断HBV现症感染或既往感染的血清学指标，近年来在隐匿性HBV感染中被广泛应用[2]。

化学发光法具有灵敏度高、重复性好、自动化程度高、通量大等优点，已被广泛用于临床检测。涂少华等[5]采用LiCA检测了453例疑似HBV感染者乙型肝炎血清学标志物，结果显示LiCA与CMIA有较高的符合率。然而，本研究结果显示，LiCA检测HBcAb的阳性检出率较高，且大多阳性样本经补充试验证实为假阳性。本研究采用试剂盒声明的S/CO值=1.00作为阴、阳性判断的临界值时，LiCA检测HBcAb的假阳性率为8.14%，阳性预测值仅为91.86%。因此，有必要对LiCA检测儿童血清HBcAb的性能进行评估，以建立适用于儿童人群的该项目最佳临界值。本研究ROC曲线分析结果显示，LiCA 检测儿童血清HBcAb的曲线下面积为0.994，说明LiCA在儿童人群中的检测性能较为理想。通过计算最大Youden指数，得出LiCA检测儿童血清HBcAb的最佳临界值（S/CO值）为0.65，此时阳性预测值可达97.45%，即假阳性率仅为2.55%。对检测结果落在最佳临界值两侧的样本，实验室可分别设立相应的复检规则[6]。筛查试验的首要目的是避免漏检，因此对于S/CO值为0.65～1.00的样本，即使存在一部分假阳性结果，也应进行确认，避免漏掉真阳性样本。结果确认可以选择做确证试验、对患者进行随访检测、采用其他试剂检测等方法；必要时，几种方法可以互相补充应用[7]。

造成筛查试剂在特定人群中出现假阳性的原因很多，如在流行率较低的地区筛查丙型肝炎病毒抗体，即使试剂性能很好，也难以达到较高的阳性预测值；在筛查老年人群和孕产妇人群的梅毒抗体时，会出现假阳性率高于其他人群的情况[4]。LiCA筛查儿童HBcAb假阳性率偏高，原因可能为：1）与儿童HBcAb低流行率相关，随着乙型肝炎疫苗接种率的提高和母婴阻断的推广，近年来HBcAb阳性率在各年龄人群中均明显下降，1～18岁人群的HBcAb阳性率已降至5.99%，LiCA检测HBcAb阳性预测值偏低可能与儿童人群中的低流行率有关[2，8-9]；2）儿科患者感染性疾病较多，血清中的抗体，尤其是IgG类抗体的水平较高，可能会干扰LiCA的检测，出现一部分弱阳性结果；3）由于LiCA检测时无清洗步骤，可能较参考方法更易受样本中干扰物质的影响，本研究部分假阳性样本加入抗生物素试剂中和后复测为阴性，提示生物素干扰可能是LiCA检测产生假阳性的原因之一。

综上所述，厂商建立检测系统的临界值时选取人群通常覆盖范围较广，故试剂说明书声明的临界值不一定适用于特定人群。本研究建立的LiCA检测儿童血清HBcAb的最佳临界值可能更适用于儿童人群，可更准确地反映儿童人群中HBcAb的真实状态，也可为实验室设立更合理的复检规则提供依据。