饲喂甘草后低盐胁迫对尖吻鲈相关酶活性的影响

陈 旭,左 涛,周胜杰,杨 蕊,于 刚,秦传新,马振华

( 1.中国水产科学研究院 南海水产研究所 热带水产研究开发中心/三亚热带水产研究院,海南 三亚 572018; 2.农业农村部南海渔业资源开发利用重点实验室,广东 广州 510300 )

水环境作为鱼类生活的场所,其盐度对鱼类的存活、生长、代谢和非特异性免疫具有显著的影响[1-3]。诸多人为因素和自然因素都会引起盐度的变化,盐度的变化迫使鱼类机体作出应激反应,导致活性氧自由基的增多,若不能够及时清除会引起鱼体氧化损伤。鱼类机体为防止这种伤害,保持机体内环境的动态平衡,形成了特定的抗氧化防御体系,其防御体系由酶类和非酶类抗氧化物构成,过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶等是其主要代表。另外,Na+/K+-ATP酶,是鳃部重要的离子调节酶[4]。

甘草(Radix Glycyrrhizae)又名“国老”,主要活性成分为甘草黄酮、甘草酸、甘草次酸、甘草多糖、生物碱、三萜类化合物等[5],具有保护肝细胞、抗炎、抗氧化、抗病毒、抗血糖以及免疫调节等多种药理作用和生物学功能[6-10]。关于甘草及其活性成分对鱼类的作用,诸多学者通过伴饲投喂的方式,进行了相关的研究,如:甘草次酸对团头鲂(Megalobramaamblycephala)[11]幼鱼肠道消化酶活性和胴体组成的影响;甘草对黄金鲈(Percaflavescens)[12-13]的生长、生化、免疫以及组织病理学特征的影响;亚硝酸盐胁迫下,发酵甘草对斜带石斑鱼(Epinepheluscoioides)[14]幼鱼成活率、血液指标与抗氧化能力的影响。在水产养殖过程中合理地运用甘草,不仅可以避免病原菌的抗药性问题,还可以利用甘草纯天然的特性避免养殖水体中药物残留超标的问题[15]。

尖吻鲈(Latescalcarifer)别名金目鲈或红目鲈,属鲈形目鲈亚目尖吻鲈科,原产于印度-太平洋地区,为暖水广盐性鱼类。因其肉质好、生长快、抗逆强、营养高,且饲料营养的适应性强等优点,已成为热带、亚热带地区网箱和池塘养殖的热门鱼种[16-19]。随着无公害水产养殖技术的发展,对水产动物病害防治用药要求越来越高,许多常用抗生素类药物被列为禁用药物,因此替代药物的研究已成为刻不容缓的课题[20]。甘草具有纯天然的特性,对水体和鱼体均污染较小,可以避免化学药物以及抗生素等引发病原菌的抗药性问题。笔者之前的研究表明,饲料中添加甘草能提高尖吻鲈幼鱼的免疫力和鳃Na+/K+-ATP酶活性,并提高在低温胁迫下的生存能力[1]。为进一步探明饲喂甘草后尖吻鲈应对环境胁迫的能力,笔者在饲料中添加甘草投喂尖吻鲈56 d,探讨盐度胁迫前后尖吻鲈幼鱼相关酶活性的变化情况,以期为解析饲喂甘草后尖吻鲈对盐度骤变的适应性调节机制提供基础资料,促进尖吻鲈养殖产业的发展。

1 材料与方法

1.1 试验鱼与试剂

试验在中国水产科学研究院南海水产研究所热带水产研究开发中心(海南省陵水县)开展,尖吻鲈幼鱼初始平均体长(9.09±1.72) cm、平均体质量(13.89±2.50) g。添加甘草的饲料饲养尖吻鲈56 d后,其终末平均体长(11.49±1.39) cm、平均体质量(28.51±3.47) g,盐度胁迫试验开始前24 h禁食。过氧化氢酶、过氧化物酶、总超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、溶菌酶、Na+/K+-ATP酶活性,丙二醛含量和总抗氧化能力采用微板法测定(南京建成生物工程研究所)。试验淡水为曝气24 h后的自来水,养殖过程中的水质指标为:pH 7.15、氨氮0 mg/L、亚硝态氮0 mg/L。饲养海水为经过砂滤后的自然海水,主要水质指标为:pH 7.50、氨氮<0.01 mg/L、亚硝态氮<0.02 mg/L。

1.2 饲养饲料的配制

饲料中甘草粉的添加量分别为0(对照组)、10、30、50 g/kg,共4组。甘草粉购自亳州市德永堂生物科技有限公司。饲养饲料自行制作,严格把控质量。所有饲料原料粉碎过80目筛后,按配方比例加入各原料和水混匀,制成粒径3.0 mm的颗粒,晒干后放入-20 ℃冰箱中保存备用。饲料配方及成分参考文献[1]。

1.3 试验方法与样品采集

每组3个平行,每个平行40尾鱼,养殖采用500 L玻璃纤维桶。试验期间对尖吻鲈幼鱼进行饱食投喂,日投喂2次(9:00、16:00),投喂1 h后吸出残饵和粪便。每隔5 d换水1次,不间断充气,养殖周期为56 d。养殖结束后,依据预试验结果,每桶选取体表光滑、无损伤、游动活泼、反应机敏、摄食良好的尖吻鲈幼鱼10尾,由养殖玻璃纤维桶转移至室内100 L塑料桶内进行淡水胁迫试验。桶内自来水体积约为40 L,胁迫时长为24 h,不间断充气。试验水温为自然水温(28.5 ℃),玻璃纤维桶养殖海水盐度为32.1。

试验结束后,为避免捞取应激,直接滴入丁香酚至塑料桶中进行短暂麻醉,断尾取血,保存于离心管中,4 ℃静置24 h。再取肝脏和鳃等部位,于-80 ℃冰箱中冻存备用。解冻后用DREAMEL研磨仪研磨肝脏和鳃,再放入EXPERT 18K-R冷冻离心机于4 ℃、2500 r/min(离心半径6.88 cm)离心10 min,取上清液用于酶活性的测定。所有测定均采用南京建成生物工程研究所试剂盒测定,分别为过氧化氢酶试剂盒(产品序号A007-1-1)、总超氧化物歧化酶试剂盒(产品序号A001-1-1)、谷胱甘肽过氧化物酶试剂盒(产品序号A005-1-2)、过氧化物酶试剂盒(产品序号A084-1-1)、丙二醛试剂盒(产品序号A003-1-1)、溶菌酶试剂盒(产品序号A050-1-1)、总抗氧化能力试剂盒(产品序号A015-1-2)以及超微量Na+/K+-ATP酶试剂盒(产品序号A070-2-1)。严格按照试剂盒提供的说明书进行试验操作。在多功能酶标仪(美国伯腾Biotek Synergy H1)中测定吸光值,参照试剂盒说明书中的计算公式换算成相应含量或酶活性。

1.4 数据统计

试验数据利用SPSS 19.0和Excel 2016软件进行统计分析与绘图,并进行单因素方差分析,各试验组间数据进行邓肯多重比较,当P<0.05时为差异显著,结果用平均值±标准差表示。

2 结 果

2.1 血清过氧化氢酶、总超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、溶菌酶活性,丙二醛含量和总抗氧化能力

甘草对尖吻鲈幼鱼盐度胁迫前后血清过氧化氢酶活性的影响见图1a。胁迫前、后相比,胁迫后除30 g/kg添加组差异不显著外,其他各组过氧化氢酶活性均显著高于胁迫前各组(P<0.05);胁迫后,10 g/kg添加组过氧化氢酶活性显著高于对照组和50 g/kg添加组,30 g/kg添加组过氧化氢酶活性显著高于对照组(P<0.05);胁迫前,30 g/kg添加组过氧化氢酶活性为最高,均显著高于其他各组(P<0.05),10 g/kg添加组和50 g/kg添加组过氧化氢酶活性显著高于对照组(P<0.05)。

甘草对尖吻鲈幼鱼盐度胁迫前后血清总超氧化物歧化酶活性的影响见图1b。胁迫后对照组和10 g/kg添加组总超氧化物歧化酶活性显著低于胁迫前,而30 g/kg添加组和50 g/kg添加组差异不显著(P>0.05);胁迫后,除50 g/kg添加组血清总超氧化物歧化酶活性显著高于30 g/kg添加组外,其他各组间均差异不显著(P>0.05);胁迫前各组总超氧化物歧化酶活性差异不显著(P>0.05)。

甘草对尖吻鲈幼鱼盐度胁迫前后血清谷胱甘肽过氧化物酶活性的影响见图1c。胁迫后血清谷胱甘肽过氧化物酶活性均显著低于胁迫前(P<0.05);胁迫后,10 g/kg添加组谷胱甘肽过氧化物酶活性显著高于其他各组,其他各组间差异均不显著(P>0.05);胁迫前,30 g/kg添加组谷胱甘肽过氧化物酶为最高,与50 g/kg添加组差异不显著,显著高于对照组和10 g/kg添加组(P<0.05)。

甘草对尖吻鲈幼鱼盐度胁迫前后血清丙二醛含量的影响见图1d。胁迫后血清丙二醛含量均显著低于盐度胁迫前(P<0.05);胁迫后,30 g/kg添加组与50 g/kg添加组差异不显著,均显著低于对照组和10 g/kg添加组(P<0.05);胁迫前,10 g/kg添加组丙二醛含量最高,显著高于30 g/kg添加组和50 g/kg添加组(P<0.05),对照组显著高于30 g/kg添加组(P<0.05)。

图1 甘草对尖吻鲈幼鱼盐度胁迫前后血清过氧化氢酶、总超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、溶菌酶活性和丙二醛以及总抗氧化能力的变化Fig.1 Changes in activities of serum catalase, total superoxide dismutase, glutathione peroxidase and lysozyme, contents of malondialdehyde, and total antioxidant capacity of juvenile Asian seabass L. calcarifer fed diets containing Radix Glyeyrrhizae and exposed to low salinity stress不同字母表示各组间存在显著差异(P<0.05),星号表示胁迫前后存在显著差异(P<0.05);下同.Means with different letters are significant differences among groups (P<0.05), and asterisks indicate significant differences under stress (P<0.05); et sequentia.

甘草对尖吻鲈幼鱼盐度胁迫前后血清溶菌酶活性的影响见图1e。胁迫后除50 g/kg添加组差异不显著外,其他各组血清溶菌酶活性均显著低于胁迫前(P<0.05);胁迫后,50 g/kg添加组溶菌酶活性为最高,均显著高于其他各组(P<0.05),10 g/kg添加组与30 g/kg添加组差异不显著,均显著高于对照组(P<0.05);胁迫前,10 g/kg添加组与50 g/kg添加组差异不显著,均显著低于对照组和30 g/kg添加组(P<0.05)。

甘草对尖吻鲈幼鱼盐度胁迫前后血清总抗氧化能力的影响见图1f。除10 g/kg添加组差异不显著外,胁迫后血清总抗氧化能力均显著高于胁迫前各相应组(P<0.05);胁迫前后,总抗氧化能力变化基本一致,均随着甘草含量的增加逐渐升高;胁迫后,50 g/kg添加组总抗氧化能力显著高于其他各组,30 g/kg添加组显著高于对照组(P<0.05);胁迫前,50 g/kg添加组总抗氧化能力显著高于对照组和10 g/kg添加组,10 g/kg添加组与30 g/kg添加组差异不显著,均显著高于对照组(P<0.05)。

2.2 肝脏过氧化氢酶、总超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化物酶活性,丙二醛含量和总抗氧化能力

甘草对尖吻鲈幼鱼盐度胁迫前后肝脏过氧化氢酶活性的影响见图2a。胁迫后各组肝脏过氧化氢酶活性均显著高于胁迫前(P<0.05);胁迫后,各组过氧化氢酶活性无显著性差异(P>0.05);胁迫前,10 g/kg添加组过氧化氢酶活性显著高于对照组和50 g/kg添加组(P<0.05),30 g/kg添加组显著高于对照组(P<0.05)。

甘草对尖吻鲈幼鱼盐度胁迫前后肝脏总超氧化物歧化酶活性的影响见图2b。胁迫后除50 g/kg添加组差异不显著外,其他各组肝脏总超氧化物歧化酶活性均显著高于胁迫前(P<0.05);胁迫后,对照组总超氧化物歧化酶活性显著高于30 g/kg添加组和50 g/kg添加组,10 g/kg添加组与30 g/kg添加组差异不显著,均显著高于50 g/kg添加组(P<0.05);胁迫前,各组总超氧化物歧化酶活性无显著性差异(P>0.05)。

甘草对尖吻鲈幼鱼盐度胁迫前后肝脏谷胱甘肽过氧化物酶活性的影响见图2c。胁迫后各组肝脏谷胱甘肽过氧化物酶活性均显著低于胁迫前(P<0.05);胁迫后,各组肝脏谷胱甘肽过氧化物酶活性差异不显著(P>0.05);胁迫前,除对照组谷胱甘肽过氧化物酶活性显著高于其他各组外,其他各组间差异均不显著(P>0.05)。

甘草对尖吻鲈幼鱼盐度胁迫前后肝脏过氧化物酶活性的影响见图2d。胁迫后各组肝脏过氧化物酶活性均显著高于胁迫前(P<0.05);胁迫后,除50 g/kg添加组过氧化物酶活性显著低于对照组外,其他各组间均差异不显著(P>0.05);胁迫前,除10 g/kg添加组过氧化物酶活性显著高于对照组和50 g/kg添加组外,其他各组间均差异不显著(P>0.05)。

甘草对尖吻鲈幼鱼盐度胁迫前后肝脏丙二醛含量的影响见图2e。胁迫后各组肝脏丙二醛含量均显著高于胁迫前(P<0.05);胁迫后,除10 g/kg添加组丙二醛含量显著高于对照组外,其他各组间均差异不显著(P>0.05);胁迫前,除50 g/kg添加组丙二醛含量显著低于其他各组外,其他各组间差异均不显著(P>0.05)。

甘草对尖吻鲈幼鱼盐度胁迫前后肝脏总抗氧化能力的影响见图2f。胁迫后肝脏总抗氧化能力均显著高于胁迫前(P<0.05);胁迫后,总抗氧化能力随甘草含量的增加均显著逐渐降低(P<0.05);胁迫前,30 g/kg添加组总抗氧化能力为最高,均显著高于其他各组,10 g/kg添加组与50 g/kg添加组差异不显著,均显著高于对照组(P<0.05)。

图2 甘草对尖吻鲈幼鱼盐度胁迫前后肝脏过氧化氢酶、总超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化物酶活性和丙二醛含量以及总抗氧化能力的变化Fig.2 Changes in activities of liver catalase, total superoxide dismutase, glutathione peroxidase, and peroxidase, malondialdehyde content and total antioxidant capacity of juvenile Asian seabass L. calcarifer fed diets containing Radix Glyeyrrhizae and exposed to low salinity stress

2.3 鳃Na+/K+-ATP酶活性

甘草对尖吻鲈幼鱼盐度胁迫前后鳃Na+/K+-ATP酶活性的影响见图3。胁迫后,除10 g/kg添加组差异不显著外,其他各组鳃Na+/K+-ATP酶活性均显著低于胁迫前各相应组(P<0.05);胁迫后,除50 g/kg添加组Na+/K+-ATP酶活性显著高于对照组外,其他各组间差异均不显著(P>0.05);胁迫前,30 g/kg添加组Na+/K+-ATP酶活性为最高,与50 g/kg添加组相比差异不显著,显著高于对照组和10 g/kg添加组(P<0.05),50 g/kg添加组与对照组相比,差异不显著,显著高于10 g/kg添加组(P<0.05)。

图3 甘草对尖吻鲈幼鱼盐度胁迫前后鳃Na+/K+-ATP酶活性的变化Fig.3 Changes in activity of Na+/K+-ATPase in gill of juvenile Asian seabass L. calcarifer fed diets containing Radix Glyeyrrhizae and exposed to low salinity stress

3 讨 论

3.1 饲喂甘草对尖吻鲈幼鱼在低盐胁迫下血清抗氧化能力的影响

鱼类属于低等脊椎动物,当受到盐度环境刺激时,其非特异性免疫系统在应对逆环境应激时起主导作用,鱼类相关抗氧化酶活性会发生改变,以响应盐度应激反应。这些酶在一定程度上能够反映动物在不同环境条件下的生理状况,可以作为衡量动物是否受到外界环境胁迫的重要生理指标[21-23]。过氧化氢酶可以通过催化机体中的H2O2分解为H2O和O2,从而减轻和防止自由基对细胞的毒害[24];总抗氧化能力则包含了组织或体液中非酶和酶促反应所产生的总抗氧化水平[25];总超氧化物歧化酶是一种抗氧化金属酶,在平衡机体氧化反应中起到重要作用;丙二醛为膜脂过氧化产物,该物质水平增加可加剧膜损伤等[26]。同时,血清生化水平是反映动物对环境应激时体内机能状态变化的一个重要指标,在鱼类试验研究中被广泛采用。盐度突变胁迫下,驼背鲈(Cromilepptesaltivelis♀)×鞍带石斑鱼(Epinepheluslanceolatus♂)杂交子代幼鱼血清中的超氧化物歧化酶、过氧化氢酶在第3、7天活性均显著高于其他同时期各组,丙二醛在第7天显著升高[27];盐度胁迫后,随着时间的延长,盐度9组黄姑鱼(Nibeaalbiflora)幼鱼血清丙二醛含量增加后逐渐降低,盐度16组血清丙二醛含量呈降低后逐渐恢复趋势[28];在不同盐度水平中饲养56 d后,卵形鲳鲹(Trachinotusovatus)幼鱼血清丙二醛含量和溶菌酶活性无明显差异[29];随着盐度胁迫时间的增加,盐度5组黄条(Seriolaaureovittata)幼鱼血清超氧化物歧化酶活性逐渐降低,而盐度10组却逐渐升高[30]。这些研究表明,鱼类幼鱼血清各相关抗氧化酶活性随着盐度胁迫方式和程度的不同而发生相应的变化,这些变化间不存在明显的线性关系。

本试验中,溶菌酶活性和丙二醛含量在低盐胁迫前变化无规则,胁迫后溶菌酶活性随甘草添加量的增加而升高;无论是否存在盐度胁迫,对照组过氧化氢酶活性和总抗氧化能力均随甘草添加量的增加有不同程度升高;同时,谷胱甘肽过氧化物酶活性在胁迫前也有不同程度升高。这说明饲料中添加甘草投喂尖吻鲈对幼鱼血清抗氧化酶活性和抗氧化能力有增强作用。

从盐度胁迫前后指标变化情况看,幼鱼血清过氧化氢酶活性和总抗氧化能力均有不同程度升高,而谷胱甘肽过氧化物酶活性和丙二醛含量显著降低,同时,除30 g/kg添加组和50 g/kg添加组总超氧化物歧化酶活性及50 g/kg添加组溶菌酶活性胁迫前后差异不显著外,其他各组在胁迫后显著降低。添加甘草后,低盐胁迫下尖吻鲈幼鱼血清过氧化氢酶活性升高以清除过多活性氧自由基,避免低盐胁迫对机体造成损伤;而谷胱甘肽过氧化物酶、溶菌酶活性和丙二醛含量降低的原因是低盐的应激反应产生了大量的活性氧自由基,机体为清除这些活性氧自由基,消耗了血清中大量的谷胱甘肽过氧化物酶、丙二醛和溶菌酶。同时说明,低盐胁迫下添加甘草能增强尖吻鲈幼鱼血清抗氧化能力。

3.2 饲喂甘草对尖吻鲈幼鱼在低盐胁迫下肝脏抗氧化能力的影响

在鱼类正常的生命活动中,有机体内的活性氧自由基处于一种不断产生,又不断被清除的动态平衡状态,当鱼类受到外界环境刺激时可导致细胞内活性氧自由基增多,过量的活性氧自由基可损伤DNA、细胞膜结构和蛋白质等在水生动物中的功能。为了清除细胞中过多活性氧自由基,鱼类抗氧化防御体系作出反应,通过氧化还原反应进行多层次应激性调节和信号转导,其相关抗氧化酶活性发生相应改变,以消除体内过多活性氧自由基[31-33]。肝脏作为重要的代谢器官,是鱼类解毒的主要场所[34]。如克氏双锯鱼(Amphiprionclarkii)幼鱼在盐度胁迫24 h内肝脏过氧化氢酶活性呈上升趋势,且盐度变化幅度越大酶活性增强的幅度越大[35]。花鲈(Lateolabraxmaculatus)幼鱼在盐度胁迫下,肝组织中过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活性随盐度的增加而逐渐下降[36];相同盐度胁迫下,大鳞鲃(Luciobarbuscapito)肝组织谷胱甘肽过氧化物酶活性和丙二醛含量随胁迫时间的延长均呈先升后降再趋于稳定的变化趋势[37];随着低盐胁迫时间的延长,黄姑鱼幼鱼肝脏超氧化物歧化酶活性先升后降,而过氧化氢酶活性呈降低-升高-降低的变化,谷胱甘肽过氧化物酶活性出现了显著增强,且盐度越低变化越剧烈,总抗氧化能力在盐度16组呈现显著增强后减弱变化,而盐度9组总抗氧化能力显著减弱后维持在较低水平[28]。

本试验中,低盐胁迫前,幼鱼肝脏各抗氧化指标总体表现为:丙二醛含量在甘草最高添加组(50 g/kg添加)显著降低,过氧化氢酶、过氧化物酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性和总抗氧化能力随甘草添加量的增加均有不同程度升高。说明饲料中添加甘草投喂尖吻鲈对幼鱼肝脏抗氧化酶活性和抗氧化能力有增强作用。胁迫后,10 g/kg添加组丙二醛含量显著高于对照组,过氧化物酶、总超氧化物歧化酶活性和总抗氧化能力均不同程度低于对照组。说明投喂甘草后,由海水转移至淡水时,尖吻鲈幼鱼肝脏抗氧化酶活性和抗氧化能力面对胁迫表现能力不足。

由盐度胁迫前后指标变化情况可知,除甘草最高添加组(50 g/kg添加组)总超氧化物歧化酶活性差异不显著及谷胱甘肽过氧化物酶活性显著降低外,胁迫后的其他指标均显著高于胁迫前。这说明投喂甘草后,尖吻鲈幼鱼面对低盐胁迫时,迫使机体抗氧化系统作出反应,提高肝脏过氧化氢酶、过氧化物酶活性和丙二醛含量以及总抗氧化能力,以清除过多的活性氧自由基,避免低盐胁迫对机体造成损伤;而谷胱甘肽过氧化物酶活性降低是由清除过多的活性氧自由基消耗了大量的谷胱甘肽过氧化物酶所致。

3.3 饲喂甘草对尖吻鲈幼鱼在低盐胁迫下鳃 Na+/K+-ATP酶活性的影响

鳃不仅是鱼类的呼吸器官,还参与机体的氨氮排泄、渗透压调节等。Na+/K+-ATP酶是鳃组织泌氯细胞及细胞器的膜上存在的一种蛋白酶,其特征是参与细胞内外Na+与K+的主动跨膜转运,维持细胞内外Na+、K+和渗透压平衡。Na+/K+-ATP酶在鱼体渗透调节过程中起非常重要的作用,是研究广盐性鱼类渗透调控能力的一个重要指标[38-40]。因物种、胁迫方式、持续时间等的不同,鱼类鳃组织Na+/K+-ATP酶活性在盐度胁迫下的变化存在较大差异。花鲈在淡水化养殖阶段,鳃组织中Na+/K+-ATP酶活性呈先降后升的趋势,在盐度降到0之后的适应阶段,Na+/K+-ATP酶活性缓慢回升并趋于稳定[40];海水盐度由25突降至21、17和13后,大黄鱼(Larimichthyscrocea)鳃丝Na+/K+-ATP酶活性呈先升后降的变化趋势且降低幅度与盐度突降幅度正相关[41];采用逐步过渡法对大麻哈鱼(Oncorhynchusketa)幼鱼进行不同盐度驯化42 d后发现,鳃组织Na+/K+-ATP酶活性随着盐度的升高呈先升后降的趋势,且酶活性最高为盐度8组、最低为盐度24组[38]。

本试验中,除胁迫前10 g/kg甘草添加组低于对照组外,无论是否存在盐度胁迫,其他各甘草添加组的Na+/K+-ATP酶活性均高于对照组。说明在饲料中添加小剂量(10 g/kg)甘草抑制了尖吻鲈幼鱼鳃Na+/K+-ATP酶活性,而大剂量(30～50 g/kg)甘草则起增强作用。同时,面对低盐胁迫,在饲料中添加甘草能提高鳃Na+/K+-ATP酶活性。

从盐度胁迫前后指标变化情况看,除10 g/kg甘草添加组胁迫前后差异不显著外,其他组胁迫后鳃Na+/K+-ATP酶活性均显著低于胁迫前。说明低盐对饲喂甘草后的尖吻鲈幼鱼鳃Na+/K+-ATP酶活性具有显著的影响,低盐胁迫导致鳃ATP酶活性升高,增加鳃上皮细胞膜的通透性,加快Na+、Cl-等离子的外排,并将体内多余的盐离子排出体外,维持细胞内外Na+、K+和渗透压平衡,从而保证生命活动和能量代谢的正常进行[42-43]。

4 结 论

本试验中,饲喂甘草后,无论是否存在盐度胁迫,尖吻鲈幼鱼血清过氧化氢酶活性和总抗氧化能力对初始值(对照组)均有不同程度的升高;同时,谷胱甘肽过氧化物酶活性在胁迫前也有不同程度升高;从胁迫前后各指标变化情况看,除总超氧化物歧化酶活性在最高组(50 g/kg添加组)差异不显著和谷胱甘肽过氧化物酶活性显著降低外,尖吻鲈幼鱼肝脏胁迫后其他指标均显著高于胁迫前以及50 g/kg添加组,鳃Na+/K+-ATP酶活性显著高于对照组。这说明饲料中添加甘草可以显著增强尖吻鲈抗氧化、维持离子调节酶活性及抗环境胁迫的能力。但采用甘草原粉作为研究对象具有一定局限性,主要表现在其含有大量的无效成分,导致药效不稳定、结果难以重复等。同时,需要对甘草展开深入研究,探明是否存在其他物质参与调节,进一步深入探究物质与能量的运输机制以及分子信号的通路机制等。