非小细胞肺癌中PD-L1 免疫检查点表达与预后的关系研究

姚红方 赵艳红 任兆强 刘训超（通讯作者）

（菏泽市立医院呼吸与危重症医学科，山东 菏泽 274000）

肺癌是全球范围内造成死亡的主要原因之一，尤其是非小细胞肺癌（Non-Small Cell Lung Cancer，NSCLC），其5 年生存率仅为20%[1-2]。近年来，免疫治疗作为一种新的肺癌治疗手段逐渐得到人们的关注。PD-L1 是一种免疫检查点蛋白，在肺癌等恶性肿瘤中广泛表达。它的主要功能是抑制免疫细胞的激活和攻击肿瘤细胞。虽然ICIs 治疗的临床应用已取得了一定的成功，但其应用仍存在一些限制和挑战，如ICIs 治疗的反应缺乏预测性，ICIs 治疗后患者存在严重的副作用等[3]。免疫检查点的表达与ICIs 治疗的反应密切相关。PD-L1 表达是当前研究中最为广泛的免疫检查点表达标志物，其表达与治疗反应之间的关系并不明确。因此，研究其他免疫检查点的表达，为NSCLC 患者ICIs 治疗的预测和应用提供更全面、准确的指标，成为当前研究的重要方向。本研究，旨在探究多个免疫检查点的表达与NSCLC 患者预后的关系,报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2020 年1 月至2022 年1 月我院60 例非小细胞肺癌患者（均为无法手术治疗的患者）为研究对象。男35 例，女25 例，年龄49 岁～71岁，平均年龄（59.6±7.1）岁。所有患者均被诊断为非小细胞肺癌，并经过组织学检查确认。确诊时，所有患者均无法进行手术治疗。

1.2 方法 选取纳入研究的肿瘤组织标本，使用免疫组织化学（IHC）检测非小细胞肺癌（NSCLC）中PDL1 的表达方法如下：（1）组织样本处理。从NSCLC 组织中切取薄片。组织处理过程中应注意避免组织干燥、坏死和其他伤害。使用10%缓冲福尔马林（PFA）将切片固定，时间为16～24h。固定后的切片保存在70%乙醇中，并在制备切片前去除乙醇。（2）制备组织切片。将固定的NSCLC 组织切割成4～5um 厚度的切片，放置在含有组织胶原蛋白的玻片上。切片应保存在4℃冰箱中，避免在制备过程中产生水分。（3）抗体选择和优化。选择针对目标蛋白的高亲和力、特异性和灵敏度的抗体，优化抗体的浓度和染色时间等参数，以获得最佳的染色效果。（4）免疫组织化学（IHC）染色：将制备好的切片进行去蜡和抗原修复处理。将切片浸泡在2%的牛血清蛋白（BSA）中，加入适当浓度的抗体，允许其在切片上结合一段时间。使用二级抗体或酶标记的聚合物，对抗体进行检测。（5）成像和分析：切片被显微镜下的成像系统记录下来。可使用特定的软件对图像进行分析，以确定PD-1、PD-L1等表达水平。

1.3 观察指标 （1）PD-L1 表达与患者临床特征的相关性；（2）PD-L1 表达与生存期的关系；（3）PD-L1 表达与生存期和治疗反应的关系（95%置信区间：反映了比值比的不确定性，置信区间越窄，说明估计值越可靠）；（4）PD-L1 表达与生存期和治疗反应的关系。

1.4 统计学方法 通过SPSS 25.0 软件处理，符合正态分布的计量资料，即通过（±s）表示，组间对比用t检验；计数资料用[例（%）]表示，组间对比用χ2检验；P＜0.05 表明组间差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PD-L1 表达与患者临床特征的相关性 PD-L1表达水平在年龄、性别和吸烟史上存在一定差异。见表1

表1 PD-L1 表达与患者临床特征的相关性

2.2 PD-L1 表达与生存期的关系 PD-L1 表达水平高的患者平均生存期比表达水平低的患者短，并且具有更窄的95%置信区间。见表2

表2 PD-L1 表达与生存期的关系

2.3 PD-L1 表达与治疗反应的关系 PD-L1 表达水平高的患者治疗反应差异较大，与表达水平低的患者相比，其差异治疗反应的患者数明显增多。见表3

表3 PD-L1 表达与治疗反应的关系

3 讨论

非小细胞肺癌是一种具有高度异质性的肿瘤，其预后和治疗反应常常受到多种因素的影响。近年来，肿瘤免疫治疗（Tumor Immunotherapy）已成为了治疗非小细胞肺癌的重要方法之一。该治疗方法利用患者自身的免疫系统攻击肿瘤细胞，能在一定程度上提高治疗效果和生存率。其中，PD-L1 免疫检查点抑制剂（PD-L1 抗体）是肿瘤免疫治疗中的重要类别之一，已被广泛用于非小细胞肺癌的治疗。PD-L1 免疫检查点抑制剂并不是对所有患者都有效，其疗效在不同患者间存在较大差异。这可能与患者的免疫状态和其他治疗相关因素有关[4]。

本研究中，探讨了PD-L1 表达与预后的关系。结果PD-L1 表达水平在年龄、性别和吸烟史上存在一定差异，且非小细胞肺癌晚期患者中PD-L1 免疫检查点的表达水平与患者的生存期和治疗反应密切相关。PD-L1 表达水平在年龄、性别和吸烟史上存在一定的差异，可见需要为患者制定个性化的治疗方案；PD-L1 表达水平高的患者平均生存期比表达水平低的患者短，并且具有更窄的95%置信区间，表明PDL1 表达水平的高低与患者预后密切相关。PD-L1 表达水平高的患者差异治疗反应的患者数明显增多，表明PD-L1 表达水平的高低与患者治疗反应密切相关。PD-L1 高表达与更差的生存期和更好的治疗反应有关联，表明PD-L1 高表达可能意味着肿瘤细胞更容易逃避免疫系统的攻击。PD-L1 蛋白与PD-1 受体的结合可抑制免疫细胞的活性，降低对肿瘤细胞的攻击能力。因此，PD-L1 高表达可能会抑制免疫细胞的活性，导致肿瘤细胞更容易逃避免疫系统的攻击，导致更差的生存期。当使用PD-L1 抑制剂治疗时，PD-L1 高表达的患者可能会对该治疗作出更好的反应，因为这种治疗可逆转PD-L1 和PD-1 受体的结合，释放出被抑制的免疫细胞，增强免疫系统的攻击能力，这可能导致PD-L1 高表达组患者的更好治疗反应。基于以上结论，我们建议在制定非小细胞肺癌晚期患者的治疗方案时，应充分考虑PD-L1 表达水平的高低，以提高治疗效果和患者的预后。结果显示，PD-L1 免疫检查点可能是非小细胞肺癌治疗和预后的一个重要因素，值得进一步研究和探索[5]。未来的研究应该着重于揭示PD-L1 表达的调控机制和相互作用网络，及其与其他因素（如肿瘤突变负荷、T 细胞浸润、炎症等）之间的关系。

综上，PD-L1 表达水平在年龄、性别和吸烟史等临床特征上存在一定的差异，并且PD-L1 高表达与更差的生存期和更好的治疗反应有关联。因此，在制定个体化治疗方案时，应综合考虑患者的PD-L1 表达水平和其他临床特征，以获得更好地治疗效果和生存期。