子宫颈鳞状细胞癌组织中SIAH2、CARM1 的表达与意义

陈湧彧

（福建省漳浦县医院病理科 漳浦 363200）

子宫颈癌是原发于宫颈部位的恶性肿瘤，也是女性生殖道最为常见的妇科恶性肿瘤。根据2018 年世界卫生组织（WHO）发布，在全球范围内宫颈癌的发病率在10 万人中约有13 人，死亡率为每10 万中约有7 人[1]。近年来，随着我国健康教育、人乳头状瘤病毒（HPV）疫苗接种及宫颈癌筛查的加强，宫颈癌的发病率与死亡率已有明显下降趋势，但呈年轻化趋势发展。宫颈癌大多数为鳞癌，约占总发病率的90%[2]。目前，临床认为HPV 病毒持续感染是引起子宫颈癌的主要原因，且几乎所有的宫颈癌都与HPV感染有关，但单纯病毒感染无法促进肿瘤的全部进展[3]。因此，对子宫颈癌患者进行早期筛查并分析可能产生影响的因素对制定诊疗方案、改善患者预后具有重要意义。近年来，已有众多学者从基因、分子等方面研究子宫颈癌的发病机制，并分析子宫颈癌病变潜在的细胞与分子机制，这在后期治疗中具有重要指导作用[4]。SIAH2 属于E3 泛素连接酶，是临床应用较为广泛的肿瘤因子，可促进肿瘤细胞增殖，与恶性肿瘤的发生与发展密切相关。CARM1 属于蛋白质精氨酸甲基转移酶家族成员，在乳腺癌、结肠癌、前列腺癌等多种癌症中均可发挥促进作用，在DNA修复、mRNA 剪接、转录调控中具有重要价值[5]。鉴于此，本研究将探讨子宫颈鳞状细胞癌组织中SIAH2、CARM1 的表达及与临床特征间的关系。现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 前瞻性选取2020 年5 月至2022年5 月漳浦县医院收治的120 例子宫颈鳞状细胞癌患者为研究对象，年龄28～70 岁，平均年龄（46.78±4.31）岁；体质量指数（BMI）22.8～30.4 kg/m2，平均BMI（24.58±2.64）kg/m2；国际妇产科联盟（FIGO）分期：Ⅰ期 35 例，Ⅱ期 50 例，Ⅲ期 20 例，Ⅳ期 15例；病理分级：低分化71 例，中高分化49 例。本研究经院内医学伦理委员会批准（批准文号：福建省漳浦县医院伦理字2019000034 号）。

1.2 入组标准 纳入标准：子宫颈癌符合《中国子宫颈癌筛查及异常管理相关问题专家共识（二）》[6]中相关诊断标准，且经临床确诊为鳞状细胞癌；均签署知情同意书。排除标准：合并其他恶性肿瘤者；严重心、肝、肾等脏器功能不全者；合并严重自身免疫系统功能障碍者；合并凝血功能障碍者；认知功能及精神功能障碍依从性差者；入组前接受过相关放化疗及其他治疗者。

1.3 研究方法

1.3.1 SIAH2、CARM1 检测方法 取所有子宫颈鳞状细胞癌及癌旁子宫组织进行检查，癌旁组织需经临床形态学证实为正常子宫颈组织且无病变残留，具体方法如下：将子宫颈鳞状细胞癌组织及癌旁组织样本离体后取少量放入液氮后置入-80℃的环境中保存；采用免疫组化SP 法染色，所有组织需经10%的中性福尔马林固定并采用石蜡包埋，行4 μm厚度的连续切片；使用二甲苯脱蜡处理，梯度乙醇脱苯、水化，并采用高温高压下抗原修复，根据SP 试剂盒说明书进行对应染色处理。SIAH2、CARM1 采用磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffered Saline,PBS）进行3 次洗涤后使用封闭液封闭，分别购自上海西格生物科技有限公司、上海谷研实业有限公司。染色结果由两位经验丰富的病理医师进行阅片审核，每张切片随机选择5 个高倍视野进行观察，每个视野计数200 个肿瘤细胞。（1）按照阳性细胞百分比进行计分：无阳性细胞记0 分，阳性细胞数≤10%则记1分，11%≤阳性细胞数≤50%则记2 分，51%≤阳性细胞数≤80%则记3 分，阳性细胞数＞80%则记4分。（2）根据着色强度进行计分：若细胞未着色则计0 分，浅黄色计1 分，棕黄色计2 分，黄褐色记3 分。将两项得分相乘作为最终结果，若结果＜3 分则为阴性，若≥3 分则为阳性。

1.3.2 临床病理特征 统计所有患者的年龄（＜50岁，≥50 岁）、肿瘤直径（≤4 cm，＞4 cm）、分化程度（低分化，中高分化）、FIGO 分期（Ⅰ～Ⅱ期，Ⅲ～Ⅳ期）、肌层浸润深度（＜1/2，≥1/2）及有无淋巴结转移（有，无）等。

1.4 统计学方法 采用SPSS23.0 软件处理数据。计量资料以（）表示，采用t检验；计数资料以%表示，采用χ2检验；多因素采用Logistic 回归分析；P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 SIAH2、CARM1 表达情况 子宫颈鳞状细胞癌组织中SIAH2、CARM1 的阳性表达率明显较子宫颈鳞状细胞癌旁组织高，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表 1。

表1 子宫颈鳞状细胞癌中SIAH2、CARM1 表达情况对比[例（%）]

2.2 SIAH2、CARM1 表达与临床病理特征SIAH2、CARM1 通路相关蛋白阳性表达与年龄、肿瘤直径无关（P＞0.05），但可能与分化程度、肌层浸润深度、FIGO 分期、淋巴结转移有关（P＜0.05）。见表2。

表2 SIAH2、CARM1 表达与临床病理特征的单因素分析

2.3 多因素分析 由Logistic 回归分析结果得出，子宫颈鳞状细胞癌组织SIAH2、CARM1 阳性表达率在低分化、肌层浸润深≥1/2、FIGO 分期为Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结转移的患者中较高，差异有统计学意义（OR＞1，P＜0.05）。分别见表 3、表 4、表 5。

表4 SIAH2 表达与临床病理特征的多因素分析

表5 CARM1 表达与临床病理特征的多因素分析

3 讨论

子宫颈癌是女性生殖道最为常见的恶性肿瘤，由于该病早期多无明显症状表现，被确诊时多已至病情中晚期。因此寻找子宫颈癌发生、发展过程中相关基因改变不仅可为疾病早期的诊断提供意见，还可为后续的治疗方案制定提供参考。临床研究发现，肿瘤组织中相关细胞分子水平检测是目前诊断疾病的有效方式，临床部分癌组织细胞的增殖及侵袭均与相关因子的表达密切相关[7]。其中SIAH2、CARM1在临床多种恶性肿瘤中均有异常表达，但与子宫颈癌的关系报道鲜有。

SIAH2 为果蝇基因产物的类似物，其定位于3Q25 号染色体，编码蛋白SIAH2 拥有E3 泛素连接酶的活性，可参与底物蛋白泛素化与水解的作用对部分细胞功能造成影响，如细胞增殖、低氧化、信号通路的传导、神经中枢的调节等[8]。近年来，国内外学者研究发现，SIAH2 可扮演癌基因参与如肺癌、喉鳞状细胞癌、乳腺癌等癌症组织中均有过高表达，且随着病情恶性程度及病理分期的不断增高，SIAH2的阳性表达率也随之增加[9～10]。此外，SIAH2 在肿瘤的发展过程中具有明显促进作用，其N 端包含环域结构的催化区域，C 端则为高度保守的底物结合，环指区域与N 末端结合介导可引起侧支发芽因子同源物2（SPRY2）蛋白酶的讲解，实现细胞外调节蛋白激酶（ERK） 的磷酸化，促进血管的再生[11]。CARM1 属于蛋白质精氨酸甲基转移酶（Protein arginine Methyltransferase,PRMT）家族成员，其抑制剂不仅具有抗肿瘤活性的效果，还可提高T 细胞的抗肿瘤能力，对改善免疫微环境及提高机体抗肿瘤活性具有重要意义[12]。

本研究结果显示，SIAH2、CARM1 通路相关蛋白阳性表达与年龄、肿瘤直径无关，但可能与分化程度、肌层浸润深度、FIGO 分期、淋巴结转移有关。进一步经Logistic 回归分析结果得出，子宫颈鳞状细胞癌组织SIAH2、CARM1 阳性表达率在低分化、肌层浸润深≥1/2、FIGO 分期为Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结转移的患者中较高。结果提示SIAH2、CARM1 通路相关蛋白在子宫颈鳞状细胞癌组织中的阳性表达率较癌旁组织高，且与临床病理特征有一定关系。分析原因可能是由于：SIAH2 在子宫颈细胞癌组织中呈弥漫阳性，而仅在正常子宫颈有增殖活性的细胞中表达，从正常子宫颈组织至子宫颈鳞状细胞癌组织中阳性率逐渐升高，且随着疾病恶性程度及临床分期的升高，其表达水平也逐渐升高[13]。瞿丛新等[14]以128 例乳腺肿瘤切除治疗患者为研究对象，通过血清学检测发现SIAH2 在乳腺癌肿瘤的增殖、侵袭转移中关系密切，可作为判断肿瘤恶性程度的有效指标，均可说明SIAH2 在恶性肿瘤的发生发展中起到重要作用。CARM1 与多种基因特异性转录因子关系密切，可作为调控核转录因子 -κB（NF-κB）、P53 基因、核转录因子E2Fs 等分子的开关，从而参与细胞基因表达、蛋白质稳定性的调节及组织发育等多进程。Inoue F 等[15]通过对CARM1 在子宫内膜癌中的表达研究发现，CARM1 消除了子宫内膜癌细胞的抗肿瘤机制，且与正常子宫内膜组织相比在癌组织中呈显著过表达，可作为子宫内膜癌强有力的治疗靶点。

综上所述，SIAH2、CARM1 在子宫颈鳞状细胞癌组织中的阳性表达率较癌旁组织高，且与临床病理特征（分化程度、病理类型、临床分期、淋巴结转移等）有一定关系。