匹拉米洞半定量检测法与双抗体夹心法检测粪便隐血的比较*

陈 剑,张大莲,张 毅,周 利,叶 丹

(玉溪市人民医院 1.检验科 2.呼吸科,云南 玉溪 653100)

粪便隐血是一项常规的实验室检查项目,主要是检查胃肠道有无出血,并且对消化道肿瘤也有一定的预警作用。目前采用的粪便隐血检测方法主要有化学法和免疫法两类。两类方法各有优缺点,本文选择化学法中的匹拉米洞半定量检测法(Fecal Occult Blood pyramidon semi-quantitative method,FOBpsm)和免疫法中的免疫双抗体夹心法检测(Immune Fecal Occult Blood,IFOB)进行比较,分析如下。

1 材料与方法

1.1 材料

收集本院512例消化科病人粪便;已知血红蛋白浓度为100mg/mL的抗凝血2mL。

1.2 试剂

匹拉米洞半定量检测法采用国内某公司生产的匹拉米洞半定量检测法(FOBpsm)试剂盒;双抗体夹心法采用国内某股份有限公司生产的大便隐血(IFOB)检测试剂盒。

1.3 两种检测方法操作

对512例标本每份分为两份,分别进行FOBpsm和IFOB试验。

1.4 检测范围

测定将Hb结果100mg/mL的抗凝血用生理盐水分别稀释10倍、100倍、500倍、1000倍、2000倍、4000倍、5000倍、10000倍、20000倍、50000倍、100000倍、200000倍,制备成100mg/mL、10mg/mL、1mg/mL、200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL、20μg/mL、10μg/mL、5μg/mL、2μg/mL、1 μg/mL、0.5μg/mL的红细胞悬液,并用两种方法进行检测。

1.5 方法

在隐血阴性的正常粪便中加入一定数量的动物血、菠菜、铁剂、铋剂,同时在隐血阳性的粪便标本中加入大量维生素C干扰物质,并同时用两种方法进行检测。

2 统计分析

2.1 两种方法检测粪便结果

FOBpsm检测粪便隐血的阳性率为44.1%,IFOB的阳性率为77.5%,P<0.005,差异具有统计学意义,详见表1。

表1 FOBpsm和IFOB检测粪便隐血结果

2.2 两种方法的检测血红蛋白上下限比较结果FOBpsm红细胞悬液Hb的最低浓度为:20μg/mL,最高浓度超过100mg/mL时仍能准确显示强阳性。IFOB红细胞悬液Hb的最低浓度为:1μg/mL,最高检测浓度为10mg/mL,见表2。

表2 FOBpsm和IFOB检测Hb上下限结果比较

2.3 两种方法检测血红蛋白抗干扰结果

IFOB加入各种干扰物质的粪便标本时均能准确排除干扰,FOBpsm则出现假阳性或假阴性结果,见表3。

表3 FOBpsm和IFOB抗干扰结果比较

3 讨论

引起消化道出血的原因有很多,常见的原因有消化性溃疡、急性胃肠炎、食管胃底静脉曲张破裂、消化道肿瘤,等等。尤其是结直肠癌,发病率已跃居全球恶性肿瘤第三位[1]。粪便隐血试验可对微量血红蛋白进行检测,以明确患者是否存在消化道出血,且具有便捷、廉价的优势,适合高危人群进行反复检测[2]。特别是在消化道出血早期,出血量不多时,往往粪便外观无改变,肉眼不能分辨是非已经存在出血,所以,粪便隐血检测的灵敏度和特异性显得尤为重要[3]。

目前粪便隐血的检测的方法分为化学法和免疫法两大类。由表1可以看出FOBpsm检测Hb阳性率为77.5%,IFOB阳性率为90%。差异具有统计学意义。而从表2检测上下限对比中可以看出 FOBpsm在红细胞悬液Hb浓度降到25μg/mL时显色变淡接近消失,20μg/mL就完全显现不出来了。IFOB在2 μg/mL仍能准确显示隐血阳性,在1μg/mL时显色才彻底消失。但是在10mg/mL以上高浓度时,FOBpsm准确显示强阳性,而IFOB因为钩状效应而出现了假阴性。同时,在表1中,也有18例患者标本中含有大量Hb产生了钩状效应从而出现假阴性,在用FOBpsm复查才准确显示强阳性结果。由此可见,IFOB的阳性检测阈值明显低于FOBpsm,相较于FOBpsm具有更好的诊断效能[4,5]。FOBpsm则具有更高的检测值上限。

从表3抗干扰能力结果显示中可以看出,FOBpsm由于方法学的原因,较易受到各种因素的干扰。该方法依赖于简单的氧化反应,食物及药品中的动物血红蛋白和过氧化物酶易导致假阳性结果。抗氧化剂(如维生素C)影响氧化过程,产生假阴性结果。因此FOBpsm是一种灵敏度低而且非特异性的检测方法[6,7]。

IFOB通过标记的Hb单克隆抗体与粪便中的Hb结合形成复合物,从而在纤维膜上显示阴性或阳性,利用了人血红蛋白抗原抗体反应的原理进行检测。检测结果不受饮食、药物等影响,抗干扰能力明显优于FOBpsm,对于粪便隐血的检查来说,尽早提示消化道出血更为重要。因此,IFOB更加适用于人群筛查[8]。

综上所述,FOBpsm操作简便,快速,显色稳定而且可以根据颜色深浅判定粪便隐血的程度,但是因方法学的限制,灵敏度没有IFOB高,易受到饮食及药物的影响。IFOB灵敏度足够高,特异性强,不受饮食及药物的影响,同时也具有操作简便,快速的特点,但是在胃肠道大量出血,粪便中Hb含量较大时,会出现钩状效应,必须特别小心。近年来,IFOB凭借良好的灵敏度与特异性,优异的抗干扰能力,在很大程度上已经取代了FOBpsm,尤其对结直肠肿瘤的早期筛查方式占据了主导地位[9]。但在粪便隐血个体化检测普及之前,化学法与免疫法相结合,互相弥补方法学的不足,才能跟好的提高检测的准确性。