50%苯菌灵可湿性粉剂的分析方法研究

陈 伟，何培迎，黄华树

(1.江苏蓝丰生物化工股份有限公司，江苏 新沂 221400；2.中国农药工业协会，北京 100125)

关键字：苯菌灵；高效液相色谱；分析

苯菌灵(benomyl)是美国杜邦公司研制开发的高效、广谱、内吸性的氨基甲酸甲酯类杀菌剂，具有保护、治疗和铲除作用，其在植物体内代谢为多菌灵及具有挥发性的异氰酸丁酯而发挥杀菌作用，主要用于防治谷类作物、葡萄、仁果及核果类、水稻和蔬菜上的子囊菌纲、半知菌纲及某些担子菌纲真菌引起的病害[1]。

苯菌灵的分析方法除了少数采用气相色谱法和薄层色谱法外，主要采用液相色谱法[2-5]。50%苯菌灵可湿性粉剂作为一种常用登记制剂产品，有关其分析方法报道较少。基于此，本文采用反相高效液相色谱法开展了50%苯菌灵可湿性粉剂中有效成分的分析方法研究，以期为该产品的质量控制提供技术支撑。

1 材料与方法

1.1 供试药剂和试剂

苯菌灵标样(沈阳化工研究院有限公司)，已知质量分数含量≥99.0%；正丁基异氰酸酯、乙腈、乙酸，色谱纯(上海国药)。

1.2 主要仪器

Agilent1260 型高效液相色谱仪配可调波长紫外检测器和色谱数据处理机(安捷伦)；AL204 型电子天平(梅特勒)。

1.3 色谱检测条件

色谱柱：250 mm×4.6 mm 不锈钢柱，内填5 μm化学键合C18；流动相：乙腈+2%乙酸溶液＝80+20(体积比)；流量：1.0 mL/min；柱温：40 ℃；检测波长：290 nm；进样体积：20 μL；采用外标法峰面积定量。在该色谱条件下，苯菌灵保留时间约为5.2 min，如图1 所示。

图1 苯菌灵标样的高效液相色谱图(3.2 μg/μL)

1.4 检测步骤

1.4.1 流动相配制

准确移取乙酸10 mL 于500 mL 超纯水中，配制成2%乙酸溶液，按照乙腈+乙酸溶液=80+20(体积比)配制成流动相，超声脱气备用。

1.4.2 标准溶液的配制

准确称取苯菌灵标样约40 mg(称准至0.1 mg)置于250 mL 容量瓶中，用含有5%正丁基异氰酸酯的乙腈溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。

1.4.3 试样溶液的配制

准确称取含有苯菌灵试样约40 mg(称准至0.1 mg)置于250 mL 容量瓶中，用含有5%正丁基异氰酸酯的乙腈溶液溶解并稀释至刻度，摇匀、过滤。

1.4.4 进样分析

按1.3 节所述的仪器条件运行液相色谱仪，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，计算各针相对响应值的重复性，待相邻2 针的相对响应值变化小于1.0%，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

1.4.5 结果计算

将测得2 针试样溶液以及试样前后2 针标样溶液中苯菌灵面积进行平均，苯菌灵的质量分数X1(%)按式(1)计算：

式中：R1为标样溶液中苯菌灵峰面积的平均值；R2为试样溶液中苯菌灵峰面积的平均值；m1为苯菌灵标样的质量，g；m2为试样的质量，g；p为苯菌灵标样的质量分数，%。

2 结果与讨论

2.1 检测波长的选择

采用二极管阵列检测器(DAD)在190～400 nm 吸收波长范围内观察苯菌灵的紫外吸收曲线，扫描结果如图2 所示。从图2 可知，在扫描范围内苯菌灵最大吸收波长为290 nm，结合出峰峰形及干扰峰情况，最终选择290 nm 作为本方法的检测波长。

图2 苯菌灵标样的紫外吸收扫描

2.2 流动相的选择

目前国内行业方法检测苯菌灵采用的流动相是甲醇加1%乙酸配制而得。但在实际试验操作中发现，在该流动相条件下，苯菌灵制剂中出现了更多的杂质峰，部分杂质峰与苯菌灵峰的出峰位置接近甚至重叠，无法达到良好的分离效果，从而影响检测结果的可靠性。因此本文优化了流动相条件，采用2%乙酸溶液的缓冲体系作为流动相对苯菌灵和杂质进行有效分离。结果发现，将乙酸配制成2%溶液，加入乙腈，以乙腈∶乙酸溶液80∶20 的体积比配制成流动相，所得色谱图显示能够将苯菌灵和杂质进行更好地分离，且有效成分出峰位置无明显杂质干扰，符合定量分析要求，且峰形更好(图1)，因此本试验选用该体系作为流动相。

2.3 分析方法的线性相关性试验

准确配制一系列不同质量浓度的苯菌灵标样溶液，分别为0.208 3、0.709 2、1.205 9、1.410 8、2.219 8 mg/mL，然后分别按1.4 节测定步骤进行分析检测，以苯菌灵的质量浓度为横坐标，苯菌灵的峰面积为纵坐标，计算一元性回归方程和作线性相关图，结果如图3 所示。在选定质量浓度范围内，苯菌灵的质量浓度与峰面积线性良好，苯菌灵线性回归方程y=2 370.7x+39.80，相关系数(R2)为0.999。

图3 苯菌灵线性回归曲线

2.4 分析方法的精密度试验

任取一批50%苯菌灵可湿性粉剂，按1.4 节测定步骤连续测定苯菌灵含量5 次，分别计算其标准偏差、变异系数。精密度测定试验数据见表1，可见，苯菌灵的标准偏差为0.158，变异系数为0.312%。

表1 苯菌灵精密度测定

2.5 方法准确度试验

准确称取已知含量的50%苯菌灵可湿性粉剂样品5 份，分别加入定量的苯菌灵标样，然后按1.4 节测定步骤测定苯菌灵标样的加入量，同理论值进行比较，计算回收率。回收率测定试样数据见表2。可见，苯菌灵的回收率分别为98.80%～100.60%，平均回收率为99.702%。

表2 回收率测定

3 结论

本文采用高效液相色谱仪建立了一种检测苯菌灵可湿性粉剂有效成分的定量分析方法，其用于测定苯菌灵可湿性粉剂中苯菌灵的含量，能够有效避免杂质干扰，具有简便快速、重现性好、准确度高及分离效果好等优点，是检测苯菌灵加工的制剂中有效成分质量分数的有效检测方法，适用于此类产品的质量控制和检测。