新疆某地区牛场乳房炎流行调查及病原分离、药敏试验

乔彦杰，魏 勇，解津刚，蒋 松*

（ 1. 石河子大学动物科技学院，新疆 石河子 832000 ； 2. 新疆天润乳业股份有限公司，新疆 乌鲁木齐 830000 ）

“二十大”以来，我国畜牧业发展迅速，新疆的奶牛业也成为农业发展的重点内容。随着奶牛业不断发展，越来越多的养殖场开始重视奶牛乳房疾病的防治[1]。其中，奶牛乳房炎会导致乳品质、产量下降，治疗和管理成本增加，同时还会造成抗生素药物残留，严重影响人类的生活品质和畜牧业的可持续发展[2]。有报道称，我国每年因隐性乳房炎损失近1.35 亿元，每头患病奶牛平均日产奶量减少3.7 kg，约损失1 200～3 600元，可见乳房炎对牛场产奶量影响颇深[3]。此外，乳房炎还会引起奶牛产后下次发情和妊娠时间延长，甚至影响奶牛生产性能，造成严重的经济损失[4]。因此，防治乳房炎已成为众多畜牧行业科研工作者研究的热点。本研究以新疆某地区牛场乳房炎流行调查及病原分离、药敏试验为切入点，开展奶牛乳房炎调查研究，为新疆地区奶牛乳房炎的有效防治及奶牛养殖业的健康发展提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验动物

随机选取新疆地区部分规模化奶牛养殖场108头无乳房症状的泌乳奶牛为调查对象，无菌采集432份乳汁，置于冰盒送回实验室，做隐性乳房炎检测。试验期间检测其中两批（4 月份305 头，6 月份323 头）泌乳奶样的体细胞数。奶牛年龄为2～10岁。

1.2 主要仪器与试剂

试验仪器：普通琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基购自青岛高科园海博生物技术有限公司，绵羊血琼脂培养基购自北京索莱宝科技有限公司，LB 肉汤培养基购自上海生工生物工程股份有限公司，药敏试纸购自杭州滨和微生物试剂有限公司，KENOTEST 隐性乳房炎检测试剂购自CID LINES公司，革兰氏染色液购自珠海贝索生物技术有限公司。

试验仪器：光学显微镜（Olympus 公司），纯水机（Therom Fisher 公司），高压灭菌器（Hirayama 公司），冰箱（海信集团有限公司），旋涡混合器（Scientific Industries 公司），电子分析天平（赛多利斯科学仪器有限公司），超净工作台（上海鸿都电子科技有限公司），离心机（Sigma公司），隔水式恒温培养箱、电热恒温水浴锅（北京市永光明医疗仪器厂），全自动振荡培养箱（上海智城分析仪器制造有限公司），微量移液器及大容量移液枪（英国Bibby 科技有限公司），牛博士Ⅲ型体细胞检测仪器（华诚睿光（中国）生物科技有限公司）。

1.3 试验方法

1.3.1 临床乳房炎检查

主要通过乳房视诊和触诊、乳汁的肉眼观察及必要的全身检查。乳房肿胀发红，触诊发热，乳汁有絮状物或凝块、黄白色或血清样，挤不出乳汁或仅能挤出少量水样乳汁，即可诊断为临床乳房炎。患牛伴有全身症状，精神萎靡、食欲减少、体温升高、心率加快、呼吸频率增加等症状。

1.3.2 隐性乳房炎检查

采样凝集盘检测法，采样前弃掉前3把奶，在每个乳杯中收集样奶2 mL，加入KENOTEST隐性乳房炎检测试剂，充分混匀后根据混合物的凝集情况及颜色变化进行综合判断。其中，以“++”以上判定为隐性乳房炎[5]。隐性乳房炎判定标准见表1。

表1 隐形乳房炎判定标准Tab.1 Criteria for diagnosis of invisible mastitis

1.3.3 体细胞测定及分析

分别于4 月和6 月采集泌乳奶牛奶样，采用牛博士Ⅲ型体细胞检测仪器检测体细胞数，并使用Excel 软件对试验数据进行统计分析。

1.3.4 病原菌分离鉴定、分离菌形态学观察

随机采取乳房炎阳性乳区奶样43份，奶样经过前增菌后，分别吸取100 μL涂布于普通琼脂、麦康凯琼脂、绵羊血平板等固体培养基，同时接种于肉汤培养基，37 ℃培养箱中培养，24 h后观察菌落生长情况及形态特征。

挑取单个菌落涂片，经革兰氏染色镜检，观察菌体形态。根据菌落形态特征、溶血与否、染色特性、菌体形态及生化试验进行鉴定。

1.3.5 主要病原菌耐药试验

将多次分离纯化后得到的金黄色葡萄球菌、链球菌，分别接种于LB肉汤培养基，恒温摇床内增菌培养24 h，生理盐水将菌液浓度调节至10～20 CFU/mL。按照纸片法的操作，吸取适量菌液涂布在琼脂平板上，取出不同药敏纸片，并用无菌镊子将各种药敏纸片分别贴于培养基表面，置37 ℃培养箱生长12 h后观察并测定抑菌情况。

2 结果与分析

2.1 临床乳房炎检测结果（见表2）

由表2 可知，按乳区统计，平均临床乳房炎阳性率为10.19%，其中以右后乳区阳性率为最高，为11.11%。

表2 临床乳房炎检测结果Tab.2 Clinical mastitis test results

2.2 隐性乳房炎检测结果（见表3）

由表3 可知，平均隐性发病率为34.26%（279/2 908）。其中，以左前乳区阳性率为最高，为44.44%（84/727）；左后最低，为25.00%（59/727）。

表3 隐性乳房炎检测结果Tab.3 Results of occult mastitis test

2.3 体细胞检测结果（见表4）

由表4 可知，试验期间检测其中两批泌乳奶样的体细胞数，第一次测定结果显示，平均体细胞数为73.28 万，体细胞数大于等于40万占比为81.31%（248/305）。经过2个月治疗之后进行第2次测定，其平均体细胞数为56.25万，体细胞数大于等于40万占比为78.33%（253/323）。

表4 体细胞检测结果Tab.4 Somatic cell test result

2.4 主要病原菌分离与鉴定及形态学特征（见图1、表5）

由图1、表5 可知，经过分离培养和生化鉴定，共从43份可疑奶样中分离到36株菌株，其中，以葡萄球菌分离率最高，为66.67%；其次为链球菌，分离率为14.29%；此外，分离到2株革兰氏阴性菌。

表5 乳房炎病原菌分离鉴定情况Tab.5 Isolation and identification of pathogenic bacteria from mastitis

图1 病原菌分离与鉴定及形态学特征Fig.1 Isolation and identification of pathogenic bacteria and morphological characteristics

结果表明，该牛场奶样带菌情况较为严重，应引起高度重视。

2.5 分离菌株药敏试验结果（见表6）

由表6可知，28株葡萄球菌均对多西环素敏感，83.3%的链球菌对多西环素敏感，50%的革兰氏阴性菌对多西环素敏感。链球菌和革兰氏阴性菌对青霉素G、氨苄西林、林可霉素均不敏感。

表6 分离菌株药敏试验结果Tab.6 Results of drug sensitivity test for isolates

3 讨论

本次调查研究发现，新疆部分地区仍存在较高的奶牛乳房炎发病率，其乳区平均临床乳房炎阳性率为10.19%，平均隐性发病率为34.26%。低于刘建贵等[6]报道的奶牛隐性型乳房炎发病率平均为74.50%，临床型乳房炎的发病率平均为33.41%。罗金印等[7]调查发现，成都、兰州、郑州、济南、哈尔滨、南昌等6个城市的奶牛场隐性乳房炎发病率在50%～80%之间。而本调查中新疆地区隐性乳房炎的发病率略低于罗金印等[7]的报道，也可能是因地域、气候不同的原因造成，新疆气候比较干燥，不利于病原菌生长。双金等[8]报道内蒙古地区隐性乳房炎乳区阳性率为32.28%，与本调查接近。

在生产实践中，检测体细胞数是鉴别乳区、牛、牛群乳房健康状态最有效的方法，受年龄、胎次、机体应激、个体特征以及挤奶操作等因素影响，当乳腺受到感染时，乳中体细胞数增加，产奶量降低[9]。本试验对两批奶样进行了跟踪监测体细胞，第一次测定结果显示,平均体细胞数为73.28万，体细胞数大于等于40万占比为81.31%；经过2个月治疗之后进行了第2 次测定，其平均体细胞数下降为56.25万，体细胞数大于等于40万占比为78.33%。体细胞下降的原因与牛场使用抗生素治疗有关，也与泌乳牛的胎次、季节温度升高有关[10]。但经过治疗后仍然有8.05%的奶样体细胞数大于等于100万，这可能是随着奶牛产后时间延长，体细胞数也会随之增多[10]。因此，在奶牛饲养管理方面，还需要提高外部饲养条件、改善饲养环境，并提前对隐性乳房炎进行药物干预治疗。

细菌感染在动物饲养中也较为常见。金黄色葡萄球菌常存在于牛的皮肤，可定植于奶牛的乳腺上皮组织细胞，从而形成脓肿。大多数抗生素可完全抑制已经进入乳腺上皮细胞间的细菌[11]，因此一些无力淘汰奶牛的牧场寄希望于在干奶期治疗金黄色葡萄球菌感染。链球菌主要在被感染的乳腺内存在，在奶牛乳房外缘和挤奶工的皮肤上存活时间很短[12]。感染链球菌后，奶样中的体细胞数通常很高，个别甚至达到2 000～5 000个/mL。有效对抗链球菌的核心控制关键点是做好挤奶前药浴，关注药浴液的有效浓度、药浴作用时间、擦干效果以及挤奶设备保持正常。本研究结果显示，葡萄球菌、链球菌及大肠杆菌是引起新疆地区奶牛乳房炎的主要致病菌，并且以葡萄球菌分离率最高，其次为链球菌，与陈杰[5]、刘长彬等[13]报道的有关新疆地区奶牛乳房炎结果基本一致。

针对上述两种病原菌，在临床中应该重点加强挤奶器消毒，严格规范挤奶规程，定期做好泌乳期、干乳期乳房保健等，以有效切断传播途径；同时建立科学的饲养管理制度、加强环境和牛体卫生，以清除环境中的致病菌[14]；其次对隐性乳房炎患病牛群应尽快分群，减少致病菌的交叉传播，防止混合感染致病菌的超高体细胞牛数增多；对妊娠后期的乳房炎奶牛进行干奶治疗，利用针对性的抗生素和乳头封闭剂进行治疗加干奶[15]，加强细菌检测，以确保治疗效果；对隐性乳房炎的牛群适当增加免疫力提升的辅助添加剂，提升奶牛的免疫健康；若存在细菌感染风险的牛建议进行分批、逐步淘汰。

由药敏试验结果可知，引起新疆地区奶牛乳房炎的几种主要病原菌对大多数抗菌药物具有较好的敏感性，但长期反复使用一种或两种抗生素容易形成耐药菌株，造成再度感染，并且抗生素在乳制品中残留会影响人类健康[16]。因此，除了考虑到药物治疗针对的病原菌产生耐药性外，还要结合抗生素敏感试验以及对乳房的刺激性试验等选择有效的抗生素。本试验分离的菌株主要对头孢类、四环素类药物（如多西环素、头孢曲松）具有较强的敏感性，由此可为新疆部分地区奶牛场防治乳房炎的临床用药提供一定参考。

4 结论

本研究调查发现，新疆该地区隐性奶牛乳房炎发病率较高，可采用头孢类、四环素类药物针对性进行治疗，降低乳房炎的发病率。