不同微生物检验法对念珠菌性阴道炎患者阴道分泌物的检验效果对比

吴晓玲

念珠菌性阴道炎是成年女性中常见的妇科疾病,特别是近些年因为激素类药物与抗生素的广泛使用,使得临床很多真菌都出现耐药,导致各类真菌感染的发病率逐年升高。很多患者自身对真菌感染和治疗都缺乏必要的认识,自行购买的抗真菌药物不具有针对性,这就导致治疗中很容易出现真菌感染性病症反复发作,进而导致治疗难度增加［1］。本文主要比较革兰染色法、细菌培养法、PCR检测法检验念珠菌性阴道炎患者阴道分泌物的效果差异,并以常规病理诊断为金标准,报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2020年4月～2021年6月到本院进行治疗的145例疑似念珠菌性阴道炎患者作为研究对象,其中已婚83例、未婚62例,年龄22～43岁、平均年龄(35.38±8.28)岁,病程1～14个月、平均病程(7.67±1.35)个月,发病至入院时间1～5 d、平均发病至入院时间(2.41±0.43)d。符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》标准,患者在《知情同意书》上签字。

1.2 纳入及排除标准

1.2.1 纳入标准 ①患者自觉存在阴道瘙痒、白带异常等相关症状；②患者具有进行阴道病原微生物检验的条件；③所有患者在入院前2周之内均未服用过抗生素等相关药物。

1.2.2 排除标准 ①急性生殖道炎症反应；②其他严重妇科疾病；③合并严重心脏、肝脏、肾脏器质性病变；④恶性肿瘤、肿瘤远处转移；⑤严重精神类疾病、沟通交流障碍；⑥同期参与其他研究,并存在对本文研究结果产生影响的行为和体征。

1.3 检验方法

1.3.1 阴道分泌物采集 在标本采集前1 d,告知研究对象避免性生活,不要盆浴。各项检查均坚持无菌操作。根据检查目的不同,采集不同部位(宫颈管口、阴道深部、阴道穹窿后部等)的阴道分泌物,收集待测。

1.3.2 革兰染色法 将标本均匀涂抹在洁净的载玻片中央,自然风干或通过火焰2～3次固定。标本干燥后,滴加草酸铵结晶紫溶液,染色1 min。用流水缓慢冲洗,吸水纸吸干。滴加碘液,染色1 min,水洗。95%乙醇脱色,待无紫色液体流出立即水洗。番红复染3～5 min,水洗,镜检。若镜下可见革兰阳性浓染的卵圆形孢子或假菌丝即可判定念珠菌。

1.3.3 细菌培养法 将样本浸入无菌生理盐水中,接种环划线接种于沙氏葡萄糖琼脂平板,35℃培养24～ 48 h。如出现表面光滑、有浓酵母味的乳白色菌落,选取典型菌落接种念珠菌显色平板。白色念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌和克柔念珠菌分别呈现为绿色、紫色、蓝灰色和粉红色。

1.3.4 PCR检测法 ①待检样品接种于沙氏葡萄糖肉汤培养基,35～37℃培养48 h。②选取3～5个典型菌落溶于1 ml无菌生理盐水中,5000 r/min离心5 min,沉淀加入核酸提取试剂盒中提取菌体核酸。③PCR扩增：选取25 μl扩增体系(10 倍浓度PCR缓冲液2.5 μl,10 mmol dNTP混合液2.5 μl,5 U/μl Taq I聚合酶0.2 μl,25 μmol/L SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2各0.5 μl,核酸提取液1 μl,超纯水补至25 μl),扩增参数按常规设置(预变性95℃ 5 min；变性95℃ 30 s,退火58℃ 30 s,延伸72℃ 1 min,扩增30～35个循环；72℃延伸5 min),并设置阴阳对照。④电泳：将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳。⑤紫外凝胶成像仪观察：若出现235 bp的目的条带,即为念珠菌阳性。

1.3.5 病理诊断 对所有采集的分泌物首先进行酸碱检验,正常值为4.5～5.5,如果pH值明显升高则表明存在菌群聚集,为可疑阴道炎症。洁净度检查以显微镜观察标本的杆菌、球菌、上皮细胞和白细胞的数量等,洁净度为1～2度说明正常,3～4度说明异常。常规进行滴虫、线索细胞的检查。实施真菌检测时,如果镜下发现直径为3～5 μm卵圆形孢子,怀疑为白色念珠菌,然后对该标本进行胺试验,结果阳性即确认念珠菌感染。

1.4 观察指标及判定标准 统计革兰染色法、细菌培养法、PCR检测法检出结果和病理诊断结果,以病理诊断作为金标准,比较革兰染色法、细菌培养法、PCR检测法诊断念珠菌性阴道炎的阳性预测值、阴性预测值、灵敏度、特异度、准确度、约登指数、误诊率、漏诊率［2］。阳性预测值=真阳性/(真阳性+假阳性)×100%；阴性预测值=真阴性/(假阴性+真阴性)×100%；灵敏度=真阳性/(真阳性+假阴性)×100%；特异度=真阴性/(假阳性+真 阴性)×100%；准确度=(真阳性+真阴性)/总例数× 100%；约登指数=(灵敏度+特异度)-1；误诊率=假阳性/(假阳性+真阴性)×100%；漏诊率=假阴性/(真阳性+假阴性)×100%。

1.5 统计学方法 采用SPSS26.0统计学软件处理数据。计数资料以率(%)表示,采用χ2检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 革兰染色法、细菌培养法、PCR检测法和病理诊断结果分析 病理诊断检出阳性141例,阴性4例；细菌培养法检出阳性134例,阴性11例；革兰染色法检出阳性136例,阴性9例；PCR检测法检出阳性 135例,阴性10例。见表1。

表1 革兰染色法、细菌培养法、PCR检测法和病理诊断结果分析(n)

2.2 革兰染色法、细菌培养法、PCR检测法对念珠菌性阴道炎的诊断效能比较 细菌培养法诊断念珠菌性阴道炎的阳性预测值为98.51%、阴性预测值为18.18%、灵敏度为93.62%、特异度为50.00%、准确度为92.41%、约登指数为0.4362、误诊率为50.00%、漏诊率为6.38%；革兰染色法诊断念珠菌性阴道炎的阳性预测值为98.53%、阴性预测值为22.22%、灵敏度为95.04%、特异度为50.00%、准确度为93.79%、约登指数为0.4504、误诊率为50.00%、漏诊率为4.96%；PCR检测法诊断念珠菌性阴道炎的阳性预测值为98.52%、阴性预测值为20.00%、灵敏度为94.33%、特异度为50.00%、准确度为93.10%、约登指数为0.4433、误诊率为50.00%、漏诊率为5.67%。三种检验方法诊断念珠菌性阴道炎的阳性预测值、阴性预测值、灵敏度、特异度、准确度、约登指数、误诊率、漏诊率比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。见表2。

表2 革兰染色法、细菌培养法、PCR检测法对念珠菌性阴道炎的诊断效能比较

3 讨论

临床研究认为［3］导致女性出现阴道炎的主要病原体包括细菌、滴虫和真菌,而真菌感染当中主要以念珠菌感染为主,这是妇科疾病当中的常见表现类型。念珠菌性阴道炎在发病时会导致患者出现严重的外阴瘙痒和灼烧感,阴道分泌物存在豆腐渣样的异味,随着病情不断进展,会导致患者出现心绞痛和尿痛等主要表现［4,5］。这种病情十分顽固,迁延不愈,而且容易反复发作,因此很容易给患者的正常生活和工作带来较大的影响［6,7］。

长时间的炎症容易诱发盆腔炎症,也容易导致患者输卵管和卵巢出现炎症,严重情况下会导致患者出现宫颈糜烂与宫颈炎,甚至会对女性的身心健康产生威胁［8-10］。临床对念珠菌性阴道炎患者要本着尽早诊断,尽早治疗的原则,因此采取科学有效的方法对患者进行积极的诊断十分必要［11,12］。革兰染色法成本低廉、操作简单,容易在临床上普遍推广,但这种检验方法也会受到多种因素影响,从而导致检验过程中存在一定的误差［13,14］。

综上所述,革兰染色法、细菌培养法、PCR检测法均可以实现对念珠菌性阴道炎患者阴道分泌物的检验,临床可以根据患者的实际情况灵活的选择这三种检验手段。