不同烟草普通花叶病毒OD比值烟苗的大田移栽试验

邓征宇 敬礼恒 丁建冰 周向平

湖南省烟草公司永州市公司，湖南 永州 425000

0 引言

烟草花叶病毒为RNA 病毒，是烟草花叶病的病原体，在全国各大烟叶产区均有发生［1］。目前，烟草花叶病毒在烟草上共分为普通株系、番茄株系、黄色花叶株系和坏死株系。除烟草外，烟草花叶病毒还可寄生茄科、豆科、车前科等科的多种植物［2］。烟草花叶病从新叶开始发病，沿叶脉组织变成淡绿色，以后形成局部斑点、枯死或失绿的环斑，几天后形成花叶，严重影响烟草正常生长发育，给烟农造成极大的经济损失［3］。

双抗体夹心酶联免疫吸附检测法是将含有已知抗体的抗血清吸附在微量滴定板上的小孔里，洗涤一次后加待测抗原，若两者是特异的，则发生结合，再加入与待测抗原呈特异反应的酶联抗体，使一单位的抗原同时结合两单位的抗体形成“夹心”；之后加入该酶的底物，根据产生的有色酶解产物颜色的深浅来判断待测抗原的含量。双抗体夹心酶联免疫吸附检测法是当前烟草花叶病毒的主要检测方法之一［4-6］。笔者将使用双抗体夹心酶联免疫吸附检测法检测出与阴性对照不同吸光度（Optical Density，OD）比值的烟苗进行大田移栽，跟踪烟苗移栽30 d后的发病情况，调查不同OD比值下烟苗的发病率和病情指数，探索与阴性对照不同OD比值烟苗大田普通花叶病的发病规律，为烟叶生产中育苗环节实现精准消毒提供理论支撑，避免带毒烟苗移栽进入大田带来经济损失。

1 试验材料与方法

1.1 试验地点

试验于2023 年在湖南省永州市江华瑶族自治县涛圩镇开展。试验田块为历年烟草普通花叶病发生较轻或不发生的烟稻轮作水田，前茬作物为水稻，土壤肥力均匀、中等，土地平整，排灌方便。

1.2 试验品种

试验所用的烤烟品种为云烟87。

1.3 试验处理

各处理烟苗均为2023 年集约化育苗、烟草普通花叶病检测呈阳性的育苗池烟苗。对与阴性对照OD 值不同比值的烟苗按照以下5 个处理设计移栽到大田。T1，烟苗普通花叶病检出OD 值∶阴性对照OD 值<1.2，设为空白对照；T2，烟苗普通花叶病检出OD 值∶阴性对照OD 值为（1.5，2.0］；T3，烟苗普通花叶病检出OD值∶阴性对照OD 值为（2.0，4.0］；T4，烟苗普通花叶病检出OD 值∶阴性对照OD 值为（4.0，6.0］；T5，烟苗普通花叶病检出OD值∶阴性对照OD值>6.0。

每个处理设3 次重复，每处理种烟35 株。整个生育期不使用药剂防治烟草普通花叶病。整个试验过程中农事操作注意先健株后病株（含空白对照处理），避免农事操作传毒造成误差。

1.4 调查方法

参考《烟草病虫害分级及调查方法》（GB/T 23222—2008），分别于移栽后10、20、30 d调查各小区烟草普通花叶病的发生情况，并统计发病率及病情指数。

按照病害严重度分级，以株为单位分级调查。具体调查标准如下：0 级，全株无病；1 级，心叶脉明或轻微花叶，病株无明显矮化；3 级，1/3 叶片花叶但不变形，或病株矮化为正常株高的3/4 以上；5 级，1/3～1/2叶片花叶，或少数叶片变形，或主脉变黑，或病株矮化为正常株高的2/3～3/4；7级，1/2～2/3叶片花叶或变形或主侧脉坏死，或病株矮化为正常株高的1/2～2/3；9级，全株叶片花叶，严重变形或坏死，或病株矮化为正常株高的1/2以上。

2 试验结果与分析

2.1 不同处理移栽后10 d烟苗普通花叶病发生情况

不同处理移栽后10 d烟苗普通花叶病发生情况如表1 所示。由表1 可知，移栽后10 d，各处理均没有表现出较重的发病症状，T1、T2、T3处理均未出现5、7、9病级烟苗，除T5（OD 比值大于6）外，各组发病率均低于40%。其原因可能是移栽后受低温、干燥等因素影响，烟苗生长缓慢，普通花叶病毒侵染率较低。

表1 不同处理移栽后10 d烟苗普通花叶病发生情况

2.2 不同处理移栽后20 d烟苗普通花叶病发生情况

不同处理移栽后20 d烟苗普通花叶病发生情况如表2所示。由表2可知，移栽后20 d，各处理组出现较为明显区别，其中处理组T5发病率最高（平均85.71%），是对照处理T1的15倍，病情指数高达47.20。T1、T2、T3均未出现9级病株，T4、T5已经出现较为严重的普通花叶病症状，叶脉部分叶肉颜色变黄，出现明脉，叶片开始皱缩扭曲。

表2 不同处理移栽后20 d烟苗普通花叶病发生情况

2.3 不同处理移栽后30 d烟苗普通花叶病发生情况

随着气温上升及雨水增多，病毒侵染更为迅速，不同处理移栽后30 d 烟苗普通花叶病发生情况如表3 所示。由表3 可知，移栽后30 d，各处理组表现出明显差异，随着OD比值的增大，烟苗普通花叶病发病率及发病指数均大幅增长，T5的发病率高达94.29%，发病指数为93.44，已经没有正常烟株，感染烟株生长停滞、矮小、叶片黄绿相间，且出现较多坏死斑点。而T1对照处理的发病率仅为8.57%。

表3 不同处理移栽后30 d烟苗普通花叶病发生情况

3 讨论与结论

笔者利用双抗体夹心酶联免疫吸附检测法，对检测样品OD 值与阴性对照OD 值不同比值的烟苗进行大田移栽试验，通过跟踪烟苗的发病情况，探究待测烟苗和阴性对照不同OD 比值与烟苗大田普通花叶病发病率的关系。结果表明，随着OD 比值增大，烟苗携带的花叶病毒越多，移栽后病毒侵染速度越快，烟苗普通花叶病发病率越高。OD 比值为（1.5，2.0］的烟苗，最终平均发病率为22.86%，需要在育苗期间加强消毒处理，有效降低带毒量，检测合格后方可移栽；对于OD比值大于2.0 的烟苗，建议直接进行无害销毁，以避免交叉感染，同时加强对于育苗薄膜、育苗池、剪叶机等相关物资及场地的消毒，避免健康烟苗被感染，从源头降低大田普通花叶病发病率。

目前，育苗期间烟苗携带普通花叶病毒的途径主要有3条。一是基质携带病毒。在育苗过程中当基质携带普通花叶病毒时，易导致大规模感染。二是烟草种子携带病毒。在烟草种子包衣加工过程中如果消毒不到位，极可能导致部分包衣种子本身携带普通花叶病毒。三是育苗期间人为操作感染。育苗期间人员频繁出入育苗棚，通过手触摸感染或是在田里携带泥土进入育苗棚，均有可能将普通花叶病病毒传染给烟苗。因此，为保证烟叶生产安全，建议加强基质及种子消杀，避免出现大规模感染；及时取样进行检测，对于OD比值为（1.5，2.0］的烟苗进行消毒，待OD比值小于1.2后方可移栽；加强苗期人员管理，进入育苗棚前用消毒液对鞋进行浸泡消毒处理，进入大棚后减少用手触碰烟苗，相应农事操作遵循先健株后病株的原则，对剪叶机等机器在每次使用前用消毒液充分浸泡。