注意缺陷多动障碍儿童血清miR-137的表达及其临床意义*

梁 格，王雨晴，石宝莲，刘国栋，王 瑶，刘德华

(1.徐州医科大学附属徐州市儿童医院，江苏徐州 221000；2.江苏省中医院，南京 210004)

注意缺陷多动障碍(ADHD)又称多动症，是一种较为常见的神经发育障碍，主要发生在儿童期及青少年时期，会对患儿的学业学习、生活健康、社会认知功能等构成严重危害。近年来，我国ADHA患病率不断升高，学龄前儿童的患病率中已高达8%[1-2]。因此，积极探寻影响ADHD疾病病情进展的相关因素，找到早期准确诊断的便捷指标很有必要。虽然目前对于ADHD病因的研究各有不同，ADHD的发病机制也尚未明确，但一般认为其与遗传及环境等因素密切相关[3]。miRNA是真核生物中的一类具有调控功能的非编码RNA，可通过碱基互补配对指导合成蛋白质而参与发育、细胞增殖和凋亡等多种调节途径[4]。有研究报道，miRNA能够通过调控靶基因而影响ADHD的病情发展，如miR-30d-5p、miR-4655-3p等在ADHD患儿中低表达，参与了ADHD的发生、发展进程[5]。有研究指出，miR-137与神经干细胞的增殖分化、神经信号的转导及神经元的成熟过程密切相关[6]，但血清miR-137表达水平在ADHD儿童中的变化情况及其临床意义尚不明确。鉴于此，本研究特对此进行分析探索，以期为临床诊断与防治ADHD提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取徐州医科大学附属徐州市儿童医院2017年9月至2021年9月收治的135例ADHD儿童纳入观察组，另选取同期体检的121例健康儿童纳入对照组。观察组男81例，女54例；年龄4～12岁，平均(7.05±1.15)岁；病程1～3年，平均(1.34±0.78)年。对照组男72例，女39例；年龄3～12岁，平均(6.89±1.08)岁。2组年龄、性别比较差异均无统计学意义(P>0.05)。纳入标准：患儿均符合国际疾病分类第10版中ADHD的诊断标准[7]，均为首诊；患儿韦氏儿童智力量表测得智商≥80分；家长均知情同意并签署知情同意书。排除标准：情感障碍者；患有精神发育迟缓、品行障碍、精神分裂及其他精神疾病者；合并心、肝、肾等器官功能障碍者；患有躯体及神经系统等器质性疾病者；近期已接受精神药物治疗者。本研究已在医院伦理委员会审批备案。

1.2 方法

1.2.1治疗方法

所有患儿均给予盐酸托莫西汀(江苏正大丰海制药有限公司，国药准字：H20133346)进行治疗，起始剂量为每次服用0.5 mg/kg，2次/天，3 d后剂量增加至0.6 mg/kg，治疗2个月。同时，配合进行感觉综合训练，包括听语、视觉及感觉运动能力训练，每天1 h，每周4次，训练2个月。

1.2.2样品制备

抽取受试儿童空腹静脉血液5 mL(观察组于门诊收治当天或病房收治24 h内，对照组于体检当天)，保存在无抗菌剂的采血管中。取其中2 mL血液静置30 min，离心10 min(4 000 r/min，半径13.5 cm)，取离心后的上清液分装在EP管内，做好标记保存在-80 ℃备用。剩余3 mL血液放置在乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管内，静置离心取其血浆分装在EP管内，做好标记保存在-80 ℃备用。

1.2.3miR-137检测

采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-137表达水平。使用RNA提取试剂盒(上海海方生物技术有限公司提供)提取血清总RNA，经过逆转录得到cRNA。使用定量PCR分析仪(杭州博日科技股份有限公司，型号FQD-16A)对miR-137进行扩增。qRT-PCR反应使用20 μL体系：cDNA(50 ng/μL)2 μL、Green Mix 10 μL、上下游引物(10 μmol/L)各1 μL、双蒸水6 μL。扩增条件：95 ℃预变性30 s，95 ℃变性5 s，60 ℃退火34 s，40个循环，72 ℃延伸10 min。引物由上海生工生物公司合成，miR-137上游引物为GAAATCCGACAGCTTAAGGAGGTTTGA，下游引物为CATTGCACAGATAGGATTTGATTTACT；以U6为内参，上游引物为ATTGCAGATACACTCGCTTCGGCACAA，下游引物为GGAACGCTTCACAAAATATGGAACGCT。采用2-△△ct计算基因表达相对定量结果。

1.3 观察指标

比较2组注意缺陷多动障碍父母评定表(ADHDRS)评分及血清miR-137表达水平。其中，ADHDRS分为注意力缺陷、多动和冲动两个分量表，各分量表均包含9个条目，共18个条目，每个条目3分，评分越高表示程度越严重。研究ADHD儿童血清miR-137表达水平与ADHDRS评分的相关性。评价血清miR-17表达水平对ADHD患儿的诊断价值，记录最佳截断点(Cut-off值)、敏感度、特异度、曲线下面积和95%置信区间(95%CI)。比较观察组治疗后ADHDRS评分和血清miR-137表达水平的变化。

1.4 统计学处理

2 结 果

2.1 两组ADHDRS评分和血清miR-137表达水平比较

观察组ADHDRS两个分量表评分、总分均高于对照组(P<0.05)，血清miR-137表达水平低于对照组(P<0.05)，见表1。

表1 两组ADHDRS评分和血清miR-137表达水平对比

2.2 ADHD儿童血清miR-137表达水平与ADHDRS评分的相关性

经Pearson相关性分析，ADHD患儿血清miR-137表达水平与ADHDRS分量表评分及总分均呈正相关(P<0.05)，见表2、图1～3。

表2 患儿血清miR-137表达水平与ADHDRS评分相关性

图1 ADHD患儿血清miR-137表达水平与注意力缺陷分量表评分的相关性

图2 ADHD患儿血清miR-137表达水平与多动和冲动分量表评分的相关性

图3 ADHD患儿血清miR-137表达水平与ADHDRS量表评分的相关性

2.3 血清miR-137诊断ADHD患者的价值

血清miR-137表达水平诊断ADHD的曲线下面积、敏感度、特异度分别为0.815(95%CI=0.763～0.860)、81.48%、83.97%，见图4。

图4 血清miR-137表达水平诊断ADHD的ROC曲线分析

2.4 治疗前后ADHDRS评分和血清miR-137表达水平变化

治疗2个月后，患儿ADHDRS两个分量表评分、总分均较治疗前下降(P<0.05)，血清miR-137表达水平较治疗前升高(P<0.05)，见表3。

表3 治疗前后ADHDRS评分和血清miR-137表达水平变化

3 讨 论

ADHD是儿童时期常见的精神类疾病之一，且近年来的发病率不断升高[8]。有研究报道，ADHD患儿的症状能够持续至成年，甚至终身，不仅其认知功能遭受损伤，而且物质依赖及犯罪发生率是正常人群的5～10倍[9]。因此，积极探讨影响ADHD发病的相关因素，并尽可能及早地对其进行准确诊断以指导临床制定合理的干预方案对控制ADHD儿童病情进展与促进其预后改善具有非常重要的临床意义。

本研究结果显示，观察组ADHDRS两个分量表评分、总分均高于对照组，而血清miR-137表达水平明显低于对照组，说明血清miR-137表达水平可能与ADHD发生、发展存在一定的关系。miRNA是一种保守的非编码单链小RNA，通过转录后的水平调节来影响人类基因表达，从而参与DNA甲基化、组蛋白修饰及RNA编辑等多种生物学过程，影响精神类疾病的发生、发展。有研究发现，miR-26b-5p、miR-185-5p和miR-191-5p在ADHD患儿中高表达，通过改变肌醇信号通路来诱导ADHD发病[10]。miR-137是一个重要的节点分子，可参与蛋白质的形成过程，调控生物学功能，能够通过调控信号通路及下游分子来影响神经发育，并可以通过影响神经功能和结构来影响大脑发育及功能[11]。研究指出，miR-137表达失调能够引起一系列功能基因失调，进而造成神经功能和结构异常，导致神经发育过程出现障碍而引发精神性疾病[12]。有研究表明，miR-137在阿尔茨海默病患者血清中的表达水平较低，参与疾病的发生、发展，并且能够影响阿尔茨海默病患者的病情严重程度，是诊断阿尔茨海默病的标志物[13-14]。另有研究报道，miR-137能够调节脑部神经的发育过程，破坏激素平衡，增加精神分裂症的发病风险，其表达水平改变可能与精神类疾病的发生相关联[15]。此外，有研究指出，miR-137在转录后可调控多巴胺转运体表达及多巴胺转运，从而参与多动症等多巴胺稳态异常相关疾病的发生、发展，可作为此类疾病治疗的靶点。这进一步证实了血清miR-137表达与ADHD发生具有相关性[16]。

本研究结果显示，血清miR-137表达水平与ADHDRS两个分量表评分、总分均呈负相关，说明血清miR-137表达水平与ADHD患儿病情严重程度具有相关性。血清miR-17表达水平诊断ADHD的敏感度、特异度分别为81.48%、83.97%，说明miR-137水平对于ADHD具有较好的诊断效能。治疗2个月后，患儿ADHDRS量表评分下降，而miR-137水平升高，说明miR-137可能与ADHD患儿的临床疗效存在一定关系，可作为临床上评判ADHD治疗效果的有效指标之一。相关研究报道，调节血浆miR-137表达水平可提高帕金森病患者临床疗效，改善其非运动症状[17]。结合本研究结果，临床中，可通过检测血清miR-137表达水平，早期对ADHD患儿做出较为准确的诊断，评估患儿病情的严重性，从而为尽早制定合适的病情干预措施提供指导，以促进预后改善。

综上所述，血清miR-137表达水平可能参与了ADHD疾病的发生、发展过程，可作为诊断ADHD的生物标志物，对于诊断和治疗ADHD疾病具有一定的指导意义。但本研究具有一定的局限性，例如未对患儿进行长期随访，未进一步深入探讨血清miR-137对ADHD患儿预后的评估作用等，有待后期进一步进行研究。