不同贮藏温度对刺梨原汁中总黄酮含量的影响

刘易伟，陈 萍，卿云光，耿 宁，黄 兴

（黔南州检验检测院，贵州都匀 558000）

刺梨（Rosa roxburghii）属蔷薇科，又名山王果、刺玫果、刺菠萝、文先果等。刺梨味酸甜、肉质肥厚，果实富含黄酮类化合物、多糖、多种维生素、胡萝卜素、多种氨基酸和矿物质元素等[1-4]。刺梨具有抗氧化、抗衰老；抗肿瘤、抗癌；解毒、护肝、抑菌、降血糖作用[5-7]。刺梨原汁是用新鲜刺梨果实压榨而得的浆汁，刺梨原汁能促进胃液分泌，对平滑肌收缩运动具有明显的抑制作用，对免疫功能有增强作用[8]。有动物实验表明，刺梨原汁对动脉粥样硬化有降低作用[9]。现如今，人们对食品的要求越来越高，更加考虑食品的营养价值。刺梨因其丰富的营养价值和药用价值，在全国范围内成为研究的焦点，更是贵州省重点发展的农产品，榨汁不仅浓缩了刺梨的营养，丰富了口感，还能作为刺梨产品深加工的原材料，同时能避免由于刺梨鲜果的保存不易带来的营养流失和浪费。

黄酮类化合物是刺梨原汁中一种重要的营养物质，常用于测定总黄酮的方法有分光光度法[10-12]、液相色谱法[13-14]、荧光法[15]等。测定总黄酮的方法常用分光光度法和液相色谱法，液相色谱法主要应用于单一黄酮化合物的测定[16]。分光光度法操作简单，测定成本较低，可直接吸取样液进行试验，大大简化了提取步骤，节省了样品处理的时间，平均回收率达到100.3%[17]。刺梨原汁中总黄酮的含量相对较高，超过了茶叶[10]、洋葱[18-19]等，刺梨原汁为刺梨鲜果榨汁所得，总黄酮含量高于刺梨鲜果，但活性物质易受温度影响，因此采用分光光度计检测不同温度下刺梨原汁的总黄酮含量变化，研究温度以及贮藏时间对刺梨原汁的总黄酮含量的具体影响，为今后研究刺梨原汁及其他刺梨产品的总黄酮检测提供理论基础，也为刺梨产品后续的开发研究提供技术支撑。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

刺梨原汁（包装方式：棕色玻璃瓶灌装），龙里产区（样品1）；刺梨原汁，贵定产区（样品2）；刺梨原汁，独山产区（样品3）；甲醇，分析纯；乙醇，分析纯；芦丁标准品（含量为92.4%）购于中国食品药品检定研究院。

TU-1901紫外可见分风光光度计，北京普析通用仪器有限公司；BS224S电子天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；SC-66HL冰箱，海尔；SPX-250BⅢ恒温培养箱，天津市泰斯特仪器有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 样品处理

将样品分别放置于-24 ℃、-14 ℃、-7 ℃、4 ℃、20 ℃、30 ℃下储存，放置前测定一次，之后每月进行一次总黄酮的测定，共测定7次。检测方法参考耿宁[17]、T/GZSX 081—2021[20]中的测定方法，以芦丁标准溶液为对照，甲醇溶液调零，1 cm比色皿，360 nm处进行吸光度的测定。

1.2.2 标准溶液的配制

精确称取芦丁标准品108.4 mg于100 mL容量瓶内，用甲醇定容至刻度，得到芦丁储备液 1.002 mg·mL-1的芦丁储备溶液，分别稀释至 1.00 μg·mL-1、2.00 μg·mL-1、3.00 μg·mL-1、4.00 μg·mL-1、5.00 μg·mL-1和6.00 μg·mL-1芦丁标准溶液，以甲醇溶液为零点。

1.2.3 总黄酮的测定

称取1 g（精确至0.01 g）的样品（若为冷冻样品需提前解冻），用乙醇定容至25 mL，摇匀后，超声提取20 min，室温静置30 min，吸取1 mL上清液于25 mL比色管中，用甲醇定容后，用进行分光光度计测定。每个样品做3个平行样，求平均值。

2 结果与讨论

2.1 标准曲线的绘制

将配制好的不同浓度的芦丁标准溶液进行测定，并制得标准曲线，得到回归方程，见表1。

表1 各月芦丁标准曲线及相关系数

2.2 刺梨原汁中总黄酮含量测定结果

应用分光光度法检测，并对照标准曲线，按2.1所述公式计算可得到各个月不同温度下刺梨原汁总黄酮的含量，结果见图1～3。

图1 样品1刺梨原汁中总黄酮含量的测定结果

图2 样品2刺梨原汁中总黄酮含量的测定结果

由图1～图3可看出，在贮藏过程中总黄酮的变化趋势一致，随着贮藏时间的增加，总黄酮含量都呈下降趋势，且贮藏温度不同，下降速度也不同。随着贮藏温度的升高，总黄酮含量降低程度更加明显，可以看出贮藏温度对刺梨原汁的总黄酮存在一定的影响。以较低的温度贮藏，能够更好地保持刺梨原汁中的总黄酮的含量。以样品1为例，-24 ℃下贮藏时间为6个月时的总黄酮含量与4 ℃下贮藏时间为4个月时的含量基本接近；以样品2为例，4 ℃贮藏6个月和20 ℃、30 ℃贮藏3个月时的总黄酮含量相近，说明在低温的条件下，总黄酮的降解速率更低。贮藏温度在-24 ℃、-14 ℃和-7 ℃时，总黄酮含量的降低速率相对缓慢，4 ℃居中，20 ℃和 30 ℃条件下，总黄酮含量下降较快。随着贮藏时间的增加，总黄酮含量逐渐降低，特别是在较高温度的情况下，总黄酮含量降低更加明显。在半年的储存过程中，总黄酮都有一定程度的降解，贮藏温度越低，总黄酮含量相对越稳定，更有利于刺梨原汁中黄酮类化合物的活性保持。

图3 样品3刺梨原汁中总黄酮含量的测定结果

3 结论

刺梨原汁中含有丰富的黄酮类化合物，黄酮类化合物具有良好的清除自由基、抗氧化、抗衰老作用[21]，总黄酮含量受温度影响较大，在较高贮藏温度下，总黄酮含量降低较快，只有在较低的温度条件下，总黄酮的含量下降较为缓慢。家庭冰箱常用 4 ℃保存食物，4 ℃下刺梨原汁的总黄酮含量在短时间内相对稳定，可以作为家庭保存刺梨原汁的推荐温度，而企业在大量储存刺梨原汁时，可以冷冻保存，且储存时间不宜过长。本实验采用分光光度法对刺梨原汁中总黄酮含量进行测定，简化了操作步骤，减少耗材的使用，无需大型检验设备即可完成检测，具有更高的可行性，更适合微小企业进行品质分析。刺梨原汁因其丰富的营养价值，正越来越受到人们的关注，通过研究其总黄酮含量在不同温度和贮藏条件下的变化，为刺梨原汁的销售和储运提供理论依据。