免疫增强剂对鲤血清中免疫酶指标的影响

张振国，罗 璋，郝 爽，徐赟霞，尤宏争，赵良炜，王 禹，冯守明

( 1.天津市动物疫病预防控制中心，天津 300400；2.天津市水产研究所，天津 300221)

鲤(Cyprinuscarpio)是天津市淡水养殖主要养殖品种，随着其养殖规模增加，养殖密度也不断提高，同时也带来了病害的频发。近年来天津市养殖鲤病毒病较为严重，给养殖户带来较大的经济损失。目前困扰天津市鲤养殖的主要是鲤浮肿病毒(Carp edema virus)，检出率非常高，该病毒2016年在国内首次被发现，且死亡率较高[1]，还有困扰鲤养殖的锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus)一直没有较好的治疗方法。 由于鱼类病毒病还没有特效药物来治疗，因此主要是靠预防为主，即降低养殖密度，调节水质，增强鱼体抵抗力等。本试验中对鲤投喂一种复合免疫增强剂，主要成分为多糖类、中草药以及维生素类，可有效提高鱼体血清中免疫酶的含量，对预防鱼类病毒病起到重要作用。

1 材料与方法

1.1 免疫增强剂饲料的制备

复合免疫增强剂为天津市动物疫病预防控制中心自制，主要成分是多糖类、中草药以及维生素类免疫增强剂。将普通饲料粉碎，添加1%的复合免疫增强剂混匀，通过小型饵料机制备出大小合适的饲料。

1.2 试验用鱼与饲养条件

试验用鲤购自天津金锁养殖专业合作社，大小为(50.6±5.3)g，养殖试验在循环水系统中进行，水温控制在(25±1)℃。每天9:00和16:00各投喂两次饲料，驯化1周摄食正常后开展试验。

1.3 试验设计

试验分两组：普通饲料组和复合免疫增强剂饲料组，每组30尾鱼，试验开始后第7天、第14天、第21天和第28天采血，每组采3尾鱼，血样静置4 ℃过夜，3 000 r/min离心后取上清，测定血清中免疫酶的含量。

1.4 免疫指标的测定

测定血清中溶菌酶(LZM)、超氧化物气化酶(SOD)和补体C3含量，试剂盒购自上海纪宁实业有限公司，采用双抗夹心法测定，450 nm波长下测定OD值，每个指标均做标准曲线。依据预试验结果，首先将血清稀释10倍，再进行测定。

2 结果

2.1 对溶菌酶含量的影响

鲤血清中溶菌酶含量的标准曲线见图1，R2等于0.995，数据结果有效。

图1 溶菌酶标准曲线

总体来看，免疫增强剂可显著提高鲤血清中LZM活性，随着时间呈现先升高后降低的趋势，1周后，免疫组与对照组LZM活性无显著性差异； 2周后，免疫组LZM活性达到(27.93±3.63)U/mL ，显著高于正常饲料组LZM活性(14.21±0.87)U/mL(P<0.05)； 3周后LZM活性下降为(21.79±3.03)U/mL，与2周时有显著性差异(P<0.05)；4周后LZM活性显著下降，与基础饲料组相当。见图2。

注：不同字母表示组间差异显著(P<0.05)，下同。图2 复合免疫增强剂对鲤血清中溶菌酶含量的影响

2.2 对超氧化物歧化酶含量的影响

鲤血清中超氧化物歧化酶含量的标准曲线见图3，R2等于0.999，数据结果有效。

图3 超氧化物歧化酶标准曲线

总体来看，免疫增强剂可显著提高鲤血清SOD活性，随着时间呈现先升高后降低的趋势，1周后，免疫组与对照组SOD活性无显著性差异；2周后，免疫组SOD活性达到456.43±59.96 U/mL，显著高于正常饲料组SOD活性346.43±46.91 U/mL(P<0.05)；3周后SOD活性下降为416.43±45.96 U/mL，但与2周时差异不显著(P>0.05)；4周后SOD活性显著下降，与基础饲料组相当(见图4)。

图4 复合免疫增强剂对鲤血清中超氧化物歧化酶含量的影响

2.3 对补体C3含量的影响

鲤血清中补体C3含量的标准曲线见图5，R2等于0.998，数据结果有效。

图5 补体C3标准曲线

总体来看，免疫增强剂可显著提高鲤血清补体C3含量，随着时间呈现先升高后降低的趋势， 1周后，免疫组与对照组血清补体C3含量无显著性差异；2周后，免疫组血清补体C3含量达到523.57±26.10 μg/mL ，显著高于正常饲料组补体C3含量391.07±29.36 μg /mL(P<0.05)； 3周后补体C3含量下降为491.43±60.89 μg/mL，但与2周时差异不显著(P>0.05)；4周后补体C3含量显著下降，与基础饲料组相当。见图6。

图6 复合免疫增强剂对鲤血清中补体C3含量的影响

3 讨论与结论

研究表明：投喂复合免疫制剂后德国镜鲤的白细胞吞噬率和红细胞C3b受体花环率显著高于对照组，人工感染死亡率低于对照组[2]。复合中草药制剂投喂黄颡鱼30 d后，黄颡鱼血液中白细胞的吞噬活性、血清中溶菌酶和补体活性均显著高于对照组[3]。投喂免疫增强剂后大菱鲆和血鹦鹉的溶菌酶活性、碱性磷酸酶活性和总超氧化物歧化酶活性皆显著高于对照组[4]。复方中草药制剂投喂牙鲆30 d后，血清中碱性磷酸酶(ALP)、酸性磷酸酶(ACP)、超氧化物歧化酶(SOD)以及溶菌酶(LZM)活性水平均显著高于对照组，并提高牙鲆抗迟钝爱德华氏菌感染能力[5]。复合免疫增强剂投喂金鳟14 d后，溶菌酶(LZM)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性及补体C3的含量显著高于对照组，并提高金鳟对细菌病的抵抗力[6]。免疫增强剂不仅可以提高鱼类的非特异性免疫功能，还对对虾、蟹、鳖、刺参等水产养殖动物具有较好的疾病预防功能[7-10]。投喂鲤本复方免疫增强剂14 d后，其血清中溶菌酶、超氧化物歧化酶以及补体C3的含量显著提高，进而提高鱼体非特异性免疫力，对预防鲤疾病起到了重要的作用，但在养殖过程中需要间隔投喂。