高效液相色谱法测定盐酸莫西沙星葡萄糖注射液中枸橼酸钠含量

彭 力，肖中元，程永刚，唐佳丽，郭 伟，王永红

（西南药业股份有限公司，重庆 400038）

盐酸莫西沙星为广谱、高效、低毒性的第4 代氟喹诺酮类抗菌药物，通过抑制细菌的DNA 螺旋酶A 亚单位和拓扑异构酶Ⅳ的活性，阻断DNA 的复制，发挥杀菌作用，对社区获得性肺炎、慢性支气管炎的急性发作、急性鼻窦炎、泌尿系统感染、皮肤及软组织感染均有较好疗效［1-4］。其上市产品有片剂、滴眼液、氯化钠注射液等，在研剂型有泡腾片、栓剂、微囊等［5-8］。目前，其大容量注射液仅有盐酸莫西沙星氯化钠注射液上市销售，该产品在低温条件下易结晶析出。为解决低温析出问题，前期试验中进行了盐酸莫西沙星葡萄糖注射液的研究。通过处方优化在样品中加入一定比例的枸橼酸钠作为稳定剂，有效解决了主药低温结晶析出问题。稳定剂枸橼酸钠的含量超标会影响产品质量，其含量测定方法包括滴定法、离子交换色谱法、高效液相色谱（HPLC）法、液相色谱质谱联用法、紫外-可见分光光度法等［9-15］，但尚未查询到盐酸莫西沙星葡萄糖注射液中枸橼酸钠的含量测定方法。为此，本研究中建立了测定其中枸橼酸钠含量的HPLC 法。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Arium 611UF型超纯水制备仪（德国Sartorius公司）；WATERS2695-2996型高效液相色谱仪（配有Millenium32液相色谱数据工作站）。PL203型电子天平（精度为千分之一），XS205 型电子分析天平（精度为十万分之一），S210型pH计，均购自瑞士梅特勒-托利多公司。

1.2 试药

枸橼酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号为100396-200301，含量为100%）；盐酸莫西沙星葡萄糖注射液（西南药业股份有限公司，批号分别为20110901，20110902，20110903）；磷酸二氢钾、磷酸（重庆川东化工<集团>有限公司）；甲醇（色谱纯，赛默飞世尔科技公司）；水为超纯水；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：安捷伦Zorbax-SB C18柱（250 mm×4.6 mm，5 µm）；流动相：A 为甲醇，B 为 50 mmol/L 磷酸二氢钾水溶液（用磷酸调pH至2.2），梯度洗脱［12］（洗脱程序见表1）；流速：0.9 mL/ min；检测波长：210 nm；进样量：20µL。

表1 流动相梯度洗脱程序（%）Tab.1 Procedure of gradient elution of mobile phase（%）

2.2 溶液制备

直接取盐酸莫西沙星葡萄糖注射液样品作为供试品溶液。取枸橼酸对照品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释成每1 mL 含0.64 mg 的对照品贮备液。精密量取对照品贮备液适量，加水定量稀释成每1 mL 含枸橼酸0.07 mg 的对照品溶液。按处方工艺配制不含枸橼酸钠的溶液，作为空白溶液。

2.3 方法学考察

破坏性试验：取2.2 项下供试品溶液适量，分别用强酸、强碱、高温、强光、强氧极端条件破坏。取破坏后的和未破坏的供试品溶液及空白溶液各适量，按2.1 项下色谱条件进样测定，记录色谱图。结果供试品溶液在高温和强碱条件下会被破坏而产生杂质，枸橼酸钠含量波动在2%～3%范围内，其他条件下较稳定。各破坏条件下枸橼酸主峰与其他物质峰的基线分离较好，空白溶液无干扰，表明方法专属性良好。色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图Fig.1 HPLC chromatograms

线性关系考察：分别精密量取2.2项下对照品贮备液适量，加水稀释成6 个浓度梯度，按2.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以进样质量浓度为横坐标（X，mg/mL）、峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，得回归方程Y=8.47 × 105X+379.91（r=0.998，n=6）。结果表明，枸橼酸钠质量浓度在0.078 34～0.141 98 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

中间精密度试验：由2个操作员在不同时间各取供试品溶液6 份，分别按2.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果12 份供试品溶液的平均质量浓度为0.102 mg/mL，RSD为1.59%（n=12），表明仪器中间精密度良好。

重复性试验：取2.2 项下供试品溶液6 份，分别按2.1项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果6份供试品溶液的平均质量浓度为0.103 mg/ mL，RSD为1.71%（n=6），表明方法重复性良好。

稳定性试验：取2.2 项下供试品溶液适量，分别于室温下放置0，2，4，6，8，12，24 h时按2.1项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果的RSD为1.18%（n= 7），表明供试品溶液在室温下放置24 h内稳定性良好。

加样回收试验：取2.2项下对照品贮备液和空白溶液各适量，混匀，配制成高、中、低浓度的溶液，平行3份，按2.1项下色谱条件进样测定，按外标法以峰面积计算回收率。结果见表2。

表2 加样回收试验结果（n=9）Tab.2 Results of the recovery test（n=9）

2.3.4 样品含量测定

取3批（批号分别为20110901，20110902，20110903）样品，依法制备供试品溶液，按2.1 项下色谱条件进样测定3次，以峰面积按外标法计算得枸橼酸钠的含量分别为0.103，0.102，0.104 mg/mL（n=3）。

3 讨论

3.1 检测波长选择

配制质量浓度为0.2 mg/ mL 的枸橼酸对照品溶液，于190～400 nm 波长范围内扫描，结果在210 nm 波长处有较大吸收，故选择210 nm作为检测波长。

3.2 洗脱程序选择

参考文献［12］，枸橼酸峰与相邻峰分离度小于1.5，且样品中其他成分在低比例甲醇中不能完全洗脱，故对流动相比例、流速、pH等进行优化。在枸橼酸测定完成后提高甲醇比例，采用梯度洗脱方法洗出其他成分，防止因长时间滞留色谱柱中与填料发生不可逆结合，保护色谱柱，提高其使用寿命。

3.3 含量计算

处方中以枸橼酸钠作为稳定剂。枸橼酸钠溶液解离的枸橼酸根产生紫外吸收，钠离子无紫外吸收，且枸橼酸根在低pH 条件下会形成枸橼酸。因此，通过测定溶液中枸橼酸的含量，再通过枸橼酸钠与枸橼酸分子量之比（1.53∶1）计算枸橼酸钠的含量。

3.4 方法评价

本研究中建立的方法操作简便、结果准确、灵敏度高，可用于盐酸莫西沙星葡萄糖注射液中枸橼酸钠的含量测定。